大腸癌患者血清中Periostin 蛋白含量的研究

張亮1,2,劉百歌1,高申1*,宋麗娜1,李玲霞1,何成彥1

(1.吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院 檢驗(yàn)科,吉林 長(zhǎng)春130033；2.長(zhǎng)春市兒童醫(yī)院 檢驗(yàn)科,吉林 長(zhǎng)春130051)

大腸癌是我國(guó)腫瘤發(fā)病率上升最快的腫瘤之一，一旦復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致結(jié)腸癌患者預(yù)后不良和死亡的主要原因，是影響術(shù)后生存至關(guān)重要的因素[1]。大腸癌的發(fā)病機(jī)制相當(dāng)復(fù)雜，同時(shí)也是在這一領(lǐng)域探索的學(xué)者們一直研究的課題。在環(huán)境因素中物理、化學(xué)、生物學(xué)因素和機(jī)體因素中遺傳、內(nèi)分泌、免疫因素發(fā)病機(jī)制的探討下，學(xué)者們?cè)诓粩嗟刈鲞M(jìn)一步的研究[2,3]。從流行病學(xué)分析，大腸癌發(fā)生有明顯的地理差異，西歐、北美發(fā)病率明顯高于亞非地區(qū)。從高發(fā)地區(qū)人群的生活習(xí)慣調(diào)查，食物內(nèi)脂肪含量較多，平均每人每天脂肪量達(dá)120 g以上，而低發(fā)地區(qū)只有20-60 g。目前首選治療的方法為手術(shù)切除， 但大腸癌原發(fā)灶切除后出現(xiàn)復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移的幾率仍很高， 若能早期發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)移灶并及時(shí)治療，對(duì)本病的臨床預(yù)后控制具有積極意義[4]。近來研究認(rèn)為骨膜蛋白與惡性腫瘤侵襲性和轉(zhuǎn)移性相關(guān)被認(rèn)為是腫瘤轉(zhuǎn)移候選基因之一[5]。本研究將通過酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)Periostin蛋白含量來評(píng)估其在大腸癌的血清學(xué)檢測(cè)中是否具有重要意義。

1材料與方法

1.1材料與方法選取吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院臨床確診大腸癌患者30例，采集其血液樣本，同時(shí)采集健康人群對(duì)照組30例血樣。

應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)結(jié)腸癌患者和健康對(duì)照者血清中Periostin蛋白的含量。組成：標(biāo)準(zhǔn)品、標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液、酶標(biāo)試劑、樣品稀釋液、顯色劑A液、顯色劑B液、終止液、濃縮洗滌液等。

主要儀器為酶標(biāo)儀(Autobio中國(guó))、普通臺(tái)式離心機(jī)(Beckman Coucter 美國(guó))、-80℃冰箱(海爾 中國(guó))。

1.2ELISA法測(cè)定血清中periostin蛋白含量

按試劑盒說明書操作。以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2結(jié)果

30例大腸癌患者血清中Periostin蛋白與30例正常人比較，大腸癌患者血清中Periostin蛋白水平顯著升高(P<0.05)，見表1。

表1　大腸癌血清中Periostin蛋白水平

3討論

Periostin蛋白又被稱為成骨細(xì)胞特異性因子-2，最初從小鼠的成骨細(xì)胞系MC3T3-E1中分離作為細(xì)胞黏附蛋白能夠促進(jìn)成骨，Periostin 蛋白在骨外膜、軟骨膜、牙周膜、肌肉筋膜、軟骨關(guān)節(jié)面以及關(guān)節(jié)韌帶中高表達(dá)[6]。骨膜蛋白(periostin)是由鼠成骨細(xì)胞分泌的含835個(gè)氨基酸殘基的蛋白質(zhì),由于其在骨膜和牙周韌帶的定位表達(dá)被稱為骨膜蛋白[7]。Periostin 蛋白由835個(gè)氨基酸組成，相對(duì)分子質(zhì)量約90 000，可促進(jìn)成骨細(xì)胞的增殖、分化和骨膜成骨前體細(xì)胞的聚集、黏附及間質(zhì)平滑肌細(xì)胞的遷移，在多種人類正常組織中都有表達(dá)。 Periostin 蛋白在肺癌、結(jié)腸癌、肝癌、乳腺癌、卵巢癌等惡性腫瘤中都有表達(dá)，可促進(jìn)腫瘤的存活和血管生成，并可作為腫瘤細(xì)胞發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的標(biāo)志，其在腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的作用也日益受到關(guān)注并取得了一些進(jìn)展[8]。 腫瘤細(xì)胞的侵襲性與轉(zhuǎn)移能力是導(dǎo)致患者腫瘤復(fù)發(fā)、病情惡化而最終死亡的病理基礎(chǔ)，也是癌細(xì)胞區(qū)別于正常細(xì)胞的最基本的特征。腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移是一個(gè)循序漸進(jìn)的多因素、多步驟、多基因相互協(xié)調(diào)作用的動(dòng)態(tài)過程[9]。也有研究證實(shí)了periostin蛋白的表達(dá)與心臟的發(fā)育和心臟疾病密切相關(guān)，最近有許多研究報(bào)道了periostin 蛋白在多種人類惡性腫瘤的細(xì)胞系以及腫瘤實(shí)體中高表達(dá)，其血清學(xué)檢測(cè)對(duì)于癌癥的早期診斷具有重要意義[10]。然而有也一些研究持相反態(tài)度[11]。

通過上述實(shí)驗(yàn)，可以明確知道Periostin蛋白在大腸癌患者血清中高表達(dá)。隨著科研工作者對(duì)Periostin 蛋白的深入研究，Periostin有可能為腫瘤的早期診斷和治療以及預(yù)后觀察提供了一個(gè)新的靶點(diǎn)。Periostin蛋白在大腸癌的診斷中具有其重要的臨床意義。但是就現(xiàn)有的研究成果來看,還是存在諸多問題要解決。目前絕大部分研究表明Periostin 蛋白的高度表達(dá)與腫瘤惡性程度相關(guān),但亦有少部分研究持不同的觀點(diǎn)。也有報(bào)道指出，在人膀胱癌中，Periostin蛋白表達(dá)下降，恢復(fù)其表達(dá)可以抑制腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。Periostin在不同腫瘤中的具體作用還有待進(jìn)一步研究。怎樣尋找在不同腫瘤中periostin蛋白的調(diào)節(jié)因子,periostin蛋白是否可以調(diào)節(jié)其他細(xì)胞因子等，這些問題的解決將有利于進(jìn)一步理解periostin蛋白在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用,并為我們利用periostin蛋白進(jìn)行臨床診斷和治療提供新的依據(jù)[12]。

參考文獻(xiàn)：

[1]司志英，王長(zhǎng)征.骨膜蛋白在大腸癌的表達(dá)和意義[J].中國(guó)藥物與臨床，2012，12(3)：311.

[2]徐富星.大腸癌研究現(xiàn)狀[J].國(guó)際消化病雜志，2006，26(6)：365.

[3]Izard Tl,Evans G,Borgon RA,et al.Vinculin activation by talin through helical bundle conversion[J].Nature,2004,427(6970):171.

[4]唐小君，梅方雄，劉建邵，等.結(jié)腸癌患者腫瘤組織及血清中Periostin蛋白表達(dá)的臨床觀察[J]。臨床醫(yī)學(xué)工程，2013，20(5)：536.

[5]Ruan KI,Bao S,Ouyang G.The multifaceted role of periostion in tumorigenesis[J].Cellular and Molecular Life Sciences,2009,66(14):2219.

[6]趙曉君，孫傳玉.Periostin在惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中的作用[J].中華臨床醫(yī)師雜志，2013，7(13)：6083.

[7]賁其穩(wěn)，袁耀宗.Periostion在惡性腫瘤中的作用研究進(jìn)展[J].腫瘤防治研究，2009，36(5)：440.

[8]王洋，朱明華.Periostion與上皮源性惡性腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)系[J].第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，33(6)：659.

[9]Steeg PS.Tumor metastasis:mechanistic insights and clinical challenges[J].Nat Med,2006,12(8):895.

[10]Verena Tischler,Florian R Fritzsche1,Peter J Wild,et al.Periostin is up-regulated in high grade and high stage prostas cancer[J].BMC Cancer,2010,10:273.

[11]Lv Y,Wang W,Jia WD,et al.High-level expression of periostin is closely related to metastatic potential and poor prognosis of hepatocellular carcinoma[J].Med Oncol,2013,30(1):385.

[12]張艷，施毅.Periostin與腫瘤相關(guān)性的研究進(jìn)展[J].臨床腫瘤學(xué)雜志，2011，16(4)：364.

收稿日期：(2013-10-19)

文章編號(hào)：1007-4287(2015)04-0637-02

通訊作者*

基金項(xiàng)目：吉林省科技廳(2011713,20090461,20110739)