謝瑩鶯，趙海寧，楊 娟，李鳳蓮，楊卓加，祁春琳

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·論著·

青海地區(qū)子癇前期與可溶性人類白細胞相關抗原G和臍動脈血流動力學相關性研究

謝瑩鶯，趙海寧，楊 娟，李鳳蓮，楊卓加，祁春琳

目的 檢測青海地區(qū)子癇前期患者可溶性人類白細胞相關抗原G(sHLA-G)蛋白水平及臍動脈血流動力學指標，分析其間的相關性。方法 選取2014年9—12月在青海大學附屬醫(yī)院分娩的產(chǎn)婦90例，其中正常妊娠婦女30例，輕度子癇前期患者26例，重度子癇前期患者34例。于臨產(chǎn)前抽取3組研究對象靜脈血，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測sHLA-G水平；并采用多普勒超聲診斷儀，檢測臍動脈血流搏動指數(shù)(PI)、臍動脈血流阻力指數(shù)(RI)以及臍動脈收縮末期最大血流速度與舒張末期最大血流速度的比值(S/D)。結(jié)果 3組血清sHLA-G水平、PI、RI及S/D比較，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.001)；其中輕度子癇組和重度子癇組血清sHLA-G水平低于正常妊娠組，PI、RI及S/D均高于正常妊娠組；重度子癇組血清sHLA-G水平低于輕度子癇組，PI、RI及S/D均高于輕度子癇組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。3組尿蛋白值分布比較，差異有統(tǒng)計學意義(U=80.416，P<0.05)。相關分析結(jié)果顯示，子癇前期患者尿蛋白與血清sHLA-G呈負相關(r=-0.873，P<0.05)，sHLA-G與S/D呈負相關(r=-0.784，P<0.05)，sHLA-G與RI呈負相關(r=-0.522，P<0.05)，sHLA-G與PI呈負相關(r=-0.638，P<0.05)。結(jié)論 sHLA-G蛋白水平和臍動脈血流動力學指標與子癇前期患者病情嚴重程度有關，且sHLA-G蛋白水平與臍動脈血流動力學存在相關性，測定SHLA-G和臍動脈血流動力學指標可預測胎兒宮內(nèi)生長環(huán)境及出生結(jié)局。

先兆子癇；HLA抗原；臍動脈；青海

謝瑩鶯，趙海寧，楊娟，等.青海地區(qū)子癇前期與可溶性人類白細胞相關抗原G和臍動脈血流動力學相關性研究[J].中國全科醫(yī)學，2015，18(26)：3181-3184.[www.chinagp.net]

Xie YY，Zhao HN，Yang J，et al.Correlation between serum level of sHLA-G，hemodynamic change of umbilical artery and preeclampsia in Qinghai Province[J].Chinese General Practice，2015，18(26)：3181-3184.

青海省地處青藏高原，高海拔、低氧、寒冷、強紫外線，易誘發(fā)妊娠期高血壓疾病，發(fā)病率為12%～15%。如何尋找一個可靠的子癇前期的預診指標顯得尤為重要。研究證實人類白細胞相關抗原G(HLA-G)可誘導母胎間免疫耐受，與子癇前期的發(fā)病密切相關。而可溶性HLA-G(sHLA-G)分子不僅分布于妊娠期母胎接觸面，而且存在于母體全身血液循環(huán)中，在子癇前期的發(fā)病中可能扮演著更為重要的角色[1]。本研究采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測青海地區(qū)子癇前期患者與正常妊娠婦女外周血清中sHLA-G的差異性表達，探討子癇前期發(fā)病與sHLA-G的關系；檢測胎兒臍動脈血流動力學參數(shù)，預測胎兒宮內(nèi)生長環(huán)境及出生結(jié)局，探討子癇前期患者sHLA-G與胎兒臍動脈血流動力學的差異性變化及相關性，并結(jié)合尿蛋白檢測判斷與疾病嚴重程度的相關性。

1 對象與方法

1.1 入選與排除標準 正常妊娠婦女：入選標準為擇期剖宮產(chǎn)分娩且產(chǎn)前無宮縮，血壓<140/90 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)，無蛋白尿；排除標準為多胎妊娠及合并傳染性疾病。子癇前期：入選標準為擇期剖宮產(chǎn)分娩且產(chǎn)前無宮縮，子癇前期診斷參照謝幸等[2]主編的第8版《婦產(chǎn)科學》；排除標準為慢性高血壓、心臟病、貧血、糖尿病等疾病。

1.2 研究對象 選取2014年9—12月在青海大學附屬醫(yī)院分娩的產(chǎn)婦90例，其中正常妊娠婦女30例，年齡21～42歲，平均年齡(31.1±7.2)歲；孕周37.4～41.5周，平均孕周(39.1±5.4)周。輕度子癇前期患者26例，年齡19～36歲，平均年齡(26.8±5.4)歲；孕周34.6～41.2周，平均孕周(38.3±8.2)周。重度子癇前期患者34例，年齡17～38歲，平均年齡(27.6±6.2)歲；孕周31.4～41.0周，平均孕周(37.6±16.1)周。3組研究對象年齡和孕周比較，差異均無統(tǒng)計學意義(F=2.989、2.074，P>0.05)。

1.3 研究方法

1.3.1 標本采集 3組研究對象均未采取任何處理措施，于臨產(chǎn)前采集外周靜脈血3 ml，室溫下自凝，以2 000 r/min離心5 min，離心半徑15.6 cm，分離血清，置于標記好的無菌EP管中，轉(zhuǎn)移至-80 ℃冰箱中凍存。

1.3.2 sHLA-G水平檢測 取凍存的血清，采用ELISA試劑盒(sHLA-G，購自美國R&D公司)檢測sHLA-G蛋白水平，嚴格按照試劑盒說明書操作。

1.3.3 臍動脈血流動力學變化檢測 患者取仰臥位，腹部涂以耦合劑后，將探頭放在子宮部位觀察胎兒情況并尋找胎兒臍動脈，彩超儀采用日本TOSHIBA，SSA-550彩色多普勒超聲診斷儀，探頭頻率3.75 MHz，利用脈沖多普勒測量臍動脈血流波形，檢測臍動脈血流搏動指數(shù)(PI)、臍動脈血流阻力指數(shù)(RI)以及臍動脈收縮末期最大血流速度與舒張末期最大血流速度的比值(S/D)。

1.3.4 尿蛋白檢測 研究對象留取晨尿，采用干化學法測定尿蛋白。儀器使用廣州高爾寶GEB-600尿液干化學分析儀，試劑采用廣州高爾寶尿十一聯(lián)試條。

2 結(jié)果

2.1 3組血清sHLA-G水平及血流動力學指標 3組血清sHLA-G水平、PI、RI及S/D比較，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.001)；其中輕度子癇組和重度子癇組血清sHLA-G水平低于正常妊娠組，PI、RI及S/D均高于正常妊娠組；重度子癇組血清sHLA-G水平低于輕度妊娠組，PI、RI及S/D均高于輕度妊娠組，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05，見表1)。

Table 1 Comparison of serum level of sHLA-G and hemodynamic indexes among the three groups

組別例數(shù)sHLA-G(ng/L)PIRIS/D正常妊娠組301066±201 0.91±0.050.60±0.032.37±0.25輕度子癇組26756±231a 0.95±0.07a0.67±0.05a2.83±0.16a重度子癇組34567±171ab1.12±0.06ab0.73±0.03ab3.50±0.37abF值50.377110.55599.046129.277t值<0.001<0.001<0.001<0.001

注：與正常妊娠組比較，aP<0.05；與輕度子癇組比較，bP<0.05；sHLA-G=可溶性人類白細胞相關抗原G，PI=血流搏動指數(shù)，RI=血流阻力指數(shù)，S/D=收縮末期最大血流速度與舒張末期最大血流速度的比值

2.2 3組尿蛋白值分布 3組尿蛋白值分布比較，差異有統(tǒng)計學意義(U=80.416，P<0.05，見表2)。

表2 3組尿蛋白值分布

2.3 相關分析 相關分析結(jié)果顯示，子癇前期患者尿蛋白與血清sHLA-G呈負相關(r=-0.873，P<0.05)；S/D與尿蛋白呈正相關(r=0.844，P<0.05)；RI與尿蛋白呈正相關(r=0.636，P<0.05)；PI與尿蛋白呈正相關(r=0.564，P<0.05)；sHLA-G與S/D呈負相關(r=-0.784，P<0.05)；sHLA-G與RI呈負相關(r=-0.522，P<0.05)；sHLA-G與PI呈負相關(r=-0.638，P<0.05)。

3 討論

Mclallum等于1978年首次將S/D、RI及PI用于圍生兒監(jiān)護，并作為胎兒臍動脈血流速度測定的常用指標[3]。根據(jù)Giles等[4]報道的結(jié)果顯示，S/D可從妊娠24周后逐漸下降，直至妊娠30周后<3。國內(nèi)學者觀察到正常妊娠35周以后的S/D<2.7，RI<0.61，胎盤血管可進一步擴張，阻力減小，以保證胎兒的血液供應。這與正常妊娠時子宮螺旋動脈發(fā)生重鑄的生理過程密切相關。妊娠過程中，母胎是一個整體，臍動脈是胎兒獲得營養(yǎng)物質(zhì)的唯一途徑，其血流動力學改變直接反映母體與胎兒病理生理改變，監(jiān)測臍血流量S/D能夠反映其血流量及阻力變化[5]。隨著孕周增加，在正常妊娠時，S/D會逐漸下降，而當發(fā)生妊娠期高血壓疾病時，血管重鑄障礙，阻力增大，導致S/D、RI、PI增高[6-7]。陳定章等[8]研究發(fā)現(xiàn)，高原環(huán)境對子宮動脈血流和臍血流均有一定影響，不同孕期胎兒臍動脈的RI明顯高于平原地區(qū)，在高原地區(qū)久居的婦女妊娠后其胎盤和胎兒受到低氧的影響，引起胎盤絨毛毛細血管痙攣，管腔變窄，內(nèi)皮增生，臍動脈和子宮動脈血流相對減少。本研究結(jié)果顯示，青海地區(qū)子癇前期者臍動脈血流S/D和RI、PI明顯高于正常妊娠者，而且病情越嚴重，臍動脈S/D和RI、PI增高越顯著。

對于S/D增高的原因也可以通過免疫學角度進行分析，由于胎盤滋養(yǎng)層細胞不僅在維持血管張力和調(diào)節(jié)血流方面具有非常重要的作用，而且還具有復雜的內(nèi)分泌功能，能分泌多種細胞因子和激素類物質(zhì)，還可合成和分泌多種胎盤蛋白，參與妊娠期間的機體免疫反應。比如由胎盤組織產(chǎn)生的HLA-G，其是人類最復雜的遺傳多態(tài)性系統(tǒng)，如果表達異常，可使子宮螺旋動脈重鑄障礙，絨毛著床過淺，導致子癇前期、胎兒宮內(nèi)發(fā)育遲緩(IUGR)、流產(chǎn)等并發(fā)癥。由于sHLA-G分子不僅分布在母胎界面，還存在于母體血液循環(huán)中，故在妊娠免疫耐受中可能發(fā)揮著比膜結(jié)合型HLA-G(mHLA-G)分子更重要的作用。國外有學者研究報道，檢測未妊娠婦女及妊娠婦女的sHLA-G含量，發(fā)現(xiàn)妊娠的各個階段持續(xù)存在sHLA-G，且未妊娠婦女sHLA-G含量顯著低于妊娠婦女，子癇前期患者sHLA-G含量低于正常足月婦女，可能與子癇前期的發(fā)生有關聯(lián)[1]。Bueno-Sánchez等[9]甚至得出結(jié)論，子癇前期患者血清sHLA-G含量與尿蛋白值有顯著相關性，而尿蛋白水平標志著子癇前期的嚴重程度。本課題組前期研究提示，青海地區(qū)子癇前期患者HLA-G蛋白及mRNA水平均低于正常妊娠婦女，初步推斷高原慢性低氧下，HLA-G的表達量下降，在子癇前期的發(fā)病中可能起著重要作用，推測高原地區(qū)子癇前期患者sHLA-G表達水平的降低可能與低氧下滋養(yǎng)細胞HLA-G基因轉(zhuǎn)錄下調(diào)有關[10]；并且利用sHLA-G的ROC曲線界定指標，希望將該值作為診斷子癇前期的初篩指標[11]。

本研究結(jié)果亦顯示：(1)子癇前期患者尿蛋白值與血清sHLA-G蛋白水平和胎兒臍動脈RI、PI及S/D存在相關性，反映sHLA-G及臍動脈血流動力學與子癇前期的嚴重程度密切相關，且重度子癇前期者出現(xiàn)臍動脈血流舒張期斷流現(xiàn)象，提示胎兒-胎盤循環(huán)障礙，嚴重影響胎兒在宮內(nèi)的生長環(huán)境，導致胎兒宮內(nèi)缺氧和生長發(fā)育異常。(2)血清sHLA-G蛋白與臍動脈血流動力學之間亦存在相關性，說明HLA-G、臍動脈血流變化及妊娠期高血壓疾病之間的關系是相輔相成、相互影響的。盡管子癇前期患者臍動脈S/D和RI、PI增高缺少特異性，影響孕期臍血流異常的因素除了妊娠期高血壓疾病，還要考慮臍帶因素。但監(jiān)測臍動脈是檢測妊娠期高血壓疾病胎兒宮內(nèi)安危最重要的方法，臍動脈血流的改變是妊娠期高血壓疾病并發(fā)胎兒生長受限的特征[12]。故該指標可作為不良圍生兒結(jié)局的預測指標，結(jié)合sHLA-G的檢測可作為評判子癇前期疾病嚴重程度的指標，并提示醫(yī)護人員加強對孕產(chǎn)婦及胎兒的監(jiān)護，以預防不良出生結(jié)局的發(fā)生，保證母嬰安全。

本文臨床價值：

青海省地處青藏高原，特殊的地理環(huán)境和相對落后的經(jīng)濟條件，使得廣大農(nóng)牧區(qū)婦女由于子癇前期發(fā)病率高而飽受疾病的困擾，嚴重影響母嬰健康。通過彩色多普勒超聲診斷儀檢測PI、RI以及S/D，簡單易行、無創(chuàng)、可重復操作，并結(jié)合ELISA定量檢測sHLA-G作為子癇前期的初篩及監(jiān)測手段，值得廣泛應用推廣。

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(本文編輯：賈萌萌)

Correlation Between Serum Level of sHLA-G,Hemodynamic Change of Umbilical Artery and Preeclampsia in Qinghai Province

XIEYing-ying，ZHAOHai-ning，YANGJuan，etal.

AffiliatedHospitalofQinghaiUniversity，Xining810001，China

Objective To investigate the correlation between umbilical artery blood flow changes and serum level of sHLA-G in patients with preeclampsia in Qinghai Province.Methods We enrolled 90 pregnant women who underwent childbirth in the Affiliated Hospital of Qinghai University from September to December 2014.Among them，30 subjects were normal in childbirth，26 subjects were with mild preeclampsia and 34 were with severe preeclampsia.Before delivery，venous blood was sampled from the three groups of subjects.Then ELISA method was employed to test serum level of sHLA-G，and doppler ultrasonography was used to detect PI，RI and S/D.Results The three groups were significantly different(P<0.001)in serum level of sHLA-G，PI，RI and S/D；the mild preeclampsia group and the severe preeclampsia group were lower(P<0.05)in serum level of sHLA-G and higher(P<0.05)in PI，RI and S/D than normal childbirth group；the severe preeclampsia group was lower(P<0.05)in serum level of sHLA-G and higher(P<0.05)in PI，RI and S/D than the mild preeclampsia.The three groups were significantly different in the distribution of urine protein(U=80.416，P<0.05).The correlation analysis showed that，among the patients with preeclampsia，the urine protein was negatively correlated with serum level of sHLA-G(r=-0.873，P<0.05)，serum level of sHLA-G was negatively correlated with S/D(r=-0.784，P<0.05)，serum level of sHLA-G was negatively correlated with RI(r=-0.522，P<0.05)，and serum level of sHLA-G was negatively correlated with PI(r=-0.638，P<0.05).Conclusion The serum level of sHLA-G and the hemodynamic change of umbilical artery is correlated with severity degree of preeclampsia，and serum level of sHLA-G is correlated with the hemodynamic change of umbilical artery，which helps to predict the intrauterine environment for fetus and childbirth outcome.

Pre-eclampsia；HLA antigens；Umbilical arteries；Qinghai

青海省(應用)基礎研究計劃項目(2013-Z-736)

810001青海省西寧市，青海大學附屬醫(yī)院

R 714.244

A

10.3969/j.issn.1007-9572.2015.26.014

2015-03-12；

2015-05-05)