張晶蓉

(天津市中醫(yī)藥研究院附屬醫(yī)院，天津 300120)

富馬酸喹硫平(QTP)是一種非經(jīng)典抗精神病藥物，化學(xué)結(jié)構(gòu)和藥理學(xué)特性與氯氮平較相似［1］，為腦內(nèi)多種神經(jīng)遞質(zhì)受體拮抗劑。因其可阻斷中樞多巴胺D2和5－HT5受體，具有安定和抗抑郁雙重機(jī)理，臨床上通常用于治療各型精神分裂癥和急性雙相躁狂等癥［2］。2008年獲歐盟批準(zhǔn)該藥用于治療雙相情感障礙的臨床治療。2004年FDA批準(zhǔn)該藥作為雙相躁狂發(fā)作單一或合并心境穩(wěn)定劑的臨床應(yīng)用，本品在國內(nèi)外有很廣闊的應(yīng)用市場(chǎng)。富馬酸喹硫平在生產(chǎn)合成過程中使用了丙酮和乙酸乙酯，雖經(jīng)回收，但這兩種溶劑對(duì)人體有很大的傷害，且《中國藥典》(2010年版)已對(duì)限度做出規(guī)定，因此在質(zhì)量控制中要考查其有機(jī)溶劑殘留的問題，并對(duì)其方法進(jìn)行驗(yàn)證。目前尚未見報(bào)道有關(guān)富馬酸喹硫平中乙酸乙酯和丙酮?dú)埩袅康臏y(cè)定方法。本文參照《中國藥典》2010年版二部殘留溶劑檢查法［3］，在參考相關(guān)文獻(xiàn)［4－6］的基礎(chǔ)上采用了頂空進(jìn)樣氣相色譜法對(duì)這兩種有機(jī)溶劑進(jìn)行測(cè)定，方法簡便易行，數(shù)據(jù)準(zhǔn)確合理，重現(xiàn)性較好，可對(duì)富馬酸喹硫平中有機(jī)溶劑殘留進(jìn)行有效控制，為藥品生產(chǎn)企業(yè)制定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和改進(jìn)生產(chǎn)工藝提供有力的依據(jù)。

1 儀器與試藥

安捷倫 7890B氣相色譜儀，丙酮、乙酸乙酯、N，N－二甲基甲酰胺都為色譜純?cè)噭获R酸喹硫平樣品(批號(hào) 141201、141202、141203)由國內(nèi)某藥廠提供。

2 方法和結(jié)果

2.1 氣相色譜條件與系統(tǒng)適用性的試驗(yàn) 色譜柱:DB－FFAP 石英毛細(xì)管柱(30 m ×0.25 mm，0.25 μm);程序升溫，60℃保持3 min，然后以5℃/min的速度升至120℃，最后以40℃/min的速度升至180℃，保持 5 min;進(jìn)樣口:230℃;檢測(cè)器:FID，280 ℃;載氣:氦氣;分流比:25∶1;流速:1.5 m l/min;頂空瓶加熱溫度:75℃;進(jìn)樣環(huán)溫度:95℃;傳輸線溫度:100℃;加熱時(shí)間:35 min。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品儲(chǔ)備液及對(duì)照溶液的制備 精密量取乙酸乙酯 252.6 μl(約相當(dāng)于 200 mg)、丙酮 254.0 μl(約相當(dāng)于200 mg)，置200 ml量瓶中，加N，N－二甲基甲酰胺至刻度，搖勻，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密量取對(duì)照貯備液5 ml，置50 ml量瓶中，用N，N－二甲基甲酰胺稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 精密稱定本品0.5 g，置頂空瓶中，精密加N，N－二甲基甲酰胺10 ml，超聲，作為供試品溶液。

2.3 專屬性試驗(yàn) 精密量取上述對(duì)照品儲(chǔ)備液，用N，N－二甲基甲酰胺逐步稀釋，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，出樣順序依次為乙酸乙酯、丙酮。取“2.2.1”項(xiàng)下的對(duì)照溶液進(jìn)樣，兩成分之間的分離度均大于2.0，理論板數(shù)以乙酸乙酯峰計(jì)，不得低于8 437。丙酮、乙酸乙酯分離度應(yīng)符合規(guī)定，溶劑對(duì)實(shí)驗(yàn)無干擾。見圖1。

圖2 對(duì)照品(A)供試品(B)氣相色譜圖

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立 精密量取對(duì)照品貯備液0.5、2.5、4、5、6 和 10 ml分別置于 50 ml量瓶中，加 N，N －二甲基甲酰胺至刻度，搖勻，制成一系列濃度的對(duì)照溶液;分別量取上述各濃度對(duì)照溶液1 μl，注入氣相色譜儀，依“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，以對(duì)照溶液濃度為橫坐標(biāo)(X)，對(duì)照峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，進(jìn)行線性回歸。結(jié)果顯示乙酸乙酯和丙酮均在10～200 μg/ml的范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，線性方程分別為Y=6.86×10－1X+10.92(r=0.999 1)、Y=7.01 ×10 －1 X+15.03(r=0.999 0)。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn) 取批號(hào)為141201供試品適量，依“2.2.2”項(xiàng)下方法配制6 份供試品溶液，依“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，得丙酮和乙酸乙酯峰面積的RSD分別為 1.8%和 1.3%。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取“2.2.1”項(xiàng)下對(duì)照溶液，于2、4、6、8、12和24 h進(jìn)樣測(cè)定，在對(duì)照溶液中，各色譜峰面積基本不變，表明溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定，丙酮與乙酸乙酯峰面積的RSD分別為0.9%和1.4%。

2.7 最小檢出限 精密量取”2.2.1”項(xiàng)下對(duì)照品貯備液0.5 ml，置于50 ml量瓶中，加 N，N －二甲基甲酰胺至刻度，搖勻，再根據(jù)實(shí)際測(cè)定情況逐步稀釋。依“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，丙酮的最低檢出限為2.0 μg/ml，乙酸乙酯的最低檢出限為 2.1 μg/ml。

2.8 回收率試驗(yàn) 精密稱取本品0.25 g，共9份，分別置于頂空瓶中;另精密量取對(duì)照品貯備液4、5和6 ml，分別置于50 m l量瓶中，用N，N－二甲基甲酰胺至刻度，振搖混勻，精密量取上述一系列濃度各5 ml，置已有樣品0.25 g的頂空瓶中，搖勻，依“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，按外標(biāo)法計(jì)算回收率，結(jié)果見表1和表2。乙酸乙酯與丙酮平均回收率分別為 100.7%和100.9%。RSD 分別為0.7%和0.2%。

表1 乙酸乙酯回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

2.9 樣品中乙酸乙酯與丙酮?dú)埩袅康臋z查測(cè)定法取對(duì)照溶液和供試品溶液，75℃加熱35 min，取上層氣體1 ml注入氣相色譜儀，照殘留溶劑測(cè)定法(《中國藥典》2010年版二部附錄Ⅷ P 第三法)［3］，依“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)，含乙酸乙酯與丙酮均不得過0.2%。試驗(yàn)結(jié)果顯示，3批樣品殘留溶劑均符合規(guī)定，見表3。

表2 丙酮回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

表3 樣品測(cè)定結(jié)果

3 討論

富馬酸喹硫平在提取、分離等工藝使用了乙酸乙酯、丙酮，后續(xù)生產(chǎn)工藝中對(duì)這兩種溶劑進(jìn)行了回收。乙酸乙酯和丙酮對(duì)人體五官、中樞神經(jīng)系統(tǒng)有抑制、麻醉作用，高濃度接觸或長期接觸均會(huì)對(duì)人體造成肝腎以及其他方面的損傷。因此《中國藥典》(2010年版二部)對(duì)這兩種殘留溶劑的限度做了規(guī)定，不能超過0.5%。

3.1 進(jìn)樣方法的選擇 采用頂空進(jìn)樣法，既可以經(jīng)加熱使殘留的丙酮和乙酸乙酯在短時(shí)間內(nèi)充分溶解于溶劑中，又避免了直接進(jìn)樣法可能帶來的各種雜質(zhì)的干擾，提高柱效，延長色譜柱的使用時(shí)間，可以節(jié)約生產(chǎn)廠家的成本。

3.2 柱溫及條件的優(yōu)化 實(shí)驗(yàn)中考查了不同柱溫對(duì)樣品溶液中乙酸乙酯、丙酮出峰時(shí)間的影響，綜合檢驗(yàn)靈敏度、測(cè)定誤差以及供試品分析時(shí)間等因素。由于恒溫實(shí)驗(yàn)分離效果不好，因此采用程序升溫進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，依“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行驗(yàn)證。

3.3 稀釋劑的選擇 采用頂空進(jìn)樣法測(cè)定樣品時(shí)，一般使用二甲亞砜和N，N－二甲基甲酰胺作為稀釋劑，考慮到樣品在二甲亞砜中溶解性差，所以將稀釋用溶劑換為N，N－二甲基甲酰胺，實(shí)驗(yàn)才能得以順利進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)結(jié)果正常，數(shù)據(jù)合理。因此，本法適用于富馬酸喹硫平殘留溶劑的測(cè)定。

1 江開達(dá).精神藥理學(xué)［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，2007:303－367

2 張象鱗.藥物臨床信息參考［M］.四川:四川科學(xué)技術(shù)出版社，2005:1100－1101

3 中國藥典［S］:二部.2010:附錄61

4 付芳，李太平.氣相色譜法測(cè)定硫普羅寧中乙酸乙酯的殘留量［J］.中國藥業(yè)，2010，19(21):28

5 周蕾，雷永濤，郝小燕，等.淫羊藿總黃酮中乙酸乙酯、正丁醇溶劑殘留量的測(cè)定［J］.貴陽醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2012，37(2):123 －126

6 李麗敏，錢大公，王柯，等.毛細(xì)管氣相色譜法測(cè)定原人參二醇中有機(jī)溶劑殘留物［J］.中成藥，2010，32(5):821－822