李維超，張 囡，陳貴起

(天津市兒童醫(yī)院 天津 300074)

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HPLC法測(cè)定健胃樂(lè)合劑中槲皮素含量

李維超，張 囡，陳貴起

(天津市兒童醫(yī)院 天津 300074)

目的：建立高效液相色譜法測(cè)定健胃樂(lè)合劑中槲皮素含量。方法：色譜柱：C18(Shim-pack VP-ODS，150 mm×4.6 mm,5 μm)，流動(dòng)相：0.4%磷酸-乙腈(75∶25)，流速1 ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)256 nm。結(jié)果：槲皮素在4.016～40.16 μg/ml濃度范圍內(nèi)進(jìn)樣具有良好的線性關(guān)系(r=0.999 8),平均加樣回收率98.84%，RSD為0.77%(n=9)。結(jié)論：該方法簡(jiǎn)便靈敏準(zhǔn)確，重復(fù)性良好，可用于控制健胃樂(lè)合劑的質(zhì)量。

健胃樂(lè)合劑，槲皮素，高效液相色譜法，含量測(cè)定

健胃樂(lè)合劑為本院傳統(tǒng)制劑，主要成分為臘梅花，具有增加食欲及肌體免疫力的功效，臨床用于小兒厭食癥等。槲皮素是一種具有多種生物活性的黃酮類化合物，具有免疫調(diào)節(jié)的作用[1]。為了提升健胃樂(lè)的制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，本試驗(yàn)采用HPLC法對(duì)制劑中臘梅花的槲皮素含量進(jìn)行定量測(cè)定。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 LC-2010A高效液相色譜儀(日本島津公司)，紫外檢測(cè)器，Lcsolution工作站(日本島津公司)，F(xiàn)E20K酸度計(jì)(梅特勒-托利多公司)，XS型分析天平(梅特勒-托利多公司)。

1.2 試藥 槲皮素對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院提供，批號(hào)100081-200907)，甲醇、乙腈和磷酸均為色譜純，健胃樂(lè)合劑(本院制劑室提供，批號(hào)20120201、20120202、20120301，每1 000 ml含臘梅花100 g、蜂蜜250 ml和5%羥苯乙酯溶液8.9 ml)，純化水(本院制劑室自制)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：C18(Shim-pack VP-ODS，150 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相：0.4%磷酸-乙腈(75∶25)；柱溫：30 ℃；流速：1 ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：256 nm；進(jìn)樣量：10 μl。

2.2 溶液配制

2.2.1 對(duì)照品溶液 精密稱取槲皮素對(duì)照品5.02 mg，置25 ml量瓶中，加甲醇20 ml，超聲5 min使溶解，取出，稀釋至刻度，再精密量取5 ml溶于25 ml量瓶，混勻，備用。

2.2.2 供試品溶液 精密量取健胃樂(lè)合劑2 ml，置100 ml量瓶中，加水稀釋至100 ml，備用。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液 按照處方比例，稱取除臘梅花的其他輔料，加水制成陰性對(duì)照溶液。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 分別取對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照溶液10 μl，依“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，樣品主峰的保留時(shí)間與對(duì)照品主峰的保留時(shí)間一致，約為3.44 min。主藥和其他雜質(zhì)峰的分離度大于1.5，空白輔料對(duì)樣品測(cè)定無(wú)干擾，色譜圖見(jiàn)圖1。

1.槲皮素

2.4 線性關(guān)系考查 精密量取“2.2.1”項(xiàng)下對(duì)照品溶液1、2、4、6、8和10 ml分別置于10 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成4.016、8.032、16.064、24.096、32.128和40.16 μg/ml的系列溶液，分別進(jìn)樣測(cè)定其峰面積。以槲皮素對(duì)照品峰面積積分值為縱坐標(biāo)Y，進(jìn)樣濃度X(μg/ml)為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，槲皮素的回歸方程為:Y=35 885.41X-1446.98(r=0.999 8)，其結(jié)果表明槲皮素在4.016～40.16 μg/ml濃度范圍內(nèi)進(jìn)樣，濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn) 取“2.2.1”項(xiàng)下對(duì)照品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件下重復(fù)進(jìn)樣6次。結(jié)果測(cè)得槲皮素平均峰面積為359 868.70，RSD為1.12%。

2.6 重現(xiàn)性試驗(yàn) 取同一批制劑(批號(hào)20120301)5份，按“2.2.2”項(xiàng)下配制供試品溶液，分別按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果RSD為1.06%。

2.7穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品(批號(hào)20120301)，按“2.2.2”項(xiàng)下配制，在配制后0、2、4、8和12 h按“2.1”項(xiàng)下色譜條件各進(jìn)樣1次，共進(jìn)樣5次。結(jié)果供試品溶液在配制后12 h內(nèi)槲皮素含量無(wú)明顯變化，RSD為0.94%。

2.8 加樣回收率試驗(yàn) 取槲皮素對(duì)照品的甲醇溶液3份(含槲皮素分別為0.100 64、0.125 8和0.150 96 mg/ml)適量，精密量取10 ml，共9份，分別置100 ml圓底燒瓶中，減壓蒸干，分別精密加入同一批號(hào)(批號(hào)20120301)供試品2.5 ml，加水適量使溶解，并轉(zhuǎn)移至100 ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，制得供加樣回收試驗(yàn)用供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件分析測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果平均回收率為98.84%，RSD為0.77%。見(jiàn)表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

2.9 樣品含量測(cè)定 取3批樣品(批號(hào)201200201、20120202、20120301)按“2.2.2”項(xiàng)下方法配制，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行分析測(cè)定，槲皮素平均含量均大于0.3 mg/ml，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

有文獻(xiàn)報(bào)道[2]，甲醇-水的流動(dòng)相條件下,柱壓比較高,對(duì)色譜柱的損耗較大,并且色譜峰的分離度不好,且考慮到槲皮素有一定的脂溶性，故加入一定量的乙腈。選用不同比例，經(jīng)多次實(shí)驗(yàn)篩選，發(fā)現(xiàn)采用0.4%磷酸-乙腈(75∶25)溶液系統(tǒng)作為流動(dòng)相效果較理想，組分分離好，峰形對(duì)稱，保留時(shí)間適宜。槲皮素在256 nm與370 nm波長(zhǎng)處均有較大吸收，其中在256 nm處雜質(zhì)干擾少，目標(biāo)峰與其他相鄰色譜峰分離度較好[3]，故選擇256 nm做為測(cè)定波長(zhǎng)。

以槲皮素為指標(biāo)，通過(guò)測(cè)定其含量來(lái)控制健胃樂(lè)合劑的質(zhì)量，方法精密度好、準(zhǔn)確性高，具有較強(qiáng)的專屬性，能夠達(dá)到準(zhǔn)確反映中藥整體質(zhì)量的要求。

1 宋玉喬，姚凌云，曹蔚，等. 槲皮素的藥理作用研究近況[J]. 西北藥學(xué)雜志，2002，17(1)：40-42

2 黃千，劉輝，李遇伯，等. HPLC法測(cè)定槐花中槲皮素的含量[J].天津藥學(xué)，2007， 19(2)：10-11

3 周偉，蔡光明，黃鶴慧，等. 高效液相色譜法測(cè)定小葉黑柴胡中槲皮素與異鼠李素的含量[J].中國(guó)藥房，2007,18(9)：693-694

Determination of quercetin in Jianweile mixture by HPLC

Li Weichao，Zhang Nan，Chen Guiqi

(Tianjin Children’s Hospital,Tianjin 300074)

Objective：To establish an HPLC method for the determination of quercetin in Jianweile mixure. Methods: HPLC method was performed on Shim-pack VP-ODS column with mobile phase consisting of 0.4% phosphate-acetonitrile (75∶25)，the flow rate of which was 1 ml/min. The detection wavelength was set at 256 nm and column temperature was at 30 ℃. Results：A good linear relations between the concentrations of quercetin and the peak areas over a rang of 4.016～40.16 μg/ml(r=0.999 8). The average recovery was 98.84% (RSD=0.77%，n=9). Conclusions：The method is simple，sensitive，accurate，reliable，and can be used as method for the quality control of Jianweile mixrure.

Jianweile mixrure，quercetin，HPLC， determination

2014-12-25

R927.2

A

1006-5687(2015)02-0019-03