裴占陽， 劉忠偉， 葉棟國(guó)， 楊 婷， 高登慧， 歐德淵*

(1.貴州大學(xué) 動(dòng)物科學(xué)學(xué)院， 貴州 貴陽 550025； 2.貴州大學(xué) 貴州省農(nóng)業(yè)生物工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 貴州 貴陽 550025)

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貴州麒麟雞小腸肥大細(xì)胞的觀察

裴占陽1， 劉忠偉2， 葉棟國(guó)1， 楊 婷1， 高登慧1， 歐德淵1*

(1.貴州大學(xué) 動(dòng)物科學(xué)學(xué)院， 貴州 貴陽 550025； 2.貴州大學(xué) 貴州省農(nóng)業(yè)生物工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 貴州 貴陽 550025)

為了解貴州麒麟雞小腸黏膜的免疫狀態(tài)，揭示其與生長(zhǎng)速度緩慢的關(guān)系，剖取10只健康成年貴州麒麟雞小腸，采用改良甲苯胺藍(lán)染色對(duì)其肥大細(xì)胞的形態(tài)、分布及數(shù)量變化進(jìn)行觀察分析。結(jié)果表明：貴州麒麟雞小腸各段均有肥大細(xì)胞分布，其主要分布于黏膜固有層和黏膜下層，少量分布于黏膜下結(jié)締組織中，多為圓形、卵圓形或長(zhǎng)梭形；十二指腸中肥大細(xì)胞為(11.63±2.67)個(gè)/mm2，空腸為(37.88±8.17)個(gè)/mm2，回腸為(8.75±1.98)個(gè)/mm2，十二指腸、回腸與空腸中肥大細(xì)胞數(shù)量差異均極顯著(P<0.01)，十二指腸與回腸間差異不顯著(P>0.05)。貴州麒麟雞的生長(zhǎng)速度相對(duì)緩慢，可能與其十二指腸段的肥大細(xì)胞數(shù)量少有關(guān)。

貴州麒麟雞； 小腸； 肥大細(xì)胞

肥大細(xì)胞(mastcell，MC)是機(jī)體的一種重要黏膜免疫細(xì)胞，其合成和分泌的組織胺、五羥色胺、蛋白多糖、中性蛋白酶等生物活性物質(zhì)在動(dòng)物健康和疾病預(yù)防方面有著重要作用[1]。自Ehrlich P首次發(fā)現(xiàn)并命名肥大細(xì)胞以來[2]，對(duì)其生物學(xué)研究表明，不同動(dòng)物之間肥大細(xì)胞存在明顯差異，其數(shù)量和分布可以反映動(dòng)物的局部免疫水平[3-4]。肥大細(xì)胞是天然免疫的效應(yīng)細(xì)胞之一，其不僅參與機(jī)體的免疫防御和免疫調(diào)節(jié)，而且反映機(jī)體的免疫水平。機(jī)體的肥大細(xì)胞分為2種：一種是分布于黏膜固有層中的黏膜肥大細(xì)胞(MMC)，主要功能是參與宿主的免疫反應(yīng)；另一種是分布于黏膜下層結(jié)締組織中的結(jié)締組織肥大細(xì)胞(CTMC)，主要功能是參與血管生成和組織代謝[5]。此外，肥大細(xì)胞還與主要分布于十二指腸的淋巴細(xì)胞以及分布于回腸的杯狀細(xì)胞相互作用，共同保持腸黏膜免疫系統(tǒng)的平衡[6]。

麒麟雞又稱倒毛雞、翻毛雞、卷毛雞等，因羽毛向外翻卷，形如麒麟而得名，是我國(guó)特有雞種，主要分布于兩廣、江浙、福建、湖南、貴州等地，但是因地域性差異，各地麒麟雞的種質(zhì)特性有較大區(qū)別。貴州麒麟雞是黔東南小香雞變種，該雞肉質(zhì)鮮美，并具有治療關(guān)節(jié)痛、嘔吐和婦科病等作用，但其生長(zhǎng)速度慢、飼料消耗大、抗病力弱，現(xiàn)處于瀕臨滅絕狀態(tài)。目前，關(guān)于肉雞、烏骨雞、貴州黃雞等禽類肥大細(xì)胞的數(shù)量和分布均已有報(bào)道[7-9]，但關(guān)于麒麟雞肥大細(xì)胞的研究未見報(bào)道。為此，筆者對(duì)貴州麒麟雞小腸肥大細(xì)胞進(jìn)行研究，以期揭示其是否與生長(zhǎng)速度緩慢有關(guān)，為該種群的保護(hù)和養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)化提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 樣品處理

選擇貴州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院養(yǎng)雞場(chǎng)自繁的健康成年貴州麒麟雞10只，平均體重(1 200±100)g，頸靜脈放血致死后立即取出十二指腸、空腸、回腸樣品，生理鹽水沖洗后修成1 cm3左右大小的組織塊，Carony’s液固定12 h，梯度酒精脫水，常規(guī)石蠟包埋，5 μm連續(xù)切片，隔5片取1片進(jìn)行染色，顯微鏡觀察、采圖。

1.2 染色方法

常規(guī)脫水，改良甲苯胺藍(lán)(MTB)染30～40 s，水洗片刻，30% PBS分化，鏡檢直至有鮮紅色顆粒細(xì)胞出現(xiàn)，脫水、透明，中性樹脂封片。

1.3 數(shù)據(jù)處理

各樣本隨機(jī)抽取不連續(xù)的切片3張，用網(wǎng)形測(cè)微器(0.5 mm，武漢光學(xué)儀器廠)在低倍鏡下記數(shù)每個(gè)視野內(nèi)肥大細(xì)胞的數(shù)量，每張切片隨機(jī)計(jì)數(shù)10個(gè)視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)小方格(25 μm2)內(nèi)的肥大細(xì)胞，運(yùn)用Spass 17.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理、分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 肥大細(xì)胞的形態(tài)與分布

經(jīng)鏡檢，貴州麒麟雞小腸各段均有肥大細(xì)胞分布，但主要分布于黏膜固有層和黏膜下層，少量分布于黏膜下結(jié)締組織中。在低倍鏡下，肥大細(xì)胞形態(tài)多樣，但多為圓形、卵圓形或長(zhǎng)梭形，可見數(shù)個(gè)肥大細(xì)胞聚集在一起。在高倍鏡下，可見胞漿內(nèi)有紫紅色異染顆粒，胞核淡染，細(xì)胞核一般為圓形或橢圓形，位于中央或偏中央，常被胞質(zhì)顆粒掩蓋而不易分辨(圖示)。

圖示 貴州麒麟雞小腸各段肥大細(xì)胞的組織學(xué)切片

Fig. Histological slices of mast cells in various small intestine sections of Guizhou Kirin chicken

2.2 肥大細(xì)胞的數(shù)量

經(jīng)統(tǒng)計(jì)，貴州麒麟雞十二指腸中肥大細(xì)胞為(11.63±2.67)個(gè)/mm2，空腸為(37.88±8.17)個(gè)/mm2，回腸為(8.75±1.98)個(gè)/mm2，小腸中肥大細(xì)胞數(shù)量呈倒“V”型變化，即其從十二指腸到空腸增加，從空腸到回腸減少。經(jīng)差異顯著性分析得出，十二指腸、回腸與空腸中肥大細(xì)胞數(shù)量差異極顯著(P<0.01)，十二指腸與回腸間差異不顯著(P>0.05)。

3 結(jié)論與討論

小腸是食物消化和營(yíng)養(yǎng)吸收的主要場(chǎng)所，但小腸內(nèi)有大量微生物，小腸上皮又為單層柱狀上皮，導(dǎo)致抵御外物入侵的能力較低，因此小腸中存在的大量免疫細(xì)胞構(gòu)成了阻止病原物侵入體內(nèi)的重要免疫屏障[7]。研究結(jié)果表明，貴州麒麟雞小腸中肥大細(xì)胞多分布于黏膜固有層和黏膜下層等易表露于環(huán)境抗原的位點(diǎn)中，與其他動(dòng)物的分布特征類似，表明肥大細(xì)胞是小腸黏膜重要的免疫細(xì)胞。

十二指腸是動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)消化吸收的主要部位，肥大細(xì)胞分泌和合成大量的組胺和五羥色胺，這些胺類物質(zhì)在腸道蠕動(dòng)和營(yíng)養(yǎng)吸收中有重要作用[8]，腸道肥大細(xì)胞的數(shù)量多少?zèng)Q定動(dòng)物機(jī)體內(nèi)胺類物質(zhì)的含量，進(jìn)而反映動(dòng)物機(jī)體的營(yíng)養(yǎng)吸收水平。該段腸道肥大細(xì)胞數(shù)量多，說明其營(yíng)養(yǎng)吸收水平比較高，生長(zhǎng)速度相對(duì)較快；反之則營(yíng)養(yǎng)吸收水平比較低，生長(zhǎng)速度相對(duì)緩慢。王子旭[9]研究表明，肉雞小腸中肥大細(xì)胞的數(shù)量從十二指腸到空腸、回腸逐漸減少，小腸中肥大細(xì)胞主要集中在十二指腸段；王彤[10]研究表明，小鼠腸道肥大細(xì)胞的數(shù)量從十二指腸、空腸和回腸的順序逐漸減少；肖紅等[8]對(duì)泰和烏骨雞小腸中肥大細(xì)胞研究表明，小腸中肥大細(xì)胞主要分布在十二指腸段；游蓉麗等[11]研究表明，羊駝小腸中肥大細(xì)胞的數(shù)量從十二指腸至空腸、回腸表現(xiàn)出先減少后增多趨勢(shì)，但十二指腸中肥大細(xì)胞數(shù)量多于回場(chǎng)段，小腸中肥大細(xì)胞主要分布于十二指腸段；張文學(xué)等[12]研究表明，太行山獼猴空腸中肥大細(xì)胞數(shù)量顯著高于十二指腸和回腸，小腸中肥大細(xì)胞主要分布于空腸。研究結(jié)果表明，貴州麒麟雞小腸中肥大細(xì)胞數(shù)量從十二指腸至空腸、回腸表現(xiàn)先增多后減少趨勢(shì)，空腸中極顯著多于十二指腸和回腸，小腸中肥大細(xì)胞主要集中于空腸，與對(duì)太行山獼猴的研究結(jié)果[12]相似，與以上其他研究動(dòng)物間存在差異。侯進(jìn)懷[13]和占龍[14]研究表明，太行山獼猴的生長(zhǎng)速度低于南方獼猴，太行山獼猴生長(zhǎng)速度相對(duì)緩；黎觀紅[15]和陳潔波[16]研究表明，麒麟雞相對(duì)泰和烏骨雞的生長(zhǎng)速度較慢，而太行山獼猴和麒麟雞十二指腸段的肥大細(xì)胞數(shù)量均低于小腸其他腸段。因此推斷，貴州麒麟雞的生長(zhǎng)速度相對(duì)緩慢可能與其十二指腸段的肥大細(xì)胞數(shù)量少有關(guān)，但其具體生理作用有待進(jìn)一步研究。

[1] 周艷春，何韶衡.肥大細(xì)胞在細(xì)菌和病毒感染中的作用[J].中國(guó)病理生理雜志，2006，5(3)：607-611.

[2] Ehrilich P.Beiitrage zur und Praxis der Histologischen Farbury[D].Sachsen：University of Leipzig Ger-many，1878.

[3] 江 萍，許樂仁.綿羊肥大細(xì)胞中類胰蛋白酶的證實(shí)[J].解剖學(xué)報(bào)，1996，27(1)：92-95.

[4] 高登慧，許樂仁，姚紅艷.山羊肥大細(xì)胞組織化學(xué)及形態(tài)學(xué)研究[J].畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2000，31(1)：88-93.

[5] Gall S J.New concepts about the mast cell[J].N Eng J Med，1993，328(4):257.

[6] 陳付菊，陳耀星，王子旭，等.不同月齡山羊小腸黏膜免疫相關(guān)細(xì)胞的數(shù)量變化[J].畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2007，38(12)：1326-1367.

[7] 郭俊峰，歐德淵，高登慧，等.雛雞消化器官發(fā)育中肥大細(xì)胞的觀察[J].四川解剖學(xué)雜志，2012，3(1)：1-3.

[8] 肖 紅，周作紅，張家禾，等.泰和烏骨雞小腸肥大細(xì)胞的形態(tài)和分布特點(diǎn)[C]//中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì).中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物解剖學(xué)及組織胚胎學(xué)分會(huì)第十七次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集.北京：中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)，2012：460-465.

[9] 王子旭.鋅硒互作對(duì)肉雞腸黏膜結(jié)構(gòu)及黏膜免疫相關(guān)細(xì)胞影響的研究[D].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)，2003.

[10] 王 彤.小鼠消化道肥大細(xì)胞分布的定量研究[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)雜志，1996，6(1)：7-10.

[11] 游蓉麗，董常生，賀俊平，等.不同月齡羊駝小腸肥大細(xì)胞的數(shù)量變化研究[J].山西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2009，29(1)：11-15.

[12] 張文學(xué)，薛德明，胡兵役，等.太行山獼猴消化道肥大細(xì)胞分布的研究[J].河南師范大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，1997，25(3)：98-100.

[13] 侯進(jìn)懷，陳 莉，李全福，等.飼養(yǎng)條件下太行山獼猴幼仔某些生長(zhǎng)指標(biāo)的研究[J].河南師范大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，1999，27(2)：91-93.

[14] 和占龍，趙 遠(yuǎn)，魯帥堯，等.人工繁育幼年獼猴生長(zhǎng)指標(biāo)的研究[J].中國(guó)自然醫(yī)學(xué)雜志，2009，11(2)：84-86.

[15] 黎觀紅，瞿明仁，朱年華，等.泰和烏骨雞生長(zhǎng)曲線分析[J].江西畜牧獸醫(yī)雜志，2002(3)：6-7.

[16] 陳潔波，陶 林，杜炳旺，等.麒麟雞生長(zhǎng)、屠宰性能和肉品質(zhì)測(cè)定[J].家禽科學(xué)，2013(4)：16-20.

(責(zé)任編輯： 馮 衛(wèi))

Observation of Mast Cells in the Small Intestine of Guizhou Kirin Chicken

PEI Zhanyang1, LIU Zhongwei2, YE Dongguo1, YANG Ting1, GAO Denghui1, OU Deyuan1*

(1.CollegeofAnimalScience,GuizhouUniversity,Guiyang,Guizhou550025; 2.GuizhouKeyLaboratoryofAgriculturalBioengineering,GuizhouUniversity,Guiyang,Guizhou550025,China)

In order to understand the immune status of Guizhou Kirin chicken small intestine mucosa, revealing its relationship with the slow yrowth speed,the authorship dissected 10 healthy adult Guizhou Kirin chicken small intestine, by using MTB staining, the morphology, distribution and quantity changes of the MC were observed and analyzed.Results: Guizhou Kirin chicken small intestine has the mast cell distribution, mainly distributed in mucosa lamina propria and submucosa, a small amount of distribution in submucous connective tissue, mostly round, long ovoid or fusiform; Mast cells in the duodenum is (11.63±2.67)individuals/mm2, the jejunum is (37.88±8.17)individuals/mm2, the ileum is (8.75±1.98)individuals/mm2, Duodenum, ileum and jejunum difference in the number of mast cells was significant(P<0.01), the difference between the duodenum and ileum was not significant (P>0.05). The growing speed is relatively slow, which may be relevant to less mast cells in duodenum.

Guizhou Kirin chicken; small intestine; mast cells

2014-11-28； 2015-02-15修回

貴州省科技廳農(nóng)業(yè)攻關(guān)項(xiàng)目“貴州3個(gè)優(yōu)質(zhì)地方土雞保種選育與產(chǎn)業(yè)化關(guān)鍵技術(shù)研究及示范”[黔科合NZ字(2012)3007]；貴州省農(nóng)業(yè)動(dòng)植物育種合作項(xiàng)目“黔東南倒毛雞種質(zhì)資源保護(hù)與開發(fā)利用”[黔農(nóng)育專字(2013)010]

裴占陽(1987-)，男，在讀碩士，研究方向：動(dòng)物組織胚胎學(xué)與細(xì)胞生物學(xué)。E-mail:pzy08@139.com

*通訊作者：歐德淵(1971-)，男，教授，從事動(dòng)物病理學(xué)研究。E-mail: oyl1000@sina.com

1001-3601(2015)05-0260-0157-03

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