孕婦血型IgG抗體效價與新生兒溶血病發(fā)病率關(guān)系的分析

蔡忠鶴1,2，遇紅梅1,劉鐵梅1*

(1.吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院 輸血科，吉林 長春130033;2.吉林省婦幼保健院)

新生兒溶血病(hemolytic disease of the newborn，HDN)是因母胎紅細(xì)胞血型不合，母體的免疫系統(tǒng)被胎兒紅細(xì)胞致敏而產(chǎn)生血型IgG類抗體，這種血型IgG類抗體可以通過胎盤進入胎兒的血液循環(huán)，胎兒的紅細(xì)胞被母親的IgG血型抗體包被，并在嬰兒的單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)內(nèi)受到破壞而引起的免疫性溶血性疾病[1]。溶血出現(xiàn)后繼發(fā)引起胎兒或新生兒發(fā)生貧血、肝脾腫大等癥狀，嚴(yán)重者可產(chǎn)生核黃疸等后遺癥，甚至造成胎兒死亡。在我國，母嬰血型不合引起的免疫性溶血病中，ABO血型不合者最常見，Rh血型次之。因此，對懷疑可能產(chǎn)生HDN的孕婦進行產(chǎn)前血型IgG抗體的檢測是預(yù)防HDN的有效方法。本實驗通過檢測HDN患兒溶血三項試驗與血清膽紅素指標(biāo)，以及患兒母親抗體效價，來分析孕婦血型抗體的效價與HDN發(fā)生率及溶血程度的關(guān)系。

1材料與方法

1.1研究對象收集2012年9月-2013年9月期間，在吉林省婦幼保健院產(chǎn)前檢測孕婦及新生兒樣本200例。樣本要求：孕婦血清IgG抗A(B)≥64；生產(chǎn)后新生兒為足月生產(chǎn)；排除其他異常的患兒，出生后48 h內(nèi)采集新生兒及患兒母親EDTA抗凝血各2 ml送檢血樣。

1.2主要試劑與實驗設(shè)備新生兒溶血病檢測卡1(ABO/RHD血型，直接抗人球蛋白試驗)，微柱凝膠法新生兒溶血病檢測卡2(游離抗體試驗、抗體釋放試驗)，ABO標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞，F(xiàn)YQ型免疫微柱孵育器、TD-3A血型血清學(xué)專用離心機、低速離心機、酸放散試劑均由長春博訊生物技術(shù)有限責(zé)任公司提供。

1.3檢測方法

1.3.1ABO/RhD血型定型及紅細(xì)胞直接抗人球蛋白試驗(DAT)按照試劑說明書操作和判斷，將細(xì)胞用生理鹽水充分洗滌3遍，最后一遍將上清去除干凈，然后加100 μl抗人球蛋白試劑，3 400 rpm離心15秒，在顯微鏡下觀察結(jié)果，有凝集為陽性，無凝集為陰性。直接抗人球蛋白試驗陽性說明新生兒的紅細(xì)胞已經(jīng)被血型IgG抗體致敏。

1.3.2游離IgG抗體試驗按照試劑說明書操作和判讀，取試管3支，分別標(biāo)記Ac、Bc、Oc，每管中各加100 μl血清及相應(yīng)A型、B型試劑。紅細(xì)胞以及3人份混合的O型篩選用試劑細(xì)胞各50 μl，置37℃水浴30 min取出，用生理鹽水洗滌3次，最后一次控干上清，然后在各管中加100 μl抗人球蛋白試劑，血清學(xué)專用離心機3 400 rpm，離心15 s后，判讀結(jié)果。游離IgG抗體試驗陽性說明在新生兒血清中有相應(yīng)的IgG抗體，表明血清中仍然存在未致敏的紅細(xì)胞血型IgG抗體。

1.3.3抗體放散試驗用生理鹽水將細(xì)胞充分洗滌4到6次，取1體積洗滌后壓積紅細(xì)胞加等體積的生理鹽水，置56℃水浴10 min，其間不斷振搖，然后在預(yù)溫的離心管中以3 000 rpm，離心1 min，立即將上層紅色放散液轉(zhuǎn)移到另一試管中。取上清放散液分成3份，于標(biāo)有A、B、O的試管中，分別加入相應(yīng)的A、B、O試劑紅細(xì)胞各1滴，置37℃水浴30 min，用生理鹽水洗滌3次，最后一次控干上清，然后在各管中加100 μl抗人球蛋白試劑，血清學(xué)專用離心機3 400 rpm，離心10 min，判讀結(jié)果。抗體放散試驗陽性表明致敏紅細(xì)胞通過酸放散將抗體釋放出來，即可判斷新生兒溶血病成立。

1.4統(tǒng)計學(xué)分析采用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件進行分析，孕婦血型抗體效價與HDN發(fā)生率計數(shù)資料采用χ2檢驗，以P<0.05為具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2實驗結(jié)果

2.1HDN的診斷對有HDN臨床指征患兒進行ABO血型定型及HDN溶血3項試驗，同時參考其血清膽紅素檢測值，診斷HDN，標(biāo)準(zhǔn)如下：①母嬰ABO或Rh血型不合；②高膽紅素血癥；③新生兒溶血3項試驗中，直接抗人球蛋白試驗或血型抗體放散試驗陽性。新生兒溶血3項檢驗陽性者確診為新生兒溶血病，陰性者確診為新生兒病理性黃疸。按照此標(biāo)準(zhǔn)，判斷200例新生兒標(biāo)本中有131例檢測為陽性，69例為陰性(見表1)。

表1　200例新生兒溶血三項試驗結(jié)果

2.2高危孕婦抗體效價與HDN關(guān)系在本院生產(chǎn)200例夫婦ABO血型不合、IgG抗A(B)效價≥64的孕婦，其產(chǎn)后嬰兒經(jīng)血型血清學(xué)試驗證實為母/嬰血型不合(主要為O/A，O/B，O/AB組合)ABO-HDN 131例，發(fā)生率為65.5%。血型分布間陽性率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)(見表2)。

2.3血型IgG抗體效價與新生兒黃疸關(guān)系產(chǎn)后經(jīng)確證為HDN患兒進行血清間接膽紅素檢測，對比母親血型IgG抗體效價發(fā)現(xiàn)，隨母體血型抗體效價的升高，患兒血清間接膽紅素水平有升高趨勢，說明母體血型抗體效價水平可以影響患兒血清間接膽紅素水平 (見表3)。

表2　高危孕婦IgG抗A(B)效價與HDN關(guān)系

表3　母抗體效價與患兒血清間接膽紅素關(guān)系

3討論

孕婦的血型IgG抗體經(jīng)胎盤進入胎兒血液循環(huán)后，與胎兒紅細(xì)胞表面抗原相結(jié)合，最后這些結(jié)合抗體的紅細(xì)胞被胎兒的單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)破壞，可引起胎兒的貧血、水腫、流產(chǎn)、死胎、早產(chǎn)及新生兒溶血病。對于新生兒來說危害最大的是膽紅素腦病，即核黃疸，此病可造成新生兒的早期死亡。在我國，母嬰血型不合所造成的新生兒溶血病以ABO血型不合最為常見，但發(fā)病較輕，常規(guī)臨床治療即可使癥狀減輕或消失。所以找到有效的監(jiān)測新生兒溶血病的方法，對診斷和治療HDN有重要意義。目前，檢測母體IgG血型抗體效價是預(yù)測HDN嚴(yán)重程度的最常用的方法，所以對懷疑可能產(chǎn)生HDN的孕婦進行產(chǎn)前血型IgG抗體的檢測是預(yù)防HDN的有效方法[2]。

本實驗通過檢測HDN患兒溶血3項試驗與血清膽紅素指標(biāo)，以及患兒母親抗體效價，來分析孕婦血型抗體的效價與HDN發(fā)生率及溶血程度的關(guān)系。本研究結(jié)果顯示，在本院生產(chǎn)200例夫婦ABO血型不合、IgG抗A(B)效價≥64的孕婦，其產(chǎn)后嬰兒經(jīng)血型血清學(xué)試驗證實為母嬰血型不合的ABO-HDN共 131例，發(fā)生率為65.5%，說明產(chǎn)前檢測血型IgG抗體效價≥64可以預(yù)測HDN的發(fā)生率。血型分布間陽性率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，說明血型抗體的種類與HDN發(fā)病無關(guān)。

產(chǎn)后經(jīng)溶血3項試驗確證為HDN的患兒進行血清間接膽紅素檢測，然后將血清間接膽紅素與母親血型IgG抗體效價進行關(guān)聯(lián)分析，結(jié)果顯示，隨母體血型抗體效價的升高，患兒血清間接膽紅素水平有升高趨勢，說明母體血型IgG抗體效價水平可以預(yù)示患兒血清間接膽紅素水平。但孕期抗體效價正常者也可發(fā)病，且抗體效價≥256者新生兒發(fā)病時間也有可能發(fā)生滯后發(fā)病的情況[3]，這可能是因為母親在懷孕前，就有可能接觸過產(chǎn)生高效價的血型IgG抗體的原因，但同時還與胎兒或新生兒紅細(xì)胞A/B抗原的強弱程度、胎盤屏障作用、血型物質(zhì)含量的多少以及IgG亞類(IgGl和IgG3型抗體的量與溶血嚴(yán)重性有線性關(guān)系，IgG4則關(guān)系不大)等因素相關(guān)[4]。

導(dǎo)致新生兒膽紅素升高病因有多種，如ABO及Rh溶血癥、G6PD缺陷癥(遺傳性葡萄糖-6-磷酸脫氫酶缺乏癥)、早產(chǎn)因素、敗血癥等，由于我國人口眾多，醫(yī)療資源地區(qū)間分布很不平衡，且亞洲人本身又是高膽紅素血癥的高危人群，近年來有研究指出[5]，我國膽紅素腦病和核黃疸的發(fā)生率高于西方國家，且高膽紅素血癥導(dǎo)致膽紅素腦病的新生患兒中伴發(fā)ABO及Rh溶血的發(fā)生率為35.9%，可見母嬰血型不合溶血病是膽紅素升高的主要病因。綜上所述，對夫婦ABO血型不合進行產(chǎn)前母抗體效價檢測，能部分判斷HDN病的發(fā)生，但應(yīng)與產(chǎn)后臨床相結(jié)合，以便對該病有更好的預(yù)防和診斷。

參考文獻：

[1]張櫻子，趙玉河，高冀輝，等.不規(guī)則抗體篩選在新生兒溶血病中的臨床診療[J].臨床血液學(xué)雜志，2014，27(8)：656.

[2]肖倩,辛榮傳, 周益強,等.孕母IgG抗體效價與新生兒溶血病發(fā)病率的相關(guān)性研究[J].中國婦幼保健,2009，24(1):72.

[3]陶華.產(chǎn)前檢測抗體預(yù)防母兒ABO血型不合新生兒溶血病259例臨床觀察[J].中國婦幼保健,2011,26(20):3085.

[4]白英明，賴福才，王梁平，等.血型不合夫婦孕婦產(chǎn)前新生兒溶血病特異性抗體效價的評估[J].廣東醫(yī)學(xué)2009，30(7)：1142.

[5]Subspecialty Group of Neonatology, Society of Pediatrics, Chinese Medical Association，Chinese Multicenter Study Coordination Group for Neonatal Bilirubin Encephalopathy.Clinical characteristics of bilirubin encephalopathy in Chinese newborn infants-a national multicenter survey[J].Zhonghua Er Ke Za Zhi,2012,50(5):331

收稿日期：(2014-03-11)

文章編號：1007-4287(2015)04-0629-03

通訊作者*

基金項目：吉林省衛(wèi)計委基金(3D5140523430)