顧 云，曹曉云

(天津市藥品檢驗所，天津 300070)

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薄層色譜法鑒別土霉素的方法改進

顧 云，曹曉云

(天津市藥品檢驗所，天津 300070)

目的：建立土霉素的薄層鑒別方法。方法：薄層色譜法。薄層板默克硅膠60板F254，用10%的乙二胺四醋酸二鈉溶液(10 mol/L的NaOH調(diào)pH至7.0)均勻噴在板上，平放晾干，110 ℃干燥1 h后備用。展開劑：以水-甲醇-二氯甲烷(6∶35∶59)溶液。紫外燈(365 nm)下檢測。結(jié)果：供試品溶液所顯主斑點位置及熒光強度均與相應(yīng)的對照品溶液的主斑點相同，混合溶液顯示兩個完全分離的斑點。結(jié)論：建立的TLC新方法簡單、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，建議今后可將該方法推廣應(yīng)用，作為藥業(yè)四環(huán)素類品種的鑒別方法(薄層色譜法)。

薄層色譜法，土霉素，鑒別

土霉素是四環(huán)素類的抗菌藥，對革蘭氏陰性菌和陽性菌均有抑制作用,同時對立克次體、螺旋體及某些原蟲等亦具有抑制作用。土霉素組分單一，主成分約占95%以上，在發(fā)酵過程中會產(chǎn)生一些共生物雜質(zhì)，如2-乙酰-2-去酰胺土霉素、4-差向土霉素、四環(huán)素等。土霉素在酸性條件下可發(fā)生反式消除反應(yīng)，生成脫水土霉素，進一步降解形成立體異構(gòu)體α和β阿撲土霉素的混合物。對于土霉素類的鑒別，《中國藥典》2010年版二部采用傳統(tǒng)的硅藻土手鋪板的方法，經(jīng)試驗，發(fā)現(xiàn)該方法無法清晰分離斑點，達到完好鑒別。本文通過試驗，采用默克硅膠60板F254預(yù)制板的新方法進行薄層鑒別，達到專屬性強、準(zhǔn)確度高、重現(xiàn)性好的目的。

1 儀器與試藥

VILBER LOURMAT(CN-6T型)紫外分析儀，恒溫干燥箱DN64(日本Uamato)。土霉素樣品(河北圣雪大成制藥有限公司提供，批號T3-11314417-3、T3-11301416-3、T3-11319424-3)；土霉素對照品(批號130487-200302，中國藥品生物制品檢定所提供，純度88.2%)；鹽酸四環(huán)素對照品(批號130488-200403，中國藥品生物制品檢定所提供，純度97.5%)。市售的默克硅膠60板F254；所用試劑均為色譜純和分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

2.1.1 供試品溶液的制備 取本品適量，加甲醇溶解并稀釋制成每1 ml中含1 mg 的溶液，作為供試品溶液。

2.1.2 對照品溶液的制備 取土霉素對照品適量，加甲醇溶解并稀釋制成每1 ml中含1 mg 的溶液，作為對照品溶液。

2.1.3 混合對照溶液的制備 取土霉素與鹽酸四環(huán)素對照品適量，加甲醇溶解并稀釋制成每1 ml中各含1 mg 的混合溶液，作為系統(tǒng)分離測試溶液[1]。

2.2 薄層板的制備 默克的硅膠60板F254，用10%乙二胺四醋酸二鈉溶液(10 mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)pH至7.0)均勻噴在板上，平放晾干，110 ℃干燥1 h后使用[2]。

2.3 鑒別 參照《中國藥典》2010版二部的薄層色譜法(附錄 Ⅴ B)試驗，吸取“2．1”項下制備的三種溶液各1 μl，分別點于上述薄層板上，以水-甲醇-二氯甲烷(6∶35∶59)溶液作為展開劑，展開，晾干，置紫外光燈(365 nm)下檢視，混合溶液顯示兩個完全分離的斑點，供試品溶液所顯主斑點的位置和熒光強度與對照品溶液的主斑點相同。見圖1。

《中國藥典》法試驗結(jié)果

改進方法試驗結(jié)果

3 討論

3.1 《中國藥典》方法 目前《中國藥典》中四環(huán)素類品種的薄層色譜法(包括現(xiàn)行《中國藥典》2010年版鹽酸土霉素的薄層色譜法)，一直延用硅藻土手鋪板的方法，尚未更新。經(jīng)試驗得出，該方法存在兩點不足：第一，薄層板為手鋪板，因硅藻土細度差且松散不易黏合導(dǎo)致手鋪板均勻性差而影響分離度。硅藻土本身用前需處理，處理后的硅藻土在制板時的酸堿度、展開劑配比的酸堿度和點樣時的溫度、濕度等諸多因素都會影響展開的試驗結(jié)果，造成脫尾或?qū)е孪到y(tǒng)分離度不好的結(jié)果(見圖1)。而且鋪板費時費力，板的質(zhì)量無法統(tǒng)一。第二，展開劑為乙酸乙酯-三氯甲烷-丙酮(2∶2∶1)溶液200 ml中加4%乙二胺四醋酸二鈉溶液(pH 7.0)5 ml，配制煩瑣且展開效果欠佳。因此，《中國藥典》的方法操作煩瑣，影響因素甚多，難以控制，檢測斑點不清晰，系統(tǒng)分離度差、重復(fù)性差，難以符合TLC檢測的技術(shù)要求。

3.2 改進方法 參照《英國藥典》2011版土霉素片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)項下的薄層色譜法，采用了薄層板和展開劑的制備方法；參照《中國藥典》2010年版鹽酸土霉素質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)項下的薄層色譜法，采用了供試品、對照品和系統(tǒng)分離測試溶液的配置方法。建立了新方法。經(jīng)試驗比較，本方法具有兩點優(yōu)勢：第一，本方法的薄層板采用默克硅膠60板F254，市場可購，其板的質(zhì)量符合薄板色譜法檢測的技術(shù)要求。本方法簡便、操作快捷而分離度良好(即可達到系統(tǒng)適用性試驗的要求，見圖1)。第二，展開劑為水-甲醇-二氯甲烷(6∶35∶59)溶液，其配制較為簡單且展開效果良好。試驗證明，新方法先進、簡便和操作快捷且分離度良好，更適應(yīng)現(xiàn)在藥品檢驗技術(shù)的要求，新方法對于四環(huán)素類的鑒別均適用，結(jié)果可靠，易于判斷。

3.3 薄層板的選擇 在相同的實驗條件下，選擇了常用的不同廠家(進口默克公司、青島海洋化工廠、天津思利達科技有限公司和煙臺市化學(xué)工業(yè)研究所)不同品種的薄層板(GF254、HF254)，其結(jié)果均較為滿意，表明改進后方法所用的薄層板的黏合劑對檢驗結(jié)果干擾甚小，薄層板適用范圍及實驗條件很廣，方便檢測。試驗結(jié)果表明，默克或青島的板效果更好些。結(jié)果見圖2。

青島—HF254板 天津思利達—HF254板 煙臺—GF254板

1.土霉素樣品 2.土霉素對照品 3.土霉素對照品+鹽酸四環(huán)素對照品 4.鹽酸四環(huán)素對照品

圖2 不同廠家品種薄層板TLC色譜圖

3.4 檢測波長的選擇 試驗選擇顯色熒光斑點更強、靈敏度更高及專屬性更好些的紫外光燈(365 nm)下檢測。因土霉素的分子結(jié)構(gòu)中有較大的共軛體系效應(yīng)，能產(chǎn)生較強的熒光，因而微量點樣(即為1 μl)具有較強的熒光斑點。而254 nm光源是熒光淬滅，365 nm光源是熒光吸收。

1 中國藥典[S]. 二部.2010:635-636

2 英國藥典[S].2011：1635-1636，3078-3079

Improvement of TLC identification for oxytetracycline

Gu Yun , Cao Xiaoyun

(Tianjin Institute for Drug Control, Tianjin 300070)

Objective: To establish a TLC method for identification of oxytetracycline. Using GF254as layer plate , spary the plate with 10% EDTA solution (adjust pH to 7.0 with 10 mol/L NaOH solution) , dry for 1 h at 110 ℃ before use. Methods: The solvent system consist of a mixture of water, methanol and dichloromethane (6∶35∶59),under the UV light at 365 nm.Results:The RF value and intensity of the principal spot obtained from the test solution corresponds to that obtained from the Standard solution.The resolution solution should present two spots. Conclution: The TLC method can be used in identification of the drugs of tetracycline.

TLC,oxytetracycline,identification

2014-09-19

R927.11

A

1006-5687(2015)01-0012-03