胃癌組織中c-erbB-2癌基因表達(dá)與胃癌主要病理特征的關(guān)系

丁兆明

(萊州市人民醫(yī)院 中心實(shí)驗(yàn)室，山東 萊州261400)

原癌基因c-erbB-2(又稱neu或HER-2)屬于受體酪氨酸激酶Ⅰ類亞家族，定位于人類17號(hào)染色體q21區(qū)帶上，編碼產(chǎn)物為Mr18500的跨膜糖蛋白(故又稱P185)，參與對細(xì)胞生長、繁殖、分裂的調(diào)控，其異常表達(dá)或基因突變時(shí)，使某些不正常細(xì)胞的獨(dú)立生長能力失控，從而發(fā)展為腫瘤細(xì)胞[1,2]，可作為卵巢癌、乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌及消化道腫瘤預(yù)后的參考指標(biāo)[3]。筆者應(yīng)用非放射性原位雜交技術(shù)檢測胃癌標(biāo)本中c-erbB-2基因的擴(kuò)增情況，分析了其與腫瘤分化、腫瘤浸潤和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)告如下。

1材料與方法

1.1臨床標(biāo)本2011年1月-2013年3月，經(jīng)我院病理確診、手術(shù)切除的胃癌標(biāo)本81例，男52例，女29例；年齡35歲-67歲，平均57.8歲。其中賁門癌35例，胃體癌29例，胃竇癌17例。胃癌組織按Lauren分型，彌漫型48例，腸型33例。根據(jù)癌組織有無明顯乳頭及腺管結(jié)構(gòu)形成，分為分化較差46例，分化較好35例。浸潤淺肌層11例，浸潤深肌層70例。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移57例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移24例。癌組織經(jīng)中性福爾馬林固定后，直接在-26℃冰凍切片機(jī)上切片，厚約4-6 μm，然后粘貼于經(jīng)APES處理的玻片上。

1.2c-erbB-2 DNA探針① c-erbB-2 cDNA探針由日本東京大學(xué)yamamoto教授惠贈(zèng)，探針長度461 bp，為c-erbB-2 cDNA的Dra Ⅰ和Sma Ⅰ雙酶切產(chǎn)物。②隨機(jī)引物延伸法進(jìn)行非放射性地高辛配基-11-dUTP摻入標(biāo)記，標(biāo)記試劑盒為Boehringer mannheims公司產(chǎn)品(由華美生物工程公司提供)，點(diǎn)雜交檢測探針靈敏度為0.1 pg DNA。

1.3原位雜交①用0.1N HCl、RNase A、蛋白酶k處理切片，0.1%甘氨酸中止。②滴加預(yù)雜交液(含有：4×SSC，50%甲酰胺，1×Denhardt液，0.5%PEG，0.5 mg/ml ssDNA)，放置室溫1 h。③再加雜交液(探針濃度0.2 μg/ml)，用硅化蓋片復(fù)蓋組織，置甲酰胺濕盒內(nèi)，95℃ 10-15 min。④直接移置42℃濕箱中雜交過夜。⑤在2×SSC 中滑除蓋片，洗滌后加堿性磷酸酶標(biāo)記的抗地高辛抗體(1∶500稀釋)2 h。⑥洗滌后加NBT和BCIP混合底物，避光顯色，TE終止，核固紅復(fù)染，封片。⑦顯微鏡檢查，腫瘤細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)細(xì)小的紫藍(lán)色至粗大的深紫色顆粒為陽性。

圖1　胃癌細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)的c-erbB-2陽性顆粒(400×)

2結(jié)果

2.1c-erbB-2在胃癌組織中的表達(dá)胃癌標(biāo)本中c-erbB-2擴(kuò)增陽性結(jié)果見圖1，陽性率為50.6%。81例胃癌標(biāo)本擴(kuò)增結(jié)果與病理特征的關(guān)系見表1。

2.2C-erbB-2的表達(dá)與胃癌主要病理特征或惡性程度的相關(guān)性分析C-erbB-2的表達(dá)與胃癌的發(fā)展三大病理參數(shù)，即腫瘤的分化、組織浸潤和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系，探討其相關(guān)性。

在胃癌分化程度方面，有35例(43.2%，35/81)高分化胃癌和46例(56.8%,46/81)低分化胃癌。其中41例c-erbB-2陽性病例中，12例高分化胃癌，占總樣本的14.8%(12/81)，占高分化組的34.3%(12/35)。29例在低分化胃癌組，占總數(shù)的35.8%(29/81)和占低分化組63.0%(29/46)，(χ2= 6.576，P<0.001)(圖2)。

表1　c-erbB-2基因表達(dá)與胃癌病理特征的關(guān)系

NS:not significant*Chi-square test

在胃癌的侵襲方面，有11例(13.6%，11/81)胃癌浸潤僅限于淺肌層，70例(86.4%，70/81)胃癌侵犯外深肌層。在淺肌層浸潤的情況下，C-erbB-2的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)2例，占該組的18.2%(2/11)或研究的總樣本的2.5%(2/81)。另一方面，在深部肌肉浸潤的情況下，C-erbB-2的表達(dá)，觀察到39例，占該組的55.7%(39/70)或研究的總樣本的48.1%(39/81)。在C-erbB-2的這兩個(gè)群體之間的表達(dá)有非常顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(χ2=5.357，P<0.025)(圖2)。

圖2　c-erbB-2過度表達(dá)與胃癌病理特征的關(guān)系

好=高分化，差=低分化;S=腫瘤侵犯淺肌層，D=腫瘤侵犯深肌層;LN(-)=淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性，淋巴結(jié)(+)=淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性。其中c-erbB-2的表達(dá)率為低分化胃癌(35.8%)，明顯高于高分化胃癌(14.8%)(P<0.001)；胃癌侵犯深肌層(48.1%)明顯高于胃癌侵犯淺肌層(2.5%)(P<0.025)；而胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(42.0%)遠(yuǎn)高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(8.6%)(P<0.025)。

在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方面，有57例(70.4%，57/81)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，有24例(29.6%，24/81)無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。淋巴結(jié)陽性組，C-erbB-2的表達(dá)中發(fā)現(xiàn)34例，占本小組的59.6%(34/57)，占研究的總樣本的42.0%(34/81)。相反，在淋巴結(jié)陰性組，C-erbB-2的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)7例，占該組總數(shù)的21.2%(7/24)或總樣本的8.6%(7/81)。這兩個(gè)群體之間的差異達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2= 6.278，P<0.025)(圖2)。

3討論

早期的研究中，C-erbB-2蛋白在胃癌的表達(dá)率為9%-44.6%[4-8]，我們用非放射性原位雜交技術(shù)檢測C-erbB-2蛋白在胃癌中的表達(dá)率為50.6%(41/81)，比其高出了許多。究其原因有：首先，我們大部分的病人都是晚期的胃癌， 81例腫瘤中，57(70.3%)例有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，70(86.4%)例有腫瘤擴(kuò)散至深肌層；第二，我們獲得的胃癌組織是在手術(shù)后立即取材，在液氮中冷凍保存，故所獲標(biāo)本新鮮，可以保留該基因產(chǎn)物為最大。另一方面，以往大多數(shù)研究采用免疫組織化學(xué)方法研究c-erbB-2的表達(dá)，標(biāo)本大都是各種固定劑固定后石蠟包埋的組織塊。這種標(biāo)本經(jīng)固定、石蠟包埋影響胃癌C-erbB-2基因的免疫組化結(jié)果[9]，降低了靈敏度。

有作者報(bào)道，在胃黏膜輕度異型增生、中度異型增生、重度異型增生組織中，隨病變加重，c-erbB-2基因表達(dá)呈上升趨勢[10]，本文研究表明，c-erbB-2基因與胃癌組織分化程度、浸潤深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)，分化程度越差、浸潤深度越深、淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移，c-erbB-2基因表達(dá)率越高，說明c-erbB-2基因的活化在癌細(xì)胞浸犯胃壁深度至淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的過程中起著一定的作用，參與胃癌的發(fā)生發(fā)展過程。

參考文獻(xiàn)：

[1] MI Jian Qiang,Yang Shi Qing，SHEN Ming Chang.The expression of c-erbB-2 proto oncogene prod uct in gastric carcinoma and precancerous lesions[J].Chin J New Gastroenterol,1997,5(3):152.

[2]GUO Chang Qing,WANG Yu Ping,LIU Guo Yong,et al.Study on Helicobacter pylori infection and P53,c-erbB-2 gene expression in carcinogensis of gastric mucosa[J].WCJD,1999,7(2):114.

[3]賈振軍，韓金聲，李華新.胃癌組織中c-erbB-2和ki67的表達(dá)及臨床意義[J].中國現(xiàn)代普通外科進(jìn)展，2014，5:552.

[4]Sanidas EE,Filipe MI,Linehan J,et al.Expression of the c-erbB-3 gene product in gastric cancer[J].Int J Cancer,1993,54:935.

[5]Ninomiya I,Yonemure Y,Matsumoto H,et al.Expression of c-myc product in gastric carcinoma[J].Oncology,1991,48:149.

[6]Ninomiya I,Yonemure Y,Matsumoto H,et al.Expression of c-myc product in gastric carcinoma[J].Oncology,1991,48:149.

[7]丁春明，喻鋼，朱寶華.P53和c-erbB-2表達(dá)與胃癌進(jìn)展的關(guān)系[J].實(shí)用癌癥雜志，2011,26(1)：31.

[8]李小雷，王曉琦，屈海鷗.胃復(fù)春和維A酸對胃癌前病變患者基因Rb與c-erbB-2表達(dá)的影響[J].中國臨床藥理學(xué)雜志，2014,30(6)：493.

[9]Chiu KY,Loke SL,Ho FC.Immunohistochemical demonstration of c-erbB-2 oncoprotein in gastric adenocarcinoma:comparison of cryostat and paraffin wax sections and effect of fixation[J].J Clin Pathol,1994,47:117.

[10]蘇秀麗，金建軍.Rb與c-erbB-2基因在胃癌前病變組織中的表達(dá)及其臨床病理意義[J].河南科技大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2012,30(2)：87.

收稿日期：(2013-11-20)

文章編號(hào)：1007-4287(2015)04-0635-03