張文琦，王 靜

(1.天津市靜?？h獨(dú)流分醫(yī)院，天津 301602； 2.天津市藥品檢驗(yàn)所，天津 300070)

1.丹參酮ⅡA

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HPLC法測定抗栓膠囊中丹參酮ⅡA的含量

張文琦1，王 靜2

(1.天津市靜?？h獨(dú)流分醫(yī)院，天津 301602； 2.天津市藥品檢驗(yàn)所，天津 300070)

目的：建立高效液相色譜法測定抗栓膠囊中丹參酮ⅡA含量。方法：采用色譜柱為Hypersil C18柱，乙腈-0.02%磷酸溶液(63∶37)為流動(dòng)相，檢測波長為270 nm，流速為1.0 ml/min,柱溫為35 ℃。結(jié)果：丹參酮ⅡA在0.005～0.05 μg/ml濃度范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，回歸方程為Y=6 421 584X-154(r=0.999 9，n=6)，平均回收率為101.2%,RSD為1.5%。結(jié)論：該方法快速簡便，準(zhǔn)確可靠，靈敏度高，可用于抗栓膠囊的質(zhì)量控制。

抗栓膠囊，丹參酮ⅡA，高效液相色譜，含量測定

抗栓膠囊現(xiàn)收載于《中藥成方制劑》第十七冊[1]，由當(dāng)歸尾、丹參、僵蠶、土鱉蟲等19味藥組成，具有活血化瘀、抗栓通脈的作用，用于治療血栓閉塞性脈管炎瘀血阻絡(luò)證，對腦血栓、心肌梗塞、血栓性靜脈炎等亦有較好的輔助治療作用。原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)僅有顯微鑒別，不能有效控制該品的質(zhì)量。丹參含丹參酮類成分，現(xiàn)代藥理研究成果表明，以丹參酮ⅡA為代表的丹參酮類成分具有明顯的活血化瘀作用。測定時(shí)首先考慮丹參酮ⅡA，其含量測定方法很多，參考《中國藥典》丹參藥材含量測定方法和有關(guān)文獻(xiàn)[2，3]，建立了高效液相色譜法測定抗栓膠囊中丹參酮ⅡA的含量，可作為該制劑質(zhì)量控制的方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 高效液相色譜儀(Waters 515)， 紫外檢測器(Waters 2487)， 十萬分之一天平(Sartorius)， 萬分之一天平(精天FA2004A)， 超聲清洗儀(Model C3860A)， 隔膜真空泵(天津市津騰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)。

1.2 試藥 丹參酮ⅡA對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號110766-200417)， 抗栓膠囊(哈爾濱大洋制藥股份有限公司，批號120103、120715、130408)， 甲醇(色譜純)、乙腈(色譜純)、磷酸(分析純)、水(純凈水)。

2 方法和結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Hypersil C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)； 流動(dòng)相：乙腈-0.02%磷酸(63∶37)； 流速：1.0 ml/min； 檢測波長：270 nm； 柱溫：35 ℃； 進(jìn)樣量：10 μl。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取丹參酮ⅡA對照品10 mg，置100 ml量瓶中, 加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密吸取5 ml，轉(zhuǎn)移至10 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。即得濃度為0.05 mg/ml的丹參酮ⅡA對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 取“裝量差異”項(xiàng)下的本品內(nèi)容物適量，研細(xì)，取約5.0 g，精密稱定，加甲醇50 ml，加熱回流提取2次，每次1 h，取出，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状既芙?，?5 ml量瓶中定容至刻度，搖勻。經(jīng)微孔濾膜(0.45 μm)濾過, 取續(xù)濾液, 即得。

2.2.3 陰性對照溶液的制備 按處方配比稱取除丹參以外的其他藥材，制備成陰性供試品粉末。精密稱取陰性粉末5.0 g，按與供試品溶液相同制備方法處理，作為陰性對照溶液。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 分別吸取丹參酮ⅡA對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液各10 μl注入高效液相色譜儀。結(jié)果表明，依“2.1”項(xiàng)下色譜條件丹參酮ⅡA與其他成分分離較好，陰性對照溶液無干擾，見圖1。

1.丹參酮ⅡA

圖1 對照品(A)供試品(B)陰性對照(C)HPLC色譜圖

2.4 線性關(guān)系考查 精密吸取濃度為 0.05 mg/ml丹參酮ⅡA對照品溶液1、2、3、5、8和10 ml，分別置10 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取10 μl注入高效液相色譜儀，記錄相應(yīng)的峰面積值。以進(jìn)樣濃度X為橫坐標(biāo)，以峰面積積分值Y為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：Y=6 421 584X-154(r=0.999 9)。結(jié)果表明，在0.005～0.05 μg/ml范圍內(nèi)峰面積與濃度具有良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn) 精密量取丹參酮ⅡA對照品溶液10 μl，注入液相色譜儀, 依“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，重復(fù)6次，RSD為0.7%，結(jié)果表明該方法精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 分別在0、2、4、8和12 h精密吸取供試品溶液10 μl，依“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣測定，RSD為1.1%，結(jié)果表明供試品在12 h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號樣品粉末6份(批號120103)，精密稱定，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備成供試品溶液。精密吸取供試品溶液10 μl，依“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，RSD為1.6%。說明該方法的重復(fù)性良好。

2.8 回收率試驗(yàn) 精密稱取6份已知含量的同一批樣品(批號120103)各2.5 g，精密加入丹參酮ⅡA對照品溶液1 ml，再按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，計(jì)算回收率。結(jié)果丹參酮ⅡA的平均回收率為101.2%，RSD為1.5%，結(jié)果見表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.9 樣品含量測定 精密稱取3批樣品各約5.0 g，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制成供試品溶液，依“2.1”項(xiàng)下色譜條件測定。結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果

3 討論

3.1 波長的選擇 用紫外檢測器 Waters 2487對丹參酮ⅡA對照品進(jìn)行掃描，在269.4 nm的波長處有最大吸收，雜質(zhì)干擾峰少，再參考《中國藥典》中丹參藥材的檢測波長，最終選擇270 nm作為檢測波長。

3.2 提取方法和時(shí)間 采用甲醇超聲(20、30和60 min)和甲醇回流(30 min、1 h和2 h),結(jié)果表明相同時(shí)間回流比超聲提取完全，而回流2 h高于回流1 h的測定結(jié)果，因此提取方法采用甲醇回流2 h。

3.3 流動(dòng)相的選擇 比較甲醇-水(62∶38)、乙腈-0.02%磷酸(63∶37)兩種不同組分的流動(dòng)相，發(fā)現(xiàn)采用乙腈-0.02%磷酸(63∶37)作為流動(dòng)相，柱效高，主峰與雜質(zhì)峰分離效果好，分離度符合要求，故采用此流動(dòng)相。

1 中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會(huì).中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑(第十七冊)[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，1998:119

2 李華榮，孫鑫，高逢喜.高效液相色譜法測定乳舒片中丹參酮ⅡA的含量.中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2009，29(17)：1502-1503

3 曾翠梅，林春穎，黃鳳婷.高效液相色譜法對棗仁安神顆粒中丹參酮ⅡA含量測定的研究.海峽藥學(xué)，2012，24(9)：58-60

安全用藥

Determination of tanshinoneⅡA in antithrombotic capsules by HPLC

Zhang Wenqi，Wang Jing

(1.Tianjin jinghai county Duliu Hospital Tianjin 301602；2.Tianjin Institute for Drug Control,Tianjin 300070)

Objective： To establish a simple and rapid method for the determination of tanshinoneⅡA in antithrombotic capsule by HPLC. Methods: Hypersil C18chromatographic column was used at an ambient temperature of 35°C with mobile phase consisting of acetonitrile and 0.02% phosphoric acid(63∶37) at a flow rate of 1.0 ml/min.The detection wavelength was at 270 nm. Results: TanshinoneⅡA showed a good linear relationship over the range of 0.005～0.05 μg/ml . The regression equation wasY=6 421 584X-154(r= 0.999 9，n=6).The average recovery was 101.2%，RSD was 1.5%.Conclusions: This method is simple, accurate,sensitive and reliable. It can be applied to quality control of Antithrombotic Capsules.

antithrombotic capsule，tanshinoneⅡA,HPLC，determination

2015-01-19

R927.2

A

1006-5687(2015)05-0027-02