梁 穎，王 雷，楊新建

(天津市中醫(yī)藥研究院附屬醫(yī)院，天津 300120)

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在不同pH值下測定黃芩苷油/水分配系數(shù)及pKa值的研究

梁 穎，王 雷*，楊新建

(天津市中醫(yī)藥研究院附屬醫(yī)院，天津 300120)

目的：研究黃芩苷物化常數(shù)油/水分配系數(shù)和pKa值。方法：測定黃芩苷的鹽酸、氯化鈉、碳酸氫鈉溶液在不同pH值的正辛醇/水溶液中的油/水分配系數(shù)；測定黃芩甙在不同pH 值磷酸鹽緩沖溶液中的濃度并計(jì)算其pKa值。結(jié)果：黃芩苷的鹽酸、氯化鈉、碳酸氫鈉溶液在pH值為1.20、7.50和9.18的正辛醇/水溶液中的油/水分配系數(shù)分別為1.711、0.078和0.021；測定黃芩苷的pKa值為5.106。結(jié)論：黃芩苷為弱酸性藥物，其油/水分配系數(shù)隨溶液pH值的增大而降低。在不同pH值條件下，黃芩苷的油/水分配系數(shù)將會有所改變，影響其經(jīng)皮滲透的性能。

黃芩苷，油/水分配系數(shù)，pKa值

對藥物物化性能的了解是研究和設(shè)計(jì)某種藥物的透皮吸收性能的基礎(chǔ)。本文根據(jù)前期研究結(jié)果[1]，探討黃芩苷的油/水分配系數(shù)和pKa值，得出相應(yīng)的黃芩苷物化常數(shù)，以了解黃芩苷的物化性能，為進(jìn)一步研究黃芩苷的透皮性能提供依據(jù)。

1 儀器與試劑

黃芩苷對照品(中國藥品生物制品檢定所提供，批號0715-200212，供含量測定用,)，甲醇為色譜純，磷酸、聚乙二醇400等均為分析純。電子分析天平(MettlerToledo)，恒控磁力拌器(溫州市醫(yī)療電器廠)，高效液相色譜儀(BECKMAN)，pH計(jì)(Mettler Toledo)，體外滲透擴(kuò)散裝置(中國藥科大學(xué)藥劑教研室)。

2 方法

2.1 高效液相色譜檢測條件 紫外檢測波長為280 nm；流動相為水-甲醇-磷酸液(53∶47∶0.2)；流速1.0 ml/min；進(jìn)樣量 20 μl。黃芩苷在此色譜條件下的保留時間為l0.11 min，吸收峰對稱性好且沒有拖尾的現(xiàn)象[1，2]。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密吸取0.207 9 mg/ml的黃芩苷對照品溶液2.5、3.5、4.5、5.5、6.5和7.5 ml分別置于10 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密吸取上述6種溶液各10 μl注入液相色譜儀，按“2.1”的色譜條件測定黃芩苷的峰面積。并以峰面積值為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為Y=3 235 125.95X-61 791.76(r=0.999 9)。黃芩苷在0.519 75～1.559 25 μg濃度范圍內(nèi)，峰面積與進(jìn)樣量呈線性關(guān)系。

2.3 黃芩苷的油/水分配系數(shù)測定 精密稱取黃芩苷樣品2.5 g共3份，置于50 ml量瓶中，分別加入0.1 mol/L鹽酸溶液、0.15 mol/L氯化鈉溶液和0.15 mol/L碳酸氫鈉溶液各20 ml，在20 ℃以下分別加入正辛醇20 ml，密塞，劇烈振搖30 min，靜置分層。2 h后精密吸取上層正辛醇和下層水溶液，按“2.1”的色譜條件測定其濃度，計(jì)算黃芩苷的油/水分配系數(shù)。

2.4 黃芩苷pKa值的測定 用移液管精密量取pH值為5.8的磷酸鹽緩沖液3 ml，加入一端扎緊的半透膜內(nèi)，扎緊袋口另一端，袋內(nèi)保留少量空氣。將半透膜袋置于10 ml的盛有pH值為6.8磷酸鹽緩沖液的廣口瓶中，用半透膜袋兩端的線段調(diào)節(jié)袋內(nèi)外液面，使其保持同一水平，在袋外緩沖液中加入濃度為500 μg/ml的黃芩苷溶液0.5 ml，置于室溫平衡72 h。測定袋內(nèi)外溶液中黃芩苷的濃度，并計(jì)算黃芩苷的pKa值。

3 結(jié)果

3.1 黃芩苷在不同pH值下的油/水分配系數(shù) 隨著溶液pH 值的增大，黃芩苷的油/水分配系數(shù)降低，可以通過改變?nèi)芤簆H值的方法改變其油/水分配系數(shù)，見表1。

表1 黃芩苷在不同pH值下的油/水分配系數(shù)

3.2 黃芩苷pKa值的測定

3.2.1 袋內(nèi)外緩沖液中黃芩苷濃度的測定 外緩沖液和內(nèi)緩沖液中黃芩苷的濃度見表2。

表2 黃芩苷pKa測定實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)

3.2.2 黃芩苷pKa值的測定結(jié)果 將表2中的測定數(shù)據(jù)代入公式中計(jì)算黃芩苷的pKa值。

R=[1+10(pH1-pKa)]/[1+10(pH2-pKa)]

其中pH1代表外緩沖液的pH值，pH2代表內(nèi)緩沖液的pH值，而R則代表膜兩側(cè)磷酸鹽緩沖液中黃芩苷濃度平均值的的比值。計(jì)算得出黃芩苷的pKa值為5.106，顯示黃芩苷為弱酸性藥物。

4 討論

油/水分配系數(shù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：隨著溶液pH 值的增大，黃芩苷的油/水分配系數(shù)降低；計(jì)算黃芩苷的pKa值為5.106，顯示黃芩苷為弱酸性藥物。

油/水分配系數(shù)雖然不能完全代表藥物的滲透性，但對預(yù)測藥物在體內(nèi)的分配系數(shù)及滲透性等具有重要意義，尤其是可以為進(jìn)一步研究黃芩苷的透皮性能提供依據(jù)。

皮膚細(xì)胞膜以磷脂雙分子層為基本骨架，大多數(shù)藥物借助細(xì)胞膜中的脂溶性物質(zhì)順濃度梯度轉(zhuǎn)運(yùn)，脂類物質(zhì)能夠優(yōu)先通過細(xì)胞膜，故藥物的親脂性是預(yù)測其透皮吸收效果的主要因素。藥物的脂溶性低，則不容易通過細(xì)胞脂質(zhì)膜，但這并不意味著越高越好，因?yàn)橹苄赃^高的藥物很難從細(xì)胞膜的另一側(cè)釋放出來進(jìn)入血液循環(huán)，因此藥物的最佳油/水分配系數(shù)值在-1和2之間。黃芩苷分子結(jié)構(gòu)中的羧基常以鎂鹽形式存在，在酸性環(huán)境下游離出來，使黃芩苷以分子狀態(tài)呈現(xiàn)，在油相中分布較多，故油/水分配系數(shù)較大。因此可以通過降低溶液的pH值的方法來增加黃芩苷的油/水分配系數(shù)，從而增強(qiáng)其經(jīng)皮滲透性能。

1 王雷，王學(xué)艷，周雪琴，等﹒黃芩苷在不同溶媒中的穩(wěn)定性研究[J].中國藥師，2006，9(2)：129-131

2 王雷，王學(xué)艷，周雪琴，等﹒黃芩苷凝膠設(shè)計(jì)與體外透皮性能的研究[J].中草藥，2008，39(10)：1502-1504

2015-04-29

天津市自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No.033610411)

R913

A

1006-5687(2015)03-0025-02

*通信作者：王雷，E-mail：leiwang66@eyou.com。