黃慧云

作者單位:710077 西安醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院

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TCF-4、MMP-7和Survivin在結(jié)直腸癌中的表達(dá)研究

黃慧云

作者單位:710077 西安醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院

【摘要】目的比較TCF-4、MMP-7和Survivin蛋白在直腸癌組織與正常黏膜組織中的表達(dá)情況，分析三者與結(jié)直腸癌病理特征的相關(guān)性。方法選取68例結(jié)直腸癌手術(shù)切除石蠟包埋標(biāo)本的結(jié)直腸癌組織4 μm連續(xù)切片數(shù)張作為結(jié)直腸癌組，隨機(jī)選取50例結(jié)直腸癌兩端均為陰性切緣組織的正常粘膜組織4 μm連續(xù)切片數(shù)張作為正常粘膜組，比較TCF-4、MMP-7和Survivin蛋白在直腸癌組織與正常黏膜組織中的表達(dá)情況以及TCF-4、MMP-7和Survivin蛋白在直腸癌組織中的表達(dá)與其病理特征的相關(guān)性。結(jié)果TCF-4、MMP-7及Survivin蛋白在結(jié)直腸癌中的陽性表達(dá)率均顯著高于正常黏膜組織，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；結(jié)直腸癌中TCF-4、Survivin蛋白表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、Dukes臨床分期相關(guān)(P<0.05)，與性別、年齡、腫瘤部位、腫瘤大小、組織學(xué)類型、浸潤深度、分化程度、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移均無相關(guān)性(P>0.05)；MMP-7蛋白表達(dá)在浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、Dukes臨床分期顯著相關(guān)(P<0.05)，與性別、年齡、腫瘤部位、腫瘤大小、組織學(xué)類型、分化程度、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移均無相關(guān)性(P>0.05)。結(jié)論TCF-4、MMP-7和Survivin與結(jié)直腸癌的發(fā)生和發(fā)展有緊密聯(lián)系，三者可能參與了結(jié)直腸癌的惡性生長過程。

【關(guān)鍵詞】TCF-4；MMP-7；Survivin；直腸癌；病理特征

(ThePracticalJournalofCancer,2015,30:665～668)

結(jié)直腸癌屬于消化系常見惡性腫瘤，發(fā)病機(jī)制復(fù)雜。目前，分子生物學(xué)和遺傳學(xué)研究結(jié)果顯示，結(jié)直腸癌的發(fā)生與癌基因和抑癌基因改變、細(xì)胞凋亡機(jī)能受限、信號傳導(dǎo)通路異常以及端粒酶活化等有緊密聯(lián)系[1]。TCF-4、MMP-7和Survivin均為Wnt信號通路重要的調(diào)控分子，在結(jié)直腸癌的發(fā)生和病情進(jìn)展中有重要的調(diào)節(jié)作用[2-3]。現(xiàn)對TCF-4、MMP-7和Survivin蛋白在直腸癌組織與正常黏膜組織中的表達(dá)情況進(jìn)行比較，分析三者與結(jié)直腸癌病理特征之間的相關(guān)性，為早期診斷和靶向治療提供參考，報告如下。

1材料與方法

1.1一般資料

選取2013年4月至2014年4月我院收治的68例結(jié)直腸癌患者作為研究對象。其中男性患者41例，女性患者27例，患者年齡為27～80歲。所有患者均行根治性切除術(shù)，排除術(shù)前接受放療、化療或免疫治療者以及有遺傳性結(jié)直腸腫瘤和其它惡性腫瘤病史者。所有切除標(biāo)本均經(jīng)病理組織學(xué)檢查證實且存在無瘤切緣，按照常規(guī)操作使用10%中性福爾馬林溶液固定、石蠟包埋，選取68例標(biāo)本的結(jié)直腸癌組織4 μm連續(xù)切片數(shù)張作為結(jié)直腸癌組，隨機(jī)選取50例結(jié)直腸癌兩端均為陰性切緣組織的正常粘膜組織4 μm連續(xù)切片數(shù)張作為正常粘膜組。所有患者均簽署知情同意書。

1.2方法

應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色技術(shù)(Elivision)檢測正常黏膜組織和結(jié)直腸癌組織中TCF-4、MMP-7及Survivin蛋白的表達(dá)情況，分析三者與結(jié)直腸癌患者病理特征之間的關(guān)系。使用已知相應(yīng)蛋白陽性的標(biāo)本作為陽性對照，用PBS緩沖液代替一抗作為陰性對照。兔抗人TCF-4單克隆抗體、鼠抗人MMP-7單克隆抗體、兔抗人Survivin單克隆抗體均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.3觀察指標(biāo)

染色結(jié)果陽性反應(yīng)判斷標(biāo)準(zhǔn)：TCF-4陽性物質(zhì)定位于細(xì)胞核，呈黃色或棕黃色顆粒；MMP-7陽性物質(zhì)主要定位于細(xì)胞質(zhì)，呈黃色或棕黃色；Survivin陽性物質(zhì)主要定位于細(xì)胞核，呈黃色或棕黃色顆粒[4]。

于高倍鏡(×400)下隨機(jī)選擇10個視野進(jìn)行陽性細(xì)胞計數(shù)，計算陽性細(xì)胞所占視野內(nèi)細(xì)胞總數(shù)的比例，取平均值作為結(jié)果進(jìn)行評分，0分：<10%；1分：10%～25%；2分：26%～50%；3分：51%～75%；4分：>75%。觀察切片視野內(nèi)細(xì)胞著色強(qiáng)度并進(jìn)行評分，0分：不著色；1分：淺黃色；2分：棕黃色；3分：棕褐色。陽性細(xì)胞所占視野內(nèi)細(xì)胞總數(shù)的比例評分×細(xì)胞著色強(qiáng)度評分=總評分。TCF-4、MMP-7及Survivin蛋白陽性表達(dá)判斷標(biāo)準(zhǔn)：陽性：總評分≥2分；陰性：總評分0～1分[5]。

1.4統(tǒng)計學(xué)分析

應(yīng)用SPSS 19.0軟件分析數(shù)據(jù)，計數(shù)資料以百分率表示，差異性比較采用χ2檢驗，以P<0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1TCF-4、MMP-7及Survivin蛋白在正常黏膜組織和結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)情況比較

TCF-4蛋白定位于細(xì)胞核，呈黃色或棕黃色顆粒，MMP-7蛋白主要定位于細(xì)胞質(zhì)，呈黃色或棕黃色，Survivin蛋白主要定位于細(xì)胞核，呈黃色或棕黃色顆粒。TCF-4、MMP-7及Survivin蛋白在結(jié)直腸癌中的陽性表達(dá)率均顯著高于正常黏膜組織，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)(表1)。

表1　TCF-4、MMP-7及Survivin蛋白在正常黏膜組織和結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)情況比較(例，%)

2.2TCF-4、MMP-7及Survivin蛋白在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)與其臨床病理特征的關(guān)系

結(jié)直腸癌中TCF-4、Survivin蛋白表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、Dukes臨床分期存在顯著相關(guān)性(P<0.05)，與性別、年齡、腫瘤部位、腫瘤大小、組織學(xué)類型、浸潤深度、分化程度、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移均無相關(guān)性(P>0.05)；MMP-7蛋白的表達(dá)與浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、Dukes臨床分期存在顯著相關(guān)性(P<0.05)，與性別、年齡、腫瘤部位、腫瘤大小、組織學(xué)類型、分化程度、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移上均無相關(guān)性(P>0.05)(表2)。

3討論

結(jié)直腸癌屬于臨床常見惡性腫瘤，其癌變機(jī)制涉及遺傳、環(huán)境、社會等多方面因素[6]。目前，隨著國內(nèi)居民生活水平的提高和飲食結(jié)構(gòu)的改變，結(jié)直腸癌發(fā)病率呈現(xiàn)逐年升高趨勢。大量臨床研究表明，結(jié)直腸癌的發(fā)生與癌基因和抑癌基因改變、細(xì)胞凋亡機(jī)能受限、多條信號傳導(dǎo)通路異常以及端粒酶活化等有緊密聯(lián)系[7]。因此，從分子水平研究結(jié)直腸癌的發(fā)生和發(fā)展機(jī)制，對結(jié)直腸癌癌的早期診斷和治療的具有重要意義。

表2　TCF-4、MMP-7及Survivin蛋白在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)與其臨床病理特征的關(guān)系/例

臨床研究表明，Wnt/β-catenin/TCF信號通路(一下均簡稱Wnt信號通路)在生物的細(xì)胞分化、形態(tài)發(fā)生、結(jié)構(gòu)形成和腫瘤演進(jìn)等方面起著重要作用，TCF-4、MMP-7和Survivin均為Wnt信號通路重要的調(diào)控分子[8]，本研究主要對三者在直腸癌組織與正常黏膜組織中的表達(dá)情況及其與結(jié)直腸癌病理特征之間的相關(guān)性進(jìn)行研究。

TCF-4是Wnt信號通路的核內(nèi)非常關(guān)鍵的信號因子，是細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄調(diào)控的分子開關(guān)，在Wnt通路異常激活時，細(xì)胞質(zhì)中的β-catenin躲避復(fù)合體的攻擊進(jìn)入細(xì)胞核，并與TCF-4發(fā)生特異性結(jié)合，啟動下游基因的表達(dá)，對細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化有重要作用[9]。Xie等[10]的研究表明，TCF-4 mRNA是43株結(jié)腸癌細(xì)胞系中共同表達(dá)的mRNA，且在結(jié)直腸癌中表達(dá)水平最高，提示TCF-4mRNA與結(jié)腸癌的發(fā)生有緊密聯(lián)系且在結(jié)腸癌發(fā)展過程中有促進(jìn)的作用。本研究中，TCF-4蛋白在結(jié)直腸癌中的陽性表達(dá)率均顯著高于正常黏膜組織，與上述研究報道相符，提示TCF-4參與了結(jié)直腸癌的發(fā)生和發(fā)展。本研究中結(jié)直腸癌TCF-4蛋白的表達(dá)在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、Dukes臨床分期上存在顯著差異。Bishnupuri等[11]的采用免疫組化法研究非小細(xì)胞肺癌中β-carenin和TCF-4蛋白的表達(dá)，也發(fā)現(xiàn)TCF-4蛋白的高表達(dá)與NSCLC的分化密切相關(guān)。提示TCF-4的表達(dá)與結(jié)直腸癌惡性生物學(xué)行為有密切關(guān)系。

MMP-7和Survivin是核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子TCF-4的下游靶基因，三者相互作用，協(xié)同參與了多種腫瘤的發(fā)生和發(fā)展過程[12]。其中MMP-7屬于MMPs家族的成員，在人癌組織中呈過度表達(dá)水平[13]。臨床研究表明，MMP-7與多種癌癥(包括胃癌、結(jié)直腸癌、胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌等)的侵襲和轉(zhuǎn)移均有緊密聯(lián)系[14]。本研究中MMP-7蛋白在結(jié)直腸癌中的陽性表達(dá)率均顯著高于正常黏膜組織，MMP-7蛋白的表達(dá)在浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、Dukes臨床分期上存在顯著差異，提示MMP-7與結(jié)直腸癌的進(jìn)展密切相關(guān)。Survivin則是目前發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)的凋亡抑制因子，與細(xì)胞生長周期密切相關(guān)，可參與細(xì)胞周期有絲分裂的調(diào)控，最終抑制細(xì)胞凋亡[15]。本研究中Survivin蛋白在結(jié)直腸癌中的陽性表達(dá)率顯著高于正常黏膜組織，Survivin蛋白的表達(dá)在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、Dukes臨床分期上存在顯著差異，提示Survivin參與了結(jié)直腸癌的發(fā)生和發(fā)展以及惡性生長過程，與聶祝青等[16]的研究報道相符。

綜上所述，TCF-4、MMP-7和Survivin與結(jié)直腸癌的發(fā)生和發(fā)展有緊密聯(lián)系，三者可能參與了結(jié)直腸癌的惡性生長過程，可作為結(jié)直腸癌的早期診斷、靶向治療以及預(yù)后判斷的參考指標(biāo)。

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(編輯：吳小紅)

The Expression of TCF-4,MMP-7 and Survivin in Colorectal Cancer

HUANGHuiyun.TheFirstAffiliatedHospitalofXi'anMedicalUniversity,Xi'an,710077

【Abstract】ObjectiveTo explore the expression of TCF-4,MMP-7 and survivin in colorectal cancer tissues and normal mucosa tissues,and its correlation with pathological features.MethodsColorectal cancer tissues 4 μm in 68 cases of patients with colorectal cancer were researched as the colorectal cancer group,serial section of 50 cases(from the colorectal cancer group) with 2 negative colorectal cancer margin of normal mucosa tissues 4 μm were number were the normal mucosa group.The expressions of TCF-4,MMP-7 and survivin in colorectal cancer tissues and normal mucosa tissues were compared,and the relationship between the expression of TCF-4,MMP-7,survivin and pathological features of colorectal cancer were analyzed.ResultsThe positive expression rates of TCF-4,MMP-7,survivin in colorectal cancer group were higher than those of the normal mucosa group(P<0.05);The expression of TCF-4,Survivin in in colorectal cancer tissues were related with lymph node metastasis and Dukes clinical stage (P<0.05);The expression of TCF-4,Survivin in in colorectal cancer tissues were not related with sex,age,tumor location,tumor size,pathological patterns,depth of invasion,differentiation,distant metastasis(P>0.05);The expression of MMP-7 was related with depth of invasion,lymph node metastasis,Dukes clinical stages(P<0.05);The expression of MMP-7 was not related with sex,age,tumor location,tumor size,pathological patterns,differentiation,distant metastasis (P>0.05).ConclusionThe expression of TCF-4,MMP-7,Survivin are related with development of colorectal cancer,and they are involved in the malignant growth of colorectal cancer.

【Key words】TCF-4;MMP-7;Survivin;Colorectal cancer;Pathological feature

(收稿日期2014-09-15修回日期 2015-04-07)

中圖分類號：R735.3+5

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：1001-5930(2015)05-0665-04

DOI：10.3969/j.issn.1001-5930.2015.05.011