王清 丁倩 黃竹蕓

(貴州省人民醫(yī)院血液科， 貴州 貴陽 550002)

胎盤多肽對MDS患者骨髓病態(tài)造血的影響

王清 丁倩 黃竹蕓

(貴州省人民醫(yī)院血液科， 貴州 貴陽 550002)

目的 研究胎盤多肽對骨髓病態(tài)造血的影響。方法 選取2010年10月～2012年12月住院治療的30例骨髓增生異常綜合征(MDS)患者作為研究對象，另選取30例同期體檢的健康人作為對照組。采用免疫組化方法檢測其造血細(xì)胞[骨髓細(xì)胞(Bone marrow cell Fas ligand， Fas)和骨髓細(xì)胞配體(Bone marrow cell Fas ligand， FasL)]的表達(dá)。體外培養(yǎng)使用胎盤多肽，并觀察其對兩組造血功能以及造血細(xì)胞凋亡的影響。結(jié)果 MDS患者不同病種的Fas表達(dá)不同，幼紅細(xì)胞性頑固性貧血(refractory anemia,erythroblastic,RAEB)患者明顯低于難治性貧血(Refractory anemia,RA)患者，過量的幼紅細(xì)胞性頑固性貧血(refractory anemia with excess blasts， RAEB-t)患者明顯低于RAEB 患者，三者之間差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.05)。MDS患者的CFU-GM 和CFU-E明顯低于對照組(P<0.05)，加入胎盤多肽對對照組的粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落單位(Granulocyte macrophage colony Generating units， CFU-GM) 和紅細(xì)胞集落生成單位(Red cellsColony forming unit， CFU-E)無明顯影響，但明顯升高M(jìn)DS患者的CFU-GM和CFU-E(P<0.05)，濃度越大，升高越明顯。MDS患者造血細(xì)胞凋亡明顯高于對照組，加入胎盤多肽后明顯降低MDS患者的細(xì)胞凋亡。結(jié)論 MDS患者的Fas和FasL的表達(dá)異常，胎盤多肽可能通過降低造血細(xì)胞凋亡從而促進(jìn)正常造血。

胎盤多肽； MDS患者； 骨髓造血； 細(xì)胞凋亡

骨髓增生異常綜合征(MDS)是一種造血系統(tǒng)惡性疾病，發(fā)病趨于老年化，60歲以上的患者占80%以上[1]。導(dǎo)致骨髓增生異常的原因較多，發(fā)病機(jī)制還不清楚，目前臨床治療比較困難，雖然有去甲基化藥物和/或聯(lián)合化療等治療方案，但預(yù)后仍較差，仍需要對疾病的發(fā)生機(jī)制及藥物治療開展廣泛研究。胎盤多肽是一種新型的免疫分子，對骨髓造血細(xì)胞具有保護(hù)作用，可以促進(jìn)造血功能，同時對白細(xì)胞也具有一定的保護(hù)作用。本文就胎盤多肽對MDS患者的骨髓病態(tài)造血影響進(jìn)行研究，現(xiàn)將結(jié)果報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2010年10月～2012年12月期間在我院住院治療的30例MDS患者為研究對象，男性16例，女性14例，年齡49～78歲，平均(61.35±9.23)歲。其中11例患者患有難治性貧血(RA)，13例患有RA伴有過多的原始細(xì)胞(RAEB)，6例患有轉(zhuǎn)變中的RAEB(RAEB-t)。另選取30例同期到本院體檢的健康人作為對照組，兩組對象的性別、年齡差異無顯著性(P>0.05)，具有可比性。

1.2 方法 采用免疫組化法檢測Fas和FasL的表達(dá)，取患者骨髓細(xì)胞經(jīng)過離心，加甲醛丙酮固作液以及堿性磷酸酶孵育15min，顯微鏡下觀察，陽性部位出現(xiàn)紅色標(biāo)記物時，用PBS淋洗，蘇木素復(fù)染10s后自來水淋洗，油鏡下計數(shù)500個有核細(xì)胞，計算陽性率。采取單層瓊脂法體外培養(yǎng)CFU-GM，甲基纖維素法體外培養(yǎng)CFU-E。于兩種培養(yǎng)皿中分別加入10μg/ml和50μg/ml的胎盤多肽，顯微鏡下觀察?！?0 個細(xì)胞為1 個CFU-GM 集落, 8～ 50個細(xì)胞組成的細(xì)胞團(tuán)為1 個CFU-E 集落。采用德國Roche公司的Cell Death Detet ion ELIS-APLUS儀器檢測細(xì)胞凋亡[3]。具體方法：將細(xì)胞懸液經(jīng)過孵育、離心，在孵育后加入緩沖培養(yǎng)液250μl，每個孔再加入100μl的ABTS溶液作為底物，反應(yīng)15min后在450nm波長下測定吸光度值。

1.3 觀察指標(biāo) 觀察MDS患者不同病種的Fas和FasL表達(dá)，對比MDS患者與正常人的CFU-GM、CFU-E以及加入胎盤多肽后的變化情況，統(tǒng)計MDS患者和正常人的造血細(xì)胞凋亡情況，并觀察加入胎盤多肽后細(xì)胞凋亡的變化情況。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 11．5統(tǒng)計軟件進(jìn)行處理，多組間均數(shù)比較采用方差分析，陽性率采用Fisher精確檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同病種患者的Fas和FasL表達(dá) MDS患者不同病種的Fas表達(dá)不同， RAEB患者明顯低于RA患者，RAEB-t患者明顯低于RAEB 患者，三者間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.05)，見表1。

2.2 MDS患者與對照組的CFU-GM和CFU-E統(tǒng)計情況 MDS患者的CFU-GM 和CFU-E明顯低于對照組(P<0.05)；加入胎盤多肽后對對照組的CFU-GM 和CFU-E無明顯影響，但明顯升高M(jìn)DS患者的CFU-GM 和CFU-E(P<0.05)，見表2。

表1 不同病種的Fas和FasL的表達(dá)結(jié)果

注：與RAEB相比，①P<0.05；與RAEB-t相比,②P<0.05

表2 MDS患者和對照組的CFU-GM和CFU-E統(tǒng)計

2.3 MDS患者與對照組造血細(xì)胞凋亡情況 MDS患者造血細(xì)胞凋亡明顯高于對照組(P<0.05)；加入胎盤多肽后，明顯降低MDS患者的細(xì)胞凋亡(P<0.05)，但對對照組患者無明顯影響(P>0.05)，見表3。

表3 MDS患者與對照組造血細(xì)胞凋亡情況統(tǒng)計

注：與對照組相比，①P<0.05；與未加入胎盤多肽相比，②P<0.05

3 討論

骨髓增生異常綜合征(MDS)是一種造血系統(tǒng)惡性疾病，臨床上以外周血一系至三系血細(xì)胞減少、骨髓無效造血以及向白血病轉(zhuǎn)化的高風(fēng)險為特征。發(fā)病趨于老年化，60歲以上的患者占80%以上[1]。導(dǎo)致骨髓增生異常的原因較多，發(fā)病機(jī)制還不是很清楚，MDS患者骨髓病態(tài)造血現(xiàn)象是MDS 的一個主要特征，也是臨床診斷MDS 的一個主要依據(jù)。胎盤多肽是一種新型的免疫分子，部分已經(jīng)在實驗室進(jìn)行試驗研究。目前臨床上對骨髓腫瘤的常規(guī)治療是放療和化療。而MDS就是骨髓腫瘤的一種，其臨床主要特征是無效造血、細(xì)胞減少、造血細(xì)胞及其前提細(xì)胞性質(zhì)異常等[4]。病態(tài)造血患者造血細(xì)胞的異常性，大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為其根本原因是遺傳物質(zhì)發(fā)生質(zhì)變影響到基因表達(dá)造成的。而實驗研究表明，胎盤多肽作為一種抗癌藥物，同時也是一種免疫抑制劑，可以影響骨髓細(xì)胞的基因表達(dá)，對人體的外周血細(xì)胞以及骨髓產(chǎn)生明顯的抑制作用[5]。

目前對于MDS 的診斷及分型尚未完全清晰，仍然存在著挑戰(zhàn)性。早在2008年WHO就已經(jīng)提出，對于髓系腫瘤的診斷以及分型強(qiáng)調(diào)骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)、免疫學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)、分子生物學(xué)的綜合檢查，對于不伴外周血、骨髓原始細(xì)胞增高的患者要格外注意，并重點強(qiáng)調(diào)了骨髓細(xì)胞病態(tài)造血現(xiàn)象的重要性。但是經(jīng)過臨床研究，其骨髓細(xì)胞病態(tài)造血現(xiàn)象并不是MDS特異性的改變，出現(xiàn)病態(tài)造血現(xiàn)象有很多種因素，例如藥物、毒素、生長因子的作用，感染，營養(yǎng)缺乏等等。我們的研究表明，MDS患者不同MDS疾病類型的Fas表達(dá)情況不同，RA患者是Fas表達(dá)最明顯，F(xiàn)as表達(dá)越明顯造成陽性細(xì)胞的凋亡越多，說明難治性貧血是造血細(xì)胞最容易凋亡的骨髓腫瘤。MDS患者CFU-GM和CFU-E明顯低于正常人，但加入胎盤多肽后CFU-GM和CFU-E明顯增加，濃度越大增加越明顯[6]。胎盤多肽能夠促進(jìn)MDS患者的CFU-GM和CFU-E明顯增加的原因，在于它是一種可靠穩(wěn)定的保護(hù)骨髓細(xì)胞以及白細(xì)胞的藥物，明顯抑制白細(xì)胞數(shù)量的下降，還可以抑制骨髓中性粒細(xì)胞和紅細(xì)胞的下降以及骨髓淋巴細(xì)胞的升高，因此促進(jìn)CFU-GM和CFU-E的明顯增加。據(jù)國外研究報道，胎盤具有造血功能，含有多項造血因子，可以減少骨髓造血細(xì)胞的凋亡。本研究結(jié)果與國外該項研究的結(jié)果相似[7，8]。

4 結(jié)論

胎盤多肽可以減少骨髓增生異常綜合征患者造血細(xì)胞的凋亡，對促進(jìn)骨髓細(xì)胞造血有一定的幫助，值得臨床深入研究。

[1]黃莉，吳小曼，紀(jì)宇，等.柱前衍生高效液相色譜法測定胎盤多肽注射液中的氨基酸[J].中國生化藥物雜志，2012，33(4)：373-380.

[2]吳興茂，汪海源，楊振宇，等.胎盤多肽對重癥呼吸機(jī)相關(guān)性肺炎老年患者免疫功能的影響[J].中國老年學(xué)雜志，2013，33(10)：2240-2242.

[3]王宗春，張洪，姜俊勇.鱟試劑方法檢測胎盤多肽注射液中細(xì)菌內(nèi)毒素[J].湖北大學(xué)學(xué)報，2011，33(2)：190-192.

[4]張云楚，紀(jì)宇.雙辛可寧酸法測定胎盤多肽注射液中低濃度多肽的含量[J].中國生化藥物雜志，2010，31(6)：402-404.

[5]伍柏青，陳世林，張水生.112例骨髓增生異常綜合征FAB和WHO分型細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察[J].檢驗醫(yī)學(xué)，2010，25(8)：612-614.

[6]李云龍,張曦,陳幸華,等.CEAG方案治療低增生性MDS-RAEB和AML的臨床觀察[J].西部醫(yī)學(xué),2010,22(7):1219-1220.

[7]何愛麗,白菊. 多發(fā)性骨髓瘤的蛋白質(zhì)組學(xué)研究[J].西部醫(yī)學(xué),2013,25(7):964-967.

[8]Ptak J，Lochman J.Immunoabsorption therapy and complement activation[J].Transfus Apher Sci，2005，32(2)：263-267.

Pilot study on influences of placenta polypeptide to marrow hemopoiesis for MDS patients

WANG Qing, DING Qing, HUANG Zhuyun

(DepartmentofHematology,GuizhouProvincialPeople'sHospital,Guiyang550002)

Objective To study the influences of placenta polypeptide to marrow hemopoiesis. Methods 30 patients with myelodysplastic syndrome (MDS) were selected as the research objects, and another 30 healthy people who had physical examinations in our hospital in the corresponding period were selected as the control group. Immunohistochemical method was used to detect and compare the expression of Chinese name (Bone marrow cell Fas ligand Fas Fas) and (Bone marrow cell Fas ligand FasL) expression. in hematopoietic cells. Placenta polypeptide was cultured in vitro and its influences to hematopoietic function and hematopoietic cell apoptosis for the two groups needed to be observed. Results The expression of Fas in different diseases entities for MDS patients was different; the expression for RAEB patients was significantly lower than that of Chinese name (Refractory anemia,RA) patients, while the expression for Chinese name (refractory anemia with excess blasts RAEB-t ) patients was obvious lower than that of RAEB patients; the differences among these were of statistical significance (P<0.05). For MDS patients, their Chinese names (Granulocyte macrophage colony Generating units CFU-GM) and (Red cellsColony forming unit CFU-E)were significantly lower than that of the control group, and there existed no obvious influence to CFU-GM and CFU-E for people in the control group when adding placenta polypeptide, while the CFU-GM and CFU-E for MDS patients were obviously higher, and if the concentration was greater, the higher would be more obvious. The apoptosis of hematopoietic cell for MDS patients was significantly higher than that of the control group, and adding the placenta polypeptide had reduced the apoptosis significantly for MDS patients. Conclusion The expressions of Fas and FasL for MDS patients were abnormal; and the placenta polypeptide could strength the hemopoiesis of MDS patients through reduce the apoptosis.

Placenta Polypeptide; MDS Patients; Marrow Hemopoiesis; Apoptosis

R 733.73

A

10.3969/j.issn.1672-3511.2015.06.035

2014-04-16； 編輯： 母存培)