馬胤雪，閆惠平，張海萍，馮　霞，孫麗梅，趙丹彤

(首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京佑安醫(yī)院 感染與免疫研究中心·乙型肝炎與肝癌轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京100069)

抗核仁抗體在肝病患者中的檢測(cè)及其意義

馬胤雪，閆惠平*，張海萍，馮霞，孫麗梅，趙丹彤

(首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京佑安醫(yī)院 感染與免疫研究中心·乙型肝炎與肝癌轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京100069)

(ChinJLabDiagn,2015,19:0567)

抗核仁抗體(anti-nucleolar antibodies,ANoAs)是Beck等在1962年用間接免疫熒光法在自身免疫病患者血清中首次確認(rèn)的[1]，被認(rèn)為與系統(tǒng)性硬化癥(Systemic sclerosis，SSc)相關(guān)，在少數(shù)其他自身免疫病和腫瘤患者中亦可檢測(cè)到。我們?cè)诙嗄甑墓ぷ髦邪l(fā)現(xiàn)，很多肝病患者血清抗核仁抗體陽(yáng)性。然而，抗核仁抗體陽(yáng)性主要見(jiàn)于哪種類(lèi)型的肝病患者，與患者的病情進(jìn)展是否相關(guān)還不太清楚。我們總結(jié)了抗核仁抗體在肝病患者中的分布特征如下。

1對(duì)象與方法

1.1　研究對(duì)象

研究對(duì)象來(lái)自2012年1月至5月期間住院及門(mén)診的5506例肝功能異?；颊咔宄靠崭共豢鼓? ml,離心后吸取血清，-20℃冰箱保存。

1.2　檢測(cè)方法

1．2.1間接免疫熒光法(IIF)檢測(cè)血清中抗核抗體(anti-nuclear antibody，ANA)、抗線(xiàn)粒體抗體(anti-mitochondrial antibody，AMA)、抗平滑肌抗體(anti-smooth muscle antibody，SMA)等，使用德國(guó)歐蒙公司的自身抗體試劑盒，本法采用Hep-2細(xì)胞和5種組織(猴肝臟、猴心肌組織、猴髂腰肌、大鼠胃和大鼠腎)的冰凍切片作為抗原，以生物薄片技術(shù)將帶有細(xì)胞和組織的6種切片組合成一個(gè)反應(yīng)區(qū)。待檢血清按1∶100稀釋?zhuān)c各種組織細(xì)胞共同孵育30 min，洗片，加入酶標(biāo)記物，繼續(xù)孵育30 min，洗凈后用甘油封片。在熒光顯微鏡下判讀結(jié)果。組織或細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)特征性綠色熒光，血清稀釋度 ≥1∶100為陽(yáng)性。通過(guò)鏡下ANA的核型篩選出抗核仁抗體。

1.2.2診斷標(biāo)準(zhǔn)原發(fā)性膽汁性肝硬化(PBC)的診斷參照2009年美國(guó)肝病學(xué)會(huì)“PBC診斷治療指南”[2]，自身免疫性肝炎(AIH)的診斷參照 2010年國(guó)際自身免疫性肝炎工作組制定的診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]，乙型、丙型病毒性肝炎及肝硬化參照2010年中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病學(xué)分會(huì)、中華醫(yī)學(xué)會(huì)感染病學(xué)分會(huì)制定的《慢性乙肝防治指南》[4]和2004年中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病學(xué)分會(huì)、中華醫(yī)學(xué)會(huì)傳染病與寄生蟲(chóng)病學(xué)分會(huì)制定的《丙型肝炎防治指南》[5]。

1.3　統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2結(jié)果

2.1　抗核仁抗體的檢出情況

5506例肝病患者血清中檢測(cè)出抗核仁抗體陽(yáng)性的患者為264例，占4.8%。陽(yáng)性結(jié)果中抗核仁抗體滴度1∶100的有170例，占陽(yáng)性的64.4%；滴度1∶320的有53例，占20.1%；滴度≥1∶1 000的有41例，占15.5%，部分患者同時(shí)檢出伴有一種或兩種其他自身抗體。主要比例分布見(jiàn)表1。

表1　264例抗核仁抗體陽(yáng)性患者的滴度分布和伴有其他自身抗體情況

2.2　264例抗核仁抗體陽(yáng)性患者的年齡分布情況

264例抗核仁抗體陽(yáng)性患者中男性149例(56.4%)，平均年齡48±14歲；女性115例(43.6%)，平均年齡51±14歲。其中40-59歲患者比例較高。年齡分段百分比見(jiàn)表2。

表2　264例抗核仁抗體陽(yáng)性患者年齡段分布【n(%)】

2.3　264例抗核仁抗體陽(yáng)性患者肝病臨床分期和抗體滴度分布情況

264例抗核仁抗體陽(yáng)性肝病患者中肝炎155例(58.7%)，肝硬化81例(30.7%)，肝癌28例(10.6%)。264例抗核仁抗體陽(yáng)性的肝炎、肝硬化和肝癌患者中，以低滴度為主(1∶100)，其中以肝硬化患者的比例稍高；而高滴度(≥1∶1 000)比例在肝癌中明顯升高，可見(jiàn)抗核仁抗體高滴度以在肝癌患者中較為常見(jiàn)。見(jiàn)表3。

2.4　264例抗核仁抗體陽(yáng)性患者的病原病因分布情況

抗核仁抗體陽(yáng)性患者按病原病因可分為乙肝(112例)、丙肝(60例)、甲&戊肝(8例)、自身免疫性肝病(7例)、藥物性肝病(34例)、酒精性肝病(16例)、脂肪肝(7例)、不明原因性肝病(20例)。按滴度分為1∶100和≥1∶320兩組，每種病因各自計(jì)算其所占比例，發(fā)現(xiàn)在高滴度(≥1∶320)中自身免疫性肝病(85.7%)所占比例最高，藥物性肝病(70.6%)次之?？梢?jiàn)抗核仁抗體陽(yáng)性患者在自身免疫性肝病和藥物性肝病中比較常見(jiàn)。按病原病因分組見(jiàn)表4。

表3　抗核仁抗體在肝炎、肝硬化和肝癌患者中的滴度分布

表4　264例抗核仁抗體陽(yáng)性患者的病原病因分布情況

3討論

核仁是由蛋白質(zhì)和核糖體DNA組成的獨(dú)特球形結(jié)構(gòu)，位于細(xì)胞核內(nèi)。抗核仁抗體可以識(shí)別多種核仁結(jié)構(gòu)組分，包括Th/To-RNP,U3-RNP,RNAP-Ⅰ,RNAP-Ⅱ和RNAP-Ⅲ。目前，抗核仁抗體被認(rèn)為與SSc的病情進(jìn)展及預(yù)后相關(guān)。SSc患者血清中，不同類(lèi)型抗核仁抗體的陽(yáng)性率不同，但未有高過(guò)20%-30%?？购巳士贵w在其他自身免疫性疾病和腫瘤中也可以檢測(cè)到。夏晴等報(bào)道自身抗體陽(yáng)性的癌癥患者中約有10.9%的有抗核仁抗體成分[6]。

肝病患者的自身抗體以非器官特異性的ANA為主，常見(jiàn)的核型包括顆粒型、均質(zhì)型、核仁型、著絲點(diǎn)等。閆惠平等報(bào)道，在PBC患者中，ANA陽(yáng)性的患者以核膜性、核點(diǎn)型和著絲點(diǎn)型最多見(jiàn)，少見(jiàn)的熒光模式有抗干燥綜合征A/B、細(xì)胞核均質(zhì)型、核仁型及顆粒型等[7]。張海萍等報(bào)道5.3%的HBV感染患者自身抗體的熒光模式表現(xiàn)為核仁型[8]。但是抗核仁抗體在肝病患者中的報(bào)道比較零散，病例數(shù)有限。我們研究了5506例各種病因的肝功能異?；颊撸治隽似渲锌购巳士贵w的檢測(cè)結(jié)果，發(fā)現(xiàn)：(1)4.8%(264例)的肝功異常患者抗核仁抗體陽(yáng)性，以低滴度為主，但是264例中有35.6%的患者表現(xiàn)為

高滴度(≥1∶320)。(2)抗核仁抗體陽(yáng)性患者中男性149例(56.4%)，女性115例(43.6%)。以40-59歲患者比例較高。(3)抗核仁抗體在肝炎(155例)、肝硬化(81例)和肝癌(28例)患者血清中可被檢測(cè)到，且以低滴度為主(1∶100)。其中肝硬化患者的比例稍高(比例分別為62.6% VS 70.4% VS 57.1%)；而在高滴度(≥1∶1000)中，肝癌患者抗核仁抗體的比例明顯升高，可見(jiàn)抗核仁抗體高滴度以在肝癌患者中較為常見(jiàn)(比例分別為16.1% VS 11.1% VS 25.0%)。提示在慢性肝病進(jìn)展過(guò)程中自身免疫的變化可能多集中在與細(xì)胞增殖，分裂有關(guān)的核仁成份上。(4)按病原病因可分為乙肝、丙肝、甲&戊肝、自身免疫性肝病、藥物性肝病、酒精性肝病、脂肪肝、不明原因性肝病。在高滴度(≥1∶320)中自身免疫性肝病(85.7%)所占比例最高，藥物性肝病(70.6%)次之。可見(jiàn)抗核仁抗體陽(yáng)性患者在自身免疫性肝病和藥物性肝病中比較常見(jiàn)。

參考文獻(xiàn)：

[1]Beck JS，Anderson JR，Mc EA，et al.Antinucleolarantibodies[J].Lancet,1962,2：575.

[2]Lindor KD,Gershwin ME,Poupon R,et al.Primary biliary cirrhosis[J].Hepatology,2009,50:291.

[3]Manns MP,Czaja AJ,Gorham JD,et al.Diagnosis and management of autoimmune hepatitis[J].Hepatology,2010,51(6):2193.

[4]中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病學(xué)分會(huì)，中華醫(yī)學(xué)會(huì)感染病學(xué)分會(huì)[J].慢性乙型肝炎防治指南.中華肝臟病雜志，2011，19(1)13.

[5]2004年中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病學(xué)分會(huì)，中華醫(yī)學(xué)會(huì)傳染病與寄生蟲(chóng)病學(xué)分會(huì)[J].丙型肝炎防治指南，2004，12(4)：192.

[6]夏晴,仲人前,范列英，等.385例癌患者自身抗體檢測(cè)結(jié)果分析[J].上海醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志,2001，16(1):5．

[7]閆惠平，莊輝，劉燕敏，等．原發(fā)性膽汁性肝硬化患者的免疫學(xué)特點(diǎn)分析[J].中華肝臟病雜志；Vol.13(1)：12．

[8]張海萍，閆惠平，馮霞,等．乙肝病毒感染者血清抗核抗體特征及其臨床相關(guān)性[J].首都醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，28(2):154．

摘要：目的探討肝病患者中抗核仁抗體(ANoAs)出現(xiàn)的特點(diǎn)及其臨床意義。方法采用間接免疫熒光法對(duì)5506例肝病患者進(jìn)行抗核抗體(ANA)、抗線(xiàn)粒體抗體(AMA)、抗平滑肌抗體(SMA)等檢測(cè)，通過(guò)鏡下ANA的核型篩選出抗核仁抗體。結(jié)果(1)5506例患者中抗核仁抗體陽(yáng)性患者為264例(4.8%)。其中64.4%為1∶100(170例)、20.1%為1∶320(53例)、15.5%為≥1000(41例)。部分患者伴有其他自身抗體。(2)在264例抗核仁抗體陽(yáng)性肝病患者中肝炎為155例、肝硬化為81例和肝癌為28例，病因包括甲、乙、丙型等病毒性感染、藥物性、酒精性、自身免疫性等多種原因。抗核仁抗體以低滴度(1∶100)為主，以肝硬化患者的比例稍高(比例分別為：62.6% VS 70.4% VS 57.1%)；而高滴度抗核仁抗體(≥1∶1000)中以在肝癌患者中較為常見(jiàn)(比例分別為：16.1% VS 11.1% VS 25.0%)。(3)抗核仁抗體男性149例(56.4%)，女性115例(43.6%)。以40-59歲患者比例較高。結(jié)論抗核仁抗體以40-59歲患者較多。在肝炎、肝硬化和肝癌患者血清中均可被檢測(cè)到，以低滴度(1∶100)為主，肝硬化患者的比例稍高；而在高滴度(≥1∶1000)中，抗核仁抗體以在肝癌患者中較為常見(jiàn)。提示在慢性肝病進(jìn)展過(guò)程中自身免疫的變化可能多集中在與細(xì)胞增殖，分裂有關(guān)的核仁成份上。

關(guān)鍵詞：自身抗體，抗核仁抗體；肝硬化；肝癌；

Detection and Significance of Antibodies to nucleolus in patients with various liver diseasesMAYin-xue,YANHui-ping，ZHANGHai-ping,etal.(DepartmentofInfectionandImmunity,BeijingYou'anHospital,CapitalMedicalUniversity，Beijing100069，China)

Abstract:ObjectiveTo investigate the features and clinical significance of anti-nucleolar antibodies(ANOAS) in patients with various liver diseases.Methods5506 serum samples from patients with various liver diseases were detected anti-nuclear antibody(ANA),anti-mitochondrial antibody(AMA),anti-smooth muscle antibody(SMA) by indirect immunofluorescent assay(IIF),The ANOAS pattern is recognized by immunofluorescence using hep-2 cells as substrate.Results(1)264 of the 5506 patients with various liver diseases(4.8%) were ANOAS positive,In 264 ANOAS positive patients,64.4% had an ANOAS titer of 1∶100,20.1% 1∶320(53 cases) and 15.5% more than 1∶1 000(41 cases).Some patients were with other autoantibodies.(2) Among 264 ANOAS positive cases,155 with hepatitis,81 with liver cirrhosis(LC) and 28 with hepacellular carcinoma(HCC) the causes including Hepatitis A/B/C virus infection,drug,alohol,autoimmune and other reasons.Low titer(1∶100) of ANOAS was presented in the 3 groups,the high titre(1∶1 000) was more common among hepatitis group,LC group and HCC group(respectively:16.1% vs 11.1% vs 25%).(3) Among 264 ANOAS positive patients,149 were male(56.4%),115 female(43.6%).The Age of ANOAS positive patients was ranging from 40-59 years old.ConclusionThe age of ANOAS positive are common in 40-59 years old.low titer(1:100) of ANOAS was presented in the hepatitis group,LC group and HCC group.The high titer(1:1000) are more common founded in HCC group,indicating that autoimmune phenomenon may be concentrated in the nucleolus related with cells proliferation and division related components.

Key words:Autoantibodies；Anti-nucleolar antibodies；Liver cirrhosis；Hepacellular carcinoma

收稿日期：(2014-03-17)

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

中圖分類(lèi)號(hào)：R575.2

文章編號(hào)：1007-4287(2015)04-0567-03

通訊作者*,yhp503@126.com

基金項(xiàng)目：衛(wèi)生部醫(yī)藥衛(wèi)生科技發(fā)展研究中心(28-5-5)