養(yǎng)豬場(chǎng)豬抗體水平的有效采樣與檢測(cè)方法

李佳鵬

(黑龍江省樺川縣獸醫(yī)衛(wèi)生防疫站154300)

最近幾年，我國(guó)豬只的飼養(yǎng)模式大多都是規(guī)?；?、集約化，盡量在有限的空間內(nèi)，采用工廠化的飼養(yǎng)方式盡可能多的飼養(yǎng)豬只，從而得到較大的收益。據(jù)報(bào)道，經(jīng)過(guò)高度選育的豬群，對(duì)疾病特異和非特異抵抗的免疫記憶逐代降低，飼養(yǎng)空間小，而飼養(yǎng)密度又比較大，都會(huì)降低豬群的抵抗力，如果傳染病暴發(fā)流行在豬群中，會(huì)給飼養(yǎng)者帶來(lái)較大的經(jīng)濟(jì)損失。

1被采樣豬只

飼養(yǎng)場(chǎng)中的采樣主要對(duì)象是公豬和后備母豬，尤其是種公豬，而后備母豬是飼養(yǎng)場(chǎng)的源頭，公豬和后備母豬的抗體水平基本上能夠反映出本場(chǎng)的整個(gè)抗體水平。對(duì)妊娠豬、哺乳豬、斷奶母豬和仔豬也進(jìn)行采樣，對(duì)豬只生長(zhǎng)流程中的各階段加以監(jiān)控。

2采樣數(shù)量

采樣有一定的數(shù)量才具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，如果采樣品的數(shù)量低，根本不能夠代表整個(gè)養(yǎng)豬場(chǎng)的抗體水平，但是如果采樣樣品的數(shù)量太多，又不經(jīng)濟(jì)。按照一般統(tǒng)計(jì)學(xué)的規(guī)律，如果豬群的采樣量為20頭時(shí)，具有98%的可信度；采樣量為30頭時(shí)，就能達(dá)到99%的可信度；當(dāng)采樣量達(dá)到40頭時(shí)，就具有了99.5%的可信度；若豬群的采樣量為50頭，那么可信度就能達(dá)到99.9%。所以，建議分別對(duì)每個(gè)階段采樣30頭以上，幾乎就可以代表豬場(chǎng)的整體水平。

3采樣方法

采樣時(shí)要選擇健康的豬只，不對(duì)病豬進(jìn)行采樣，確保是隨機(jī)進(jìn)行采樣，保證每個(gè)胎次都能達(dá)到均衡狀態(tài)。采血時(shí)要盡量避免污染，用酒精棉擦拭采血部位進(jìn)行消毒，采血量要多于2mL，這樣能夠保證供檢測(cè)的血清足夠量。清楚標(biāo)記采集的樣品、編號(hào)要具有規(guī)律性，有順序的給樣品進(jìn)行排列，以便于檢測(cè)和對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。采集的樣品要裝在保溫盒中，并且保溫盒里應(yīng)該有冰袋，及時(shí)的送到實(shí)驗(yàn)室，在運(yùn)送途中盡量不要搖晃保溫盒，避免出現(xiàn)溶血現(xiàn)象。采集的樣品應(yīng)該標(biāo)記號(hào)詳細(xì)的說(shuō)明，具體數(shù)據(jù)應(yīng)該包括豬只的日齡、胎齡、豬群種類以及健康狀況，還有最后的免疫時(shí)間和疫苗來(lái)源等。

4檢測(cè)

豬瘟血清抗體水平的檢測(cè)采用正向血凝試驗(yàn)。在96孔血凝板上，每孔加入50μL稀釋液，每排第一孔加入待檢血清50μL，遞比稀釋待檢血清至血清濃度為1∶512，最后50μL丟棄。再在每孔加入抗原診斷液25μL，置濕盒中于25℃孵育1.5~3.0h，判定結(jié)果。判定標(biāo)準(zhǔn)：凡能使50%的紅細(xì)胞凝集的血清最大稀釋倍數(shù)為該份血清的抗體效價(jià)，豬瘟血清抗體效價(jià)高于或等于1∶16視為免疫合格。豬偽狂犬病、豬藍(lán)耳病抗體檢測(cè)參照美國(guó)IDEXX公司ELISA診斷試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。待檢血清分別作1∶20(豬偽狂犬病抗體檢測(cè))和1∶40(豬藍(lán)耳病抗體檢測(cè))稀釋。取稀釋好的待檢血清100μL加入包被好的96孔聚苯乙烯診斷試劑盒中，置濕盒內(nèi)25℃作用30min，取出，用洗滌液充分洗滌3~5次，甩盡殘留液體，每孔加入酶標(biāo)抗體100μL，置濕盒內(nèi)2.5℃作用30min，洗滌。再在每孔中加入TMB底物溶液100μL，置濕盒內(nèi)25℃；作用15min后，加入終止液100μL， 立即置B10-RAD550型酶標(biāo)儀上650nm處測(cè)定。分別按所附計(jì)算公式判定是否為血清抗體陽(yáng)性。

5討論

從整體水平出發(fā)，以豬瘟抗體間接血凝價(jià)在1∶16以上時(shí)能抵抗強(qiáng)毒感染作為參考，僅有很少的豬場(chǎng)和豬群達(dá)不到這個(gè)水平。也有部分豬場(chǎng)中的少數(shù)豬只，豬瘟抗體滴度低，不能抵抗強(qiáng)毒侵襲而發(fā)病，或者是成為隱性帶毒豬，對(duì)易感豬群造成威脅。導(dǎo)致這種結(jié)果的原因，可能與豬瘟疫苗免疫程序不合理和免疫質(zhì)量不佳有關(guān)。清除小群范圍內(nèi)的疾病感染，可以使用基因工程致弱活毒苗，以及相容的血清學(xué)試驗(yàn)區(qū)分疫苗抗體和野毒感染誘導(dǎo)產(chǎn)生的抗體。

抗體水平的形成會(huì)因?yàn)榻臃N疫苗引起，也可能是因?yàn)樽匀桓腥镜囊岸疽?，目前?duì)于抗體水平形成的具體原因還沒有確定，也不容易區(qū)分。有的疫苗是靠細(xì)胞免疫發(fā)揮作用的而不是依靠抗體水平，比如偽狂犬病，所以用抗體水平評(píng)價(jià)偽狂犬疫苗是無(wú)任何作用的。不同生長(zhǎng)階段的豬群，其抗體水平也不相同，在產(chǎn)房仔豬具有較高的母源抗體水平，但是進(jìn)入到保育舍以后，所有病原或者是疫苗的抗體水平都處于最低水平，到肥育階段抗體水平會(huì)逐漸上升，發(fā)育為母豬的時(shí)候，抗體水平達(dá)到最高狀態(tài)。