劉權(quán)忠， 黃國(guó)鵬

(1.重慶市南川區(qū)人民醫(yī)院耳鼻咽喉科，重慶 南川 408400 2.重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院大足醫(yī)院心內(nèi)科， 重慶 大足 402360)

喉癌是耳鼻咽喉-頭頸領(lǐng)域中常見惡性腫瘤，喉癌的診斷主要靠病理活檢［1］，在臨床上被確診為喉癌的患者大多處于癌癥中晚期，絕大多數(shù)已經(jīng)失去手術(shù)機(jī)會(huì)或術(shù)后易復(fù)發(fā)［2］，因而對(duì)喉癌的早診斷、早治療仍然是治療喉癌最有效的辦法。有研究［3］發(fā)現(xiàn)呼吸道黏液的分泌和調(diào)節(jié)與水通道蛋白1的表達(dá)密切相關(guān)，目前已有研究證實(shí)水通道蛋白1(aquaporins1，AQP1)在哮喘、肺水腫及鼻息肉等呼吸道疾病中具有重要作用，喉是呼吸道的一部分，而且研究［4］發(fā)現(xiàn):AQP1在許多腫瘤組織的微血管內(nèi)皮細(xì)胞中高度表達(dá)，參與腫瘤新生血管的形成，本文即探討AQPs1與喉癌病理特征的關(guān)系，探討AQPs1在喉癌的發(fā)生、發(fā)展發(fā)病過程中可能的作用和意義，為喉癌的臨床預(yù)防、早診斷與早治療提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象:選取2009年1月至2013年1月在本院耳鼻喉科接受手術(shù)治療的喉癌患者82例為喉癌組，所有患者術(shù)后標(biāo)本均經(jīng)病理學(xué)確診為鱗狀細(xì)胞癌，其中男39例，女43例，年齡(61.22±7.45)歲。另取同期本院健康體檢的離退休職工30例做為對(duì)照組，其中男14例，女16例，年齡(60.83 ±5.01)歲。所有研究對(duì)象均排除接受過放化療、嚴(yán)重心肝肺腎等重要臟器原發(fā)性疾病、感染性疾病、風(fēng)濕性疾病、糖尿病、貧血、四周內(nèi)接受非甾類抗炎藥物治療，對(duì)照組排除惡性腫瘤患者。

1.2 方 法

1.2.1 水通道蛋白1檢測(cè)的方法:健康對(duì)照組在體檢當(dāng)日晨、喉癌患者在術(shù)前1d清晨取空腹肘靜脈血3mL，于2h內(nèi)以4000r/min離心10min后取血清置于-20℃冰箱保存，集中采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)水通道蛋白1(AQP1)的水平，人AQP1-ELISA檢測(cè)試劑盒由BlueGene公司提供，檢測(cè)步驟嚴(yán)格按照說明書操作。

1.2.2 喉癌臨床病理特征及其標(biāo)準(zhǔn):根據(jù)病理檢查結(jié)果，按2002國(guó)際抗癌協(xié)會(huì)(UICC)喉癌TNM臨床分期方案［5］進(jìn)行TMN分期:0期、Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期及Ⅳ期;浸潤(rùn)深度T分期為:T1、T2、T3、T4期;組織學(xué)分類分為高分化、中分化和低分化三類;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移分為N0、N1及N2三種。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:采用SPSS16.0軟件包處理數(shù)據(jù)，計(jì)量數(shù)據(jù)采用均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，兩組資料樣本采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組資料比較采用單因素方差比較，相關(guān)性分析采用Spearman分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 喉癌組與正常對(duì)照組血清一般資料及AQP1水平的比較:喉癌組與正常對(duì)照組的年齡、性別比沒有顯著差異(P＞0.05)，喉癌組AQP1水平比健康對(duì)照組顯著增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見表1。

表1 喉癌組與正常對(duì)照組血清一般資料及AQP1水平的比較

2.2 喉癌患者AQP1變化與腫瘤臨床病理特征的關(guān)系:根據(jù)病理檢查結(jié)果，病理類型均為鱗狀細(xì)胞癌。TMN分期為:Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期及Ⅳ期分別為8例、38例、31例、5例;腫瘤組織學(xué)分化程度有高分化35例、中分化39例和低分化18例;T分期中 T1、T2、T3、T4期14例、43例、19例及6例;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中N0期17例、N1期42例及 N2期23例。TMN分期:Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期及Ⅳ期患者AQP1變化期兩兩之間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)見表2。腫瘤組織學(xué)分化程度:AQP1在高、中、低分化程度的患者，兩兩之間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)見表3。浸潤(rùn)深度:AQP1在除 T1、T2，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外(P＞0.05)、T1(T2)、T3、T4期兩兩之間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)見表4。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移:AQP1在在N0期、N1期及N2期兩兩之間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，N0期優(yōu)于N1期，N1期優(yōu)于N2期，見表5。

表2 喉癌患者AQP1變化與TMN分期的關(guān)系(ng/mL，±s)

表2 喉癌患者AQP1變化與TMN分期的關(guān)系(ng/mL，±s)

注:a表示同Ⅰ期比較P＜0.05，b表示同Ⅱ期比較P＜0.05，c表示同Ⅲ期比較 P＜0.05

項(xiàng)目 TMNⅠ期 TMNⅡ期 TMNⅢ期 TMNⅣ期F P 8 38 31 5 AQP1 26.46 ±3.15 34.49 ±6.41a 48.40 ±7.52ab 56例數(shù).28 ±3.71abc 18.48 0.000

表3 喉癌患者AQP1變化與腫瘤組織學(xué)分化程度的關(guān)系(ng/mL，±s)

表3 喉癌患者AQP1變化與腫瘤組織學(xué)分化程度的關(guān)系(ng/mL，±s)

注:a表示同低分化比較P＜0.05，b表示同中分化比較P＜0.05

項(xiàng)目 低分化 中分化 高分化F P 35 39 18 AQP1 54.21 ±11.27 41.55 ±2.45a 32.44 ±2.73ab 4例數(shù)0.74 0.000

表4 喉癌患者AQP1變化與腫瘤浸潤(rùn)深度的關(guān)系(n，±s)

表4 喉癌患者AQP1變化與腫瘤浸潤(rùn)深度的關(guān)系(n，±s)

注:a表示同T1期比較P＜0.05，b表示同T2期比較P＜0.05，c表示同T3期比較P＜0.05

項(xiàng)目 T1期 T2期 T3期 T4期F P例數(shù).78 ±6.63abc 11.26 0.000 14 43 19 6 AQP1 37.87 ±2.46 39.25 ±4.98a 46.61 ±5.54ab 55

表5 喉癌患者AQP1變化與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系(n±s)

表5 喉癌患者AQP1變化與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系(n±s)

注:a表示同N0期比較P＜0.05，b表示同N1期比較P＜0.05

項(xiàng)目 N0期 N1期 N2期F P例數(shù)6.67 0.000 17 42 23 AQP1 30.57 ±6.98 41.52 ±10.87a 53.89 ±8.65ab 1

2.3 喉癌患者AQP1變化與腫瘤臨床病理特征的相關(guān)性分析:Spearman分析發(fā)現(xiàn):喉癌患者 AQP1與TMN分期、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有正相關(guān)性(分別為 r=0.64，P=0.000、r=0.50，P=0.000、r=0.54，P=0.000);與腫瘤組織學(xué)分化程度具有負(fù)相關(guān)性性(r=-0.69，P=0.000)。

3 討論

水通道蛋白(aquaporin，AQP)是一類對(duì)水具有高度選擇性的糖蛋白，迄今為止已發(fā)現(xiàn)哺乳動(dòng)物AQP具有13 種(AQP0-AQP13)［6］，AQP 選擇性的分布在與體液吸收或分泌有關(guān)的上皮細(xì)胞中，每種AQP都有其獨(dú)特的組織分布和細(xì)胞表達(dá)位置，以滿足不同組織和細(xì)胞的代謝需要［7］。AQP對(duì)水分子的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)具有高度的選擇性，水通道蛋白功能異?；蛘{(diào)節(jié)失控會(huì)導(dǎo)致組織病變，腫瘤大多有較高的組織間隙液體壓力，而腫瘤中的新生血管對(duì)循環(huán)中的高分子物質(zhì)具有很高的通透性，微血管通透性增高是由于細(xì)胞間通路開放［8］，AQP1可以部分控制這種細(xì)胞間通路開放，使細(xì)胞間的滲透性發(fā)生改變，AQP1通路代表了整個(gè)微血管壁跨膜通透性的10-45%［9］。目前大量研究證實(shí)許多腫瘤組織、細(xì)胞系及微血管內(nèi)皮細(xì)胞中高度表達(dá)AQP1［10，11］并且 AQP1 與多種腫瘤如:乳腺癌、結(jié)腸癌等的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后有關(guān)系。

本研究對(duì)血清水通道蛋1(AQP1)在喉癌中的表達(dá)及其與喉癌臨床病理特征的關(guān)系進(jìn)行探討，發(fā)現(xiàn)82例喉癌患者均為鱗狀細(xì)胞癌，喉癌患者血清AQP1水平比健康對(duì)照組顯著增加，表明AQP1與喉癌的發(fā)生具有密切的關(guān)系。在喉癌臨床病理特征與AQP1水平進(jìn)行分析中發(fā)現(xiàn)除了浸潤(rùn)深度T1、T2之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異外，血清AQP1水平在其他不同的TNM分期、腫瘤分化程度、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移動(dòng)的兩兩之間分期之間差異均有顯著性，其中浸潤(rùn)深度T1與T2分期分別指腫瘤限于粘膜下及肌層粘膜下，表明在腫瘤發(fā)展初期AQP1水平并無顯著變化，但腫瘤浸潤(rùn)至漿膜層、侵犯周圍結(jié)構(gòu)后AQP1水平顯著升高;Spearman相關(guān)性分析證實(shí)喉癌患者AQP1與TMN分期、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有正相關(guān)性;與腫瘤分化程度具有負(fù)相關(guān)性性。TMN分期、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均是喉癌發(fā)展的病理特征，表明AQP1水平與喉癌的發(fā)展具有關(guān)系，可能促進(jìn)了喉癌的生長(zhǎng)、發(fā)展與轉(zhuǎn)移;喉癌腫瘤組織學(xué)分化程度越高，腫瘤惡性程度越低，本研究表明AQP1水平越高，喉癌的惡性程度越高。ANG等［12］研究發(fā)現(xiàn)水通道蛋-1(AQP1)表達(dá)量與腫瘤惡性程度有直接關(guān)系，惡性程度越高，水通道蛋-1(AQP1)表達(dá)量越高，所以認(rèn)為AQP1可使腫瘤血管通透性增加，促進(jìn)水在腫瘤細(xì)胞間的快速轉(zhuǎn)運(yùn)，促進(jìn)腫瘤血管生成，從而促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移;ElHindy等［13］對(duì)人腦星形細(xì)胞瘤進(jìn)行研究認(rèn)為:AQP1的表達(dá)與惡性腫瘤分級(jí)和與血管生成有關(guān)，驗(yàn)證了這一結(jié)論;高曉葳等［14］研究證實(shí)喉鱗狀細(xì)胞癌組織中AQP1和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)具有高表達(dá)的特點(diǎn)，并且與喉鱗狀細(xì)胞癌組織的臨床病理參數(shù)具有正相關(guān)性，認(rèn)為AQP1和VEGF在喉鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)生、發(fā)展過程中起促進(jìn)癌細(xì)胞生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移和血管生成的作用;國(guó)內(nèi)關(guān)桂梅發(fā)現(xiàn)AQP1在喉癌中的高表達(dá)，與喉癌的發(fā)生，發(fā)展和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，并且針對(duì)AQP1基因序列，構(gòu)建PGCsiRNA-AQP1重組質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染喉癌Hep-2細(xì)胞誘導(dǎo)RNAi進(jìn)行體外研究與轉(zhuǎn)入荷瘤小鼠瘤體內(nèi)誘導(dǎo)RNAi進(jìn)行體內(nèi)療效學(xué)研究，發(fā)現(xiàn)PGCsiRNA-AQP1重組質(zhì)?？梢杂行С聊珹QP1基因的表達(dá)，而且該重組質(zhì)粒在體外能夠有效抑制喉癌細(xì)胞的生長(zhǎng)、運(yùn)動(dòng)和遷移、誘導(dǎo)其凋亡;也能夠在BALB/C小鼠體內(nèi)誘導(dǎo)RNAi沉默AQP1的表達(dá)，從而抑制喉癌組織的微血管形成，阻抑喉癌生長(zhǎng)和發(fā)展，進(jìn)一步證實(shí)了AQP1與喉癌的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移有密切的關(guān)系，本研究支持了上述的研究結(jié)果。

本研究表明，喉癌患者血清中AQP1水平升高，并且與TMN分期、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及組織學(xué)分化有關(guān)系，由于目前喉癌的確診需要具有創(chuàng)傷性的穿刺活檢進(jìn)行病理診斷作為依據(jù)，為了滿足臨床對(duì)喉癌無創(chuàng)性的診斷、發(fā)生、發(fā)展及病情預(yù)測(cè)的要求，本研究認(rèn)為可以考慮AQP1作為喉癌早期診斷的血清腫瘤標(biāo)志物進(jìn)行大規(guī)模的臨床研究，進(jìn)一步臨床研究證實(shí)其作為喉癌早期診斷血清標(biāo)志物的敏感性與特異性，有利于喉癌的早發(fā)現(xiàn)、早治療、促進(jìn)康復(fù)，對(duì)于喉癌防治具有重要的作用與意義。

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