許紅蘭, 萬美燕, 夏　平, 鄒作君

(山東省青島市市立醫(yī)院 腎內(nèi)科, 山東 青島, 266000)

ox-LDL檢測在糖尿病腎病患者中的價(jià)值

許紅蘭, 萬美燕, 夏平, 鄒作君

(山東省青島市市立醫(yī)院 腎內(nèi)科, 山東 青島, 266000)

摘要:目的探討ox-LDL檢測在2型糖尿病腎病患者中的價(jià)值。方法將90例糖尿病腎病患者分為正常蛋白尿組、微量蛋白尿組和大量蛋白尿組。另選取20例健康者作為正常對照組。檢測血ox-LDL濃度、尿微量白蛋白、尿8-OHdG、N-乙酰-β-氨基葡萄糖苷酶(NAG)等指標(biāo)。結(jié)果糖尿病組血ox-LDL水平顯著高于正常對照組(P<0.01); 大量蛋白尿組的血ox-LDL水平明顯高于微量蛋白尿組及正常蛋白尿組( P<0.01)。糖尿病腎病患者血ox-LDL水平與總膽固醇、低密度脂蛋白、甘油三酯及脈壓差呈正相關(guān)，與BMI及HDL-C呈負(fù)相關(guān)。ox-LDL水平與尿微量白蛋白、尿8-OHdG、NAG、α2-MG、FDP呈顯著正相關(guān)。結(jié)論糖尿病腎病患者隨著蛋白尿的增多其脂質(zhì)的氧化應(yīng)激水平增強(qiáng)，且脂質(zhì)氧化應(yīng)激作為重要因素參與糖尿病腎病的發(fā)生與發(fā)展。

關(guān)鍵詞:糖尿病腎病; 氧化應(yīng)激; ox-LDL; 尿8-OHdG

糖尿病腎病是終末期腎臟病變的一個(gè)重要病因。氧化應(yīng)激是糖尿病腎病發(fā)展的重要病理生理機(jī)制之一[1-2], 2型糖尿病患者早期腎臟病變與炎癥、氧化應(yīng)激的關(guān)系密切[3]。2型糖尿病患者除血糖代謝異常外，還伴有一系列的脂代謝紊亂。糖尿病時(shí)脂蛋白脂肪酶活性低下，以小而密的低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)升高為主，并在高糖的作用下易被糖基化，容易被氧化成為氧化修飾低密度脂蛋白(ox-LDL)。ox-LDL系沉積在血管壁中的LDL-C, 在細(xì)胞、金屬離子等因子的作用下，發(fā)生氧化修飾而形成。其理化性質(zhì)和生物學(xué)特性與正常LDL-C具有很大區(qū)別，具有很強(qiáng)的細(xì)胞毒性,可作為DN早期較敏感的診斷指標(biāo)[4]。本研究通過檢測糖尿病腎病患者血中ox-LDL, 評價(jià)2型糖尿病腎病患者脂質(zhì)異常與氧化應(yīng)激的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)告如下。

1資料與方法

1.1一般資料

將2007年6月—2008年6月在青島市市立醫(yī)院腎內(nèi)科就診的2型糖尿病患者90例設(shè)為糖尿病組，均符合1999年WHO診斷與分型標(biāo)準(zhǔn)，空腹血糖≥7.0 mmol/L, 或癥狀+隨機(jī)血糖≥11.1 mmol/L, 或口服葡萄糖耐量實(shí)驗(yàn)(OGTT)餐后2 h血糖≥11.1 mmol/L的2型糖尿病患者納入本研究。正常對照組20例來自本院健康體檢中心。記錄患者的臨床情況及實(shí)驗(yàn)室檢查資料。采集受檢者清晨空腹靜脈血5 mL, 離心取血漿后-40 ℃貯存?zhèn)溆?，并留取尿?biāo)本。排除1型糖尿病、糖尿病急性代謝并發(fā)癥及可影響尿白蛋白排泄的疾病如創(chuàng)傷、發(fā)熱、重度心功能不全、泌尿道感染或其他原因所致的腎臟疾病者，病情穩(wěn)定。

1.2實(shí)驗(yàn)室檢查

按照尿蛋白排泄率(uAER)診斷標(biāo)準(zhǔn)將所有糖尿病患者分為3組: uAER<20 μg/min(或<30 mg/24 h)為正常蛋白尿組; UAER 20～200 μg/min (30～300 mg/24 h)為微量白蛋白尿組; UAER>200 μg/min (>300 mg/24 h)為大量白蛋白尿組。各組一般資料見表1。所有糖尿病患者及健康對照組均檢測血總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)、血清肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)、血糖等血生化指標(biāo)，檢測尿微量白蛋白(mALB)、N-乙酰-β-氨基葡萄糖苷酶(NAG)、尿α2-巨球蛋白(α2-MG)、2-微球蛋白(2-MG)、纖維蛋白原(FDP)濃度。尿標(biāo)本置于-40 ℃冰箱中待測8-羥脫氧鳥苷(8-OHdG)。ox-LDL與8-OHdG測定采用酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)法。ox-LDL-C與8-OHdG試劑盒購自美國Trevigen公司，按說明書操作。于清晨空腹采集肘靜脈血, 1 h內(nèi)2 400×g離心5 min, 取1 mL血清置于-20 ℃保存用于ox-LDL檢測,尿中8-OHdG濃度用尿肌酐來補(bǔ)正。通過以ox-LDL為因變量，以年齡、病程、收縮壓、舒張壓、脈壓差、總膽固醇(T-CHOL)、LDL-C、BMI、肌酐(CREA)、表皮生長因子受體(eGFR)、8-OHdG、mALB、α2-MG、FDP、視黃醇結(jié)合蛋白(RBP)、β2-MG、NAG為自變量進(jìn)行簡單線性相關(guān)分析，探討影響糖尿病患者脂質(zhì)代謝異常與氧化應(yīng)激的相關(guān)性。

表1　各組一般資料比較

與微量蛋白尿組比較, **P<0.01; 與正常蛋白尿組比較, #P<0.05, ##P<0.01。

2結(jié)果

糖尿病組的血ox-LDL水平為(14.0±0.6) μg/dL, 高于正常對照組(7.5±0.2) μg/dL, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01) ; 糖尿病腎病3組間比較,大量蛋白尿組的血ox-LDL水平明顯高于微量蛋白尿組及正常蛋白尿組(P<0.05或P<0.01), 微量蛋白尿組與正常蛋白尿組之間的血ox-LDL水平無顯著差異(P>0.05)。正常蛋白尿組患者血ox-LDL水平高于健康對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。腎小球源性蛋白尿mALB, α2-MG, FDP在微量蛋白尿組和大量蛋白尿組顯著高于正常蛋白尿組(P<0.01), 腎小管源性蛋白尿RBP, β2-MG, NAG在大量蛋白尿組顯著高于正常蛋白尿組(P<0.01), 見表2。糖尿病腎病患者血ox-LDL水平與總膽固醇(r=0.423,P<0.01)、低密度脂蛋白(r=0.419,P<0.01)、甘油三酯(r=0.288,P<0.01)及脈壓差(r=0.287,P<0.05)呈正相關(guān)，與BMI(r=-0.252,P<0.05)及HDL-C(r=-0.269,P<0.05)呈負(fù)相關(guān)。見表3。ox-LDL水平與尿微量白蛋白(r=0.329,P<0.01)、尿8-OHdG(r=0.252,P<0.05)、NAG(r=0.378,P<0.01)、α2-MG(r=0.315,P<0.01)、FDP(r=0.293,P<0.05)呈顯著正相關(guān)。見表4。

表2　各組8-OHdG與尿蛋白分析指標(biāo)比較

與微量蛋白尿組，*P<0.05，**P<0.01; 與正常蛋白尿組比較，#P<0.05，##P<0.01。

表3　90例糖尿病腎病患者血ox-LDL水平與

表4　90例糖尿病腎病患者血ox-LDL水平與腎小球源性

3討論

LDL-C被氧化修飾后，不僅生物活性發(fā)生了改變，而且免疫原性也發(fā)生了改變，在機(jī)體內(nèi)產(chǎn)生一系列病理、生理反應(yīng)。它在糖尿病及慢性并發(fā)癥的發(fā)生、發(fā)展中扮演了重要角色。本研究發(fā)現(xiàn)糖尿病患者血ox-LDL水平顯著高于正常對照組，在正常蛋白尿的2型糖尿病患者中，其ox-LDL水平也顯著高于非糖尿病的正常對照組。隨著蛋白尿的增多，其水平升高，說明ox-LDL貫穿于糖尿病腎病發(fā)生、發(fā)展的整個(gè)過程。因此ox-LDL可作為糖尿病腎病早期的較敏感的診斷指標(biāo)。糖尿病患者氧化應(yīng)激水平增高，在應(yīng)激狀態(tài)下線粒體產(chǎn)生大量的超氧陰離子，糖基化的LDL-C在超氧陰離子的作用下更容易被氧化修飾成ox-LDL。2型糖尿病患者的ox- LDL水平高于正常對照組，提示糖尿病患者體內(nèi)LDL-C氧化能力普遍增強(qiáng)，且LDL-C氧化后形成的ox-LDL極易導(dǎo)致微血管病變。

糖尿病腎病患者中ox-LDL升高的原因可能為: ① 糖尿病患者體內(nèi)代謝紊亂，導(dǎo)致抗氧化物質(zhì)消耗過多; ② 糖尿病患者血液中活化的單核細(xì)胞能增加超氧化物量; ③ 糖基化膠原可促進(jìn)體內(nèi)脂質(zhì)的過氧化。研究中發(fā)現(xiàn)，ox-LDL水平與線粒體DNA氧化損傷的主要標(biāo)記物8-OHdG正相關(guān)，且與尿微量白蛋白尿呈正相關(guān)，與尿α2-MG、NAG、FDP也呈正相關(guān)，與BMI與HDL-C呈負(fù)相關(guān)。糖尿病腎病患者由于糖的分解受阻，又導(dǎo)致脂肪組織的分解代謝增強(qiáng)，致使血漿內(nèi)游離脂肪酸水平明顯增高，進(jìn)而刺激肝臟合成大量的LDL-C。糖尿病的高胰島素血癥亦可致脂質(zhì)代謝障礙，產(chǎn)生高脂血癥。游離脂肪酸水平升高可直接導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞損傷、功能異常、隨著糖尿病病程的延長，微血管循環(huán)障礙[5]、缺血缺氧加重，內(nèi)皮損傷加重，尿蛋白也隨之增加。脂質(zhì)的過氧化反應(yīng)尤其是ox-LDL是動(dòng)脈硬化的重要原因之一[6]。通常LDL不會(huì)被巨核細(xì)胞吞噬，但是氧化LDL卻被巨核細(xì)胞吞噬后形成動(dòng)脈粥樣斑塊構(gòu)成物泡沫細(xì)胞[7],并滯留于血管壁上，促進(jìn)了早期腎小球損

傷[8]。不僅如此還促進(jìn)單核、淋巴細(xì)胞的游走，分化，促使血管平滑肌細(xì)胞的增殖，并作用于內(nèi)皮細(xì)胞，引起內(nèi)皮功能障礙[9]。本研究結(jié)果顯示，ox-LDL與8-OHdG存在正相關(guān)。有研究[10]表明,脂質(zhì)異常癥患者中血清抗氧化LDL自身抗體水平與LDL-C無相關(guān)性，但與8-OHdG相關(guān)，說明在脂質(zhì)異常患者中氧化應(yīng)激可引起DNA損傷。

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Clinical value of serum ox-LDL detection in

patients with diabetic nephropathy

XU Honglan, WAN Meiyan, XIA Ping, ZOU Zuojun

(DepartmentofNephrology,QingdaoMunicipalHospital,Qingdao,Shandong, 266000)

ABSTRACT:ObjectiveTo investigate the value of serum ox-LDL detection in patients with diabetic nephropathy (DN). MethodsA total of 90 DN patients were divided into normal proteinuria group, micro proteinuria group and large amount proteinuria group. Twenty healthy people were selected as control group. The indicators of serum ox-LDL concentration, microalbuminuria, urinary 8-OHdG and NAG were measured. ResultsThe level of serum ox-LDL in DN patients were significantly higher than that of the control group (P<0.01). The level of ox-LDL in the large amount proteinuria group was significantly higher than that of normal proteinuria group and micro proteinuria group (P<0.01). The level of serum ox-LDL was positively correlated with total cho1esterol, triglyceride and low-density 1ipoprotein as well as pulse pressure, but was negatively correlated with BMI and HDL-C. The level of serum ox-LDL was positively correlated with the urinary albumin and urine 8-OHdG, NAG, α2-MG and FDP. ConclusionThe lipid oxidative stress increases significantly with the enhancement of proteinuria in DN patients, and it is correlated with the development and progression of DN.

KEYWORDS:diabetic nephropathy; oxidative stress; ox-LDL; 8-OHdG

通信作者:萬美燕

收稿日期:2014-11-20

中圖分類號:R 587.2

文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A

文章編號:1672-2353(2015)03-047-03

DOI:10.7619/jcmp.201503013