張瑞嫻，吳有全，鄭雪蓮，李煒煊（佛山市第一人民醫(yī)院檢驗科，廣東528000）

酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）是酶免疫測定方法中應用最廣的技術(shù)，既可用于定性，又可用于定量檢測。其基本方法是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面，使抗原-抗體反應在固相表面進行，通過洗滌去除未與固相載體結(jié)合的游離成分，加底物顯色進行測定。ELISA 具有操作簡單，靈敏度高，特異性好，廣泛應用于臨床免疫檢驗，是醫(yī)學檢驗實習生必須掌握的最基本的試驗操作。ELISA 在操作過程中有很多需要注意的事項，現(xiàn)將作者在日常帶教中認為的關(guān)鍵點及如不慎加入孔外則注意事項總結(jié)如下。

1 實習前的培訓

實習生在進行ELISA 操作前首先閱讀相應項目的操作規(guī)程，本科免疫室使用ELISA 法的項目有11 個，每個試驗的操作規(guī)程都不一樣，要求每位實習生熟悉每個項目的操作規(guī)程，需要每位實習生多花時間和付出一定的努力，做好這項工作對后面的操作起到很大的作用。

2 試驗過程中帶教的注意事項

本科免疫室使用ELISA 方法的試驗很多，以下是ELISA 操作過程中的一些注意事項。試劑從冰箱取出后，必須在室溫放置30 min[1]再進行檢測，試劑使用前應搖勻，盡量避免有溶血、黃疸、脂血或被微生物污染的標本[2]。加樣前要求學生先檢查標本狀態(tài)，對不合格標本退回并要求重抽。用全自動加樣系統(tǒng)，標本加完后要求學生注意是否有漏加的情況，如果漏加了，則用加樣器補上。加酶結(jié)合物和底物一般用8 頭加樣器，套吸嘴時要注意是否有套緊，否則加樣量會減少，引起加樣不準確，加液時要加在ELISA 板孔的底部，避免濺出、產(chǎn)生氣泡等。特別是加酶試劑，操作時不能濺到微孔板的外面，酶試劑要加在微孔板的中央，否則很容易使結(jié)果產(chǎn)生假陽性。加酶試劑是整個ELISA 試驗中最重要的步驟，這個步驟做好了，這個試驗的質(zhì)量就得到了保證。加底物時，各種試劑盒的顯色劑不能混用。孵育時間和溫度嚴格按照操作說明書規(guī)定， 溫育的條件對結(jié)果有一定影響[3]，加樣完畢后封上封紙防止標本或反應液蒸發(fā)在孔壁上。洗板的次數(shù)可能對結(jié)果有影響[4-5]，要嚴格按照說明書規(guī)定的次數(shù)使用專用洗液。 洗板前應先將洗板機管道清洗干凈將洗液注滿管道， 保證洗液充滿各孔，洗板結(jié)束后，應在脫水機上脫去反應板殘留的少量洗液。顯色是ELISA 反應中最重要的一個步驟，關(guān)系著試驗的成敗。 孵育時要按照操作規(guī)程掌握好孵育的時間和溫度[6]。在加顯色劑時不能加到孔外，應用洗水紙吸干；加終止液時不能產(chǎn)生氣泡；為了提高分析樣本的準確度，應用酶標儀判讀檢測結(jié)果，先打開酶標儀電源預熱15 min， 比色前把酶標板底部用吸水紙吸干，然后將板放在酶標儀架上。

3 重視培養(yǎng)學生的質(zhì)量控制

每批標本都要做空白對照陰性對照、陽性對照和質(zhì)控，保證操作的質(zhì)量。

4 生物安全教育

ELISA 檢測的對象多為感染性的標本，因此，對實習生的生物安全教育很重要[7]，一些標本，如梅毒、艾滋病、乙型肝炎、丙型肝炎試劑盒的陽性對照有一定的危害，需妥善處理[8]；如果懷疑是艾滋病的標本，要用有效氯為2 000 mg/L 的消毒液浸泡30 min 后清潔處理。

總之，ELISA 是檢驗醫(yī)學實習中最基本的檢驗技術(shù)操作，操作過程中有許多細致的步驟和注意事項，要嚴格按照操作規(guī)程認真仔細地進行。避免假陽性和假陰性結(jié)果的出現(xiàn)，保證檢測結(jié)果真實可靠。

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[2] 孫鑫，陳彥，張繼瑜，等. 不同程度溶血對ELISA 法檢測血清HBVM的影響[J]. 世界感染雜志，2004，4（2）：174-176.

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[4] 馬蘭，吳濤，樸桂花，等. ELISA 檢測HBSAG 洗板方法的探討[J]. 中國誤診學雜志，2011，11（35）：8596.

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[6] 葉煉，趙政，王芳，等. 酶聯(lián)免疫試驗兩步法檢測乙型肝炎病毒表面抗原的影響因素分析[J]. 檢驗醫(yī)學與臨床，2013，10（19）：2546-2547.

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[8] 陳利民，張凡非，劉玲，等. 淺析病原微生物試驗室生物安全管理對策[J]. 中國藥物與臨床，2014，10（14）：1457-1458.