陸 軍，黃晶晶，徐 偉

(1.南京優(yōu)科生物醫(yī)藥有限公司，南京 210009， 2.江蘇省中國(guó)科學(xué)院植物研究所，南京 200014； 3.南京工業(yè)大學(xué)藥學(xué)院，南京 211816； 4.福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，福州 350003)

?

藥物制劑

氟比洛芬酯脂微球注射液的制備及質(zhì)量研究

陸 軍1,3，黃晶晶2，徐 偉4

(1.南京優(yōu)科生物醫(yī)藥有限公司，南京 210009， 2.江蘇省中國(guó)科學(xué)院植物研究所，南京 200014； 3.南京工業(yè)大學(xué)藥學(xué)院，南京 211816； 4.福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，福州 350003)

目的：制備氟比洛芬酯脂微球注射液。方法：通過正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化篩選得到氟比洛芬酯脂微球的最佳處方和工藝，并研究所得制劑的粒徑、pH 值、有關(guān)物質(zhì)及含量等性質(zhì)。結(jié)果：確定氟比洛芬酯脂微球注射液的處方組成及工藝為: 10%的注射用大豆油、1.2%精制蛋黃卵磷脂、0.5%油酸、2.3%甘油、0.032%磷酸氫二鈉、0.03%枸櫞酸和95%的注射用水。均質(zhì)8次，121 ℃滅菌15 min，滅菌后仍能保持良好的穩(wěn)定性， 制得脂微球注射液氟比洛芬酯的含量為99.45%，最大單一雜質(zhì)0.085%，其他雜質(zhì)總和0.23%。結(jié)論：該處方工藝可行，制得的脂微球質(zhì)量可控。

氟比洛芬酯，脂微球，處方優(yōu)化，工藝優(yōu)化，質(zhì)量可控

氟比洛芬酯脂微球注射液是通過藥物傳遞以脂質(zhì)微球?yàn)樗幬镙d體,將氟比洛芬酯包裹在里面的新型制劑, 是目前唯一可用于靜脈注射的非類固醇制劑。氟比洛芬作為氟比洛芬酯前體，難溶于水,氟比洛芬酯化后即是氟比洛芬酯,有非常強(qiáng)的親脂性,在注射用大豆油中可以完全溶解，用特殊工藝, 制成脂質(zhì)微球。氟比洛芬酯脂微球注射液的特點(diǎn)主要有以下幾方面:①具有很強(qiáng)的靶向作用,可以使包裹的藥物在病發(fā)部位發(fā)揮療效；②可以控制釋放藥物,使藥物療效時(shí)間延長(zhǎng)，減少藥物的使用劑量；③易于跨越細(xì)胞膜，加快藥物的吸收,縮短藥物起效時(shí)間；④可以用于靜脈注射,避免了口服給藥對(duì)消化道黏膜的損傷[1]。

目前市售品多為氟比洛芬的口服制劑，許多患者無法口服吞咽藥物，而且易引起胃腸道功能紊亂等不良反應(yīng)。在治療術(shù)后疼痛或因癌癥引起的疼痛時(shí)，與口服制劑相比，氟比洛芬酯脂微球注射液可避免服用不方便和口服引起的不良反應(yīng)，并且起效更快。氟比洛芬酯脂微球注射液(商品名：凱紛)在中國(guó)2004年上市，生產(chǎn)企業(yè)是北京泰德制藥有限公司，但在國(guó)內(nèi)零售價(jià)高，普通患者不能承受。本實(shí)驗(yàn)以穩(wěn)定參數(shù)制備其處方和工藝，解決了產(chǎn)業(yè)化等關(guān)鍵問題，并通過體內(nèi)外指標(biāo)判定制得的氟比洛芬酯脂微球注射液較穩(wěn)定，能適應(yīng)工業(yè)化生產(chǎn)[2]。

1 儀器與試藥

DF-101S 集熱式恒溫加熱磁力攪拌器(上海東璽制冷儀器設(shè)備有限公司)；T18 basic高速剪切機(jī)(德國(guó)IKA有限公司)；KH-250B型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市禾創(chuàng)超聲儀器有限公司)；AH-1500高壓均質(zhì)機(jī)(加拿大ATS公司)；S20精密pH計(jì)(德國(guó)梅勒特有限公司)；SYQ-DSX-280B型立式壓力蒸汽滅菌器(上海申安醫(yī)療器械廠) ；CX31顯微鏡(日本奧林巴斯有限公司)；UV-2550 紫外分光光度計(jì)(島津公司)； Mastersizer 2000粒度檢測(cè)儀(英國(guó)MALVERN有限公司)；安捷倫1260高效液相色譜儀(安捷倫科技有限公司，DAD 檢測(cè)器，廣州艾欣科學(xué)儀器有限公司色譜柱)。氟比洛芬酯對(duì)照品(南京優(yōu)科制藥有限公司，批號(hào)100696-200401)；氟比洛芬酯原料藥(南京優(yōu)科制藥有限公司)；注射用大豆油(廣州漢方現(xiàn)代中藥研究開發(fā)有限公司)； 精制蛋黃卵磷脂(Q P Corporation)；油酸(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)；注射用甘油(江西益普生藥業(yè)有限公司)；磷酸氫二鈉(湖南九典制藥有限公司)；枸櫞酸(湖南華日制藥有限公司)；凱紛(北京泰德制藥有限公司，批號(hào)5031P)；自制氟比洛芬酯脂微球注射液(批號(hào)20120301、 20120302、20120303)；乙腈、無水乙醇、冰醋酸為分析純。

2 方法和結(jié)果

2.1 乳劑的質(zhì)量評(píng)價(jià)指標(biāo)

2.1.1 外觀 在自然光下采用目測(cè)、鼻聞法檢查。即為白色乳液，略帶黏性，有特異性氣味。

2.1.3 粒徑 用Mastersizer 2000粒度檢測(cè)儀測(cè)定乳劑的粒徑，評(píng)價(jià)乳劑粒徑的分布情況，以評(píng)價(jià)穩(wěn)定性。

2.2 處方工藝

2.2.1 處方優(yōu)化 根據(jù)初步預(yù)實(shí)驗(yàn)和日本文獻(xiàn)資料[2]能判定氟比洛芬酯脂微球的處方是：精制蛋黃卵磷脂0.8%～1.2%、大豆油 10%、油酸0.3%～0.7%、注射用甘油2.0%～3.0%、磷酸氫二鈉0.032%、枸櫞酸0.03%，加注射用水定量。在預(yù)實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，對(duì)影響制劑穩(wěn)定性的3個(gè)主要因素: 精制蛋黃卵磷脂用量(A)、油酸用量(B)、注射用甘油用量(C)進(jìn)行正交優(yōu)化實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果見表1和表2， 并以外觀和相對(duì)密度為評(píng)價(jià)指標(biāo)，對(duì)處方進(jìn)行篩選。

表1 處方優(yōu)化因素水平表

選用L9(32)正交表可得9組處方，按照外觀和相對(duì)密度為評(píng)價(jià)指標(biāo)，可見各因素對(duì)制劑質(zhì)量影響的大小依次為: A>B>C，最佳組合為 A3B2C2，即精制蛋黃卵磷脂用量為1.2%，油酸為0.5%,甘油為2.3%。

表2 氟比洛芬酯脂微球注射

2.2.2 工藝優(yōu)化 選擇已優(yōu)化好的處方進(jìn)行工藝篩選，經(jīng)初步實(shí)驗(yàn)確定初乳的制備溫度(D)、初乳剪切分散的時(shí)間(E)、均質(zhì)次數(shù)(F)為工藝考查因素，以外觀和顯微鏡觀察粒徑分散和大小進(jìn)行評(píng)價(jià)指標(biāo)，以確定工藝中的生產(chǎn)參數(shù)，為工業(yè)化生產(chǎn)做基礎(chǔ)研究[2]。正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及其結(jié)果見表3和表4。

正交表得9組工藝，按照乳劑評(píng)價(jià)方法，用極差分析法分析正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果， 可見各工藝因素對(duì)制劑穩(wěn)定性影響的大小依次為:F>E>D，最佳組合為 D2E2F2， 即油水兩相混合溫度為65 ℃，剪切時(shí)間為10 min，均質(zhì)次數(shù)為8次。

表3 工藝優(yōu)化因素水平表

表4 氟比洛芬酯脂微球注射液正交實(shí)驗(yàn)工藝篩選結(jié)果

2.2.3 氟比洛芬酯脂微球注射液的處方工藝確認(rèn) 稱取處方量的氟比洛芬酯、蛋黃卵磷脂、油酸和注射用大豆油放在油相罐中，65 ℃加熱至完全溶解；稱取處方量甘油、磷酸二氫鈉和注射用水放在水相罐中，65 ℃加熱至完全溶解；在水相罐中開啟高剪切，緩慢加入全部油相，再繼續(xù)剪切10 min，制得初乳。開啟高壓均質(zhì)機(jī)，將初乳經(jīng)30 000 KPa高壓均質(zhì)一次后轉(zhuǎn)移到均質(zhì)罐中，然后60 000 KPa均質(zhì)一次，80 000 KPa均質(zhì)6次后使用飽和枸櫞酸溶液調(diào)節(jié)pH 5.5～6.5，過濾，灌裝，121 ℃滅菌15 min，即得成品。

最后，合同文本的篇章也具有顯著特征。首先從結(jié)構(gòu)上看，合同文本條目清楚，語篇規(guī)整；從文本內(nèi)容上看，合同基本由約首、正文和約尾構(gòu)成，每部分包含的款項(xiàng)和結(jié)構(gòu)比較固定。其正文部分完整且詳盡，條理清晰，邏輯嚴(yán)密。

2.3 氟比洛芬酯脂微球注射液理化性質(zhì)的考查

2.3.1 粒徑分布 自制氟比洛芬酯脂微球注射液和凱紛分別用水適當(dāng)稀釋后測(cè)定其粒徑，所得結(jié)果見圖1，其平均粒徑分別為 163 nm和165 nm。

2.3.2 相對(duì)密度 測(cè)定3批自制氟比洛芬酯脂微球注射液和凱紛相對(duì)密度，分別為0.997 1、0.997 3、0.996 8和0.997 6。

2.3.3 pH值測(cè)定 測(cè)定3批自制氟比洛芬酯脂微球注射液和凱紛的pH值，分別為5.89、5.92、5.87和6.06。

圖1 自制氟比洛芬酯脂微球注射液(A) 凱紛(B)粒徑分布圖

2.4 氟比洛芬酯脂微球注射液含量測(cè)定[3]

2.4.1 色譜條件 色譜柱: Kromasil 100-5 C18柱； 流動(dòng)相: 乙腈-水-冰醋酸(54∶46∶0.15)；檢測(cè)波長(zhǎng)：254 nm；流速： 2.0 ml/min；柱溫: 40 ℃； 進(jìn)樣量: 10 μl。

2.4.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 取氟比洛芬酯約10 mg，精密稱定，置20 ml量瓶中，加無水乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。分別精密量取適量，加無水乙醇稀釋制成每1 ml中含氟比洛芬酯約1.0、5.0、10.0、50.0、100.0和500.0 μg的溶液作為對(duì)照品系列溶液，搖勻，分別精密量取系列溶液各10 μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以進(jìn)樣量(X)為橫坐標(biāo)，峰面積之和(Y)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并計(jì)算回歸方程，Y=1.513 4X+8.765 2(r=1.000 0)，試驗(yàn)結(jié)果表明，進(jìn)樣量在10.32～5 160.00 ng范圍內(nèi)線性良好。

2.4.3 專屬性試驗(yàn) 取氟比洛芬酯對(duì)照品適量，精密稱定，加無水乙醇溶解并定量稀釋制成每1 ml中約含10 μg的溶液作為氟比洛芬酯對(duì)照品溶液；分別精密量取空白輔料、自制氟比洛芬酯脂微球注射液和凱紛溶液各5 ml，置100 ml量瓶中，加無水乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密量取1 ml，置50 ml量瓶中，用無水乙醇稀釋至刻度，搖勻得空白溶液和供試品溶液。取對(duì)照品溶液、空白溶液、10 μg/ml的氟比洛芬酯注射液溶液和10 μg/ml凱紛溶液，分別進(jìn)樣10 μl，記錄色譜圖，見圖2。

2.4.4 氟比洛芬酯脂微球注射液含量測(cè)定 取本品適量，精密稱定，加無水乙醇溶解并定量稀釋制成每1 ml中約含10 μg的溶液，搖勻，精密量取10 μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取氟比洛芬酯對(duì)照品，同法測(cè)定。按外標(biāo)法以兩個(gè)對(duì)映異構(gòu)體峰面積之和計(jì)算，即得。測(cè)得3批樣品含量百分比分別為99.45%、99.84%和100.6%。

2.5 氟比洛芬酯脂微球注射液有關(guān)物質(zhì)

2.5.1 色譜條件 色譜柱:Innovation CD串聯(lián)Kromasil 100-5；流動(dòng)相: 乙腈-水-冰醋酸(54∶46∶0.15)；檢測(cè)波長(zhǎng): 254 nm 流速: 1.5 ml/min；柱溫: 40 ℃； 進(jìn)樣量: 10 μl。

2.5.2 專屬性試驗(yàn) 設(shè)計(jì)了空白干擾試驗(yàn)、強(qiáng)制降解試驗(yàn)(酸、堿、氧化、高溫、光照)，主要考查在各種劇烈條件下，供試品新增加的降解雜質(zhì)情況、降解產(chǎn)物與主峰的分離度情況，以此來評(píng)價(jià)色譜條件的專屬性。試驗(yàn)結(jié)果表明，本品在酸、堿、氧化、高溫和光照條件下均有不同程度的破壞，其中酸破壞、堿破壞和氧化破壞最嚴(yán)重，在主峰前后產(chǎn)生數(shù)個(gè)降解產(chǎn)物峰，各降解產(chǎn)物峰與主峰分離較好，說明本色譜條件專屬性好，可用于本品的有關(guān)物質(zhì)測(cè)定。見圖3。

1.S-氟比洛芬酯 2.R-氟比洛芬酯

2.5.3 定量限及檢測(cè)限 取氟比洛芬酯適量，加無水乙醇溶解并逐級(jí)稀釋，分別量取10 μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖,按信噪比為10∶1計(jì)算檢測(cè)定量限，結(jié)果為1.5 ng；按信噪比為3∶1計(jì)算最低檢測(cè)限，結(jié)果為0.45 ng。

2.5.4 氟比洛芬酯脂微球注射液有關(guān)物質(zhì)測(cè)定 量取本品1 ml，用無水乙醇溶解并定量稀釋配制成每1 ml中約含氟比洛芬酯0.4 mg的溶液，作為供試品溶液；量取1 ml，置100 ml量瓶中，用無水乙醇定量稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照溶液；取對(duì)照溶液10 μl，注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)靈敏度，使氟比洛芬酯峰的峰高約為滿量程的10%～20%。再精密量取溶劑、對(duì)照溶液與供試品溶液各10 μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至氟比洛芬酯峰保留時(shí)間的2倍。供試品溶液色譜圖中如有雜質(zhì)峰，除溶劑峰外，其他最大雜質(zhì)的峰面積不得大于對(duì)照溶液兩個(gè)對(duì)映異構(gòu)體峰面積之和的0.2%；其他各雜質(zhì)峰面積的和不得大于對(duì)照溶液兩個(gè)對(duì)映異構(gòu)體峰面積之和的0.5%。測(cè)得三批樣品有關(guān)物質(zhì)見表5。

1.S-氟比洛芬酯 2.R-氟比洛芬酯

批號(hào)最大單一雜質(zhì)(%)其他雜質(zhì)總和(%)201203010.0850.23201203020.0810.19201203030.0820.21

3 討論

3.1 精制蛋黃卵磷脂呈顆粒黏稠狀，加入注射用大豆油中，在適當(dāng)?shù)臏囟认聰嚢韬荛L(zhǎng)時(shí)間不能完全溶解，加入適量的油酸可以讓精制蛋黃卵磷脂完全溶解在注射用大豆油中，增強(qiáng)乳化效。由于卵磷脂易氧化，在加熱過程中不穩(wěn)定，溫度不能過高，控制在65 ℃～70 ℃之間。

3.2 制備3批氟比洛芬酯脂微球注射液，其工藝穩(wěn)定，質(zhì)量可控，適合工業(yè)化大生產(chǎn)。

1 于國(guó)華,劉淑真,任海朋.氟比洛芬酯脂微球制劑在止痛領(lǐng)域的研究概況[J].中華腫瘤防治雜志，2007，14(20)：1595-1598

2 吳燕，李冬梅， 徐超斗，等.氟比洛芬酯脂微球注射液的制備及其質(zhì)量評(píng)價(jià)[J].中國(guó)藥學(xué)雜志，2013，48(21)：1847-1851

3 蘇俊，李楊，張鵬，等.高效液相色譜法測(cè)定氟比洛芬酯[J].廣東化工，2010，37(12)：128-129

2015-03-27

南京工業(yè)大學(xué)?；?No.42657631)

TQ463 R927.11

A

1006-5687(2015)03-0018-04