段和祥 程奇珍 楊毅生 王曉青

1.江西省藥品檢驗(yàn)檢測(cè)研究院，江西省藥品與醫(yī)療器械質(zhì)量工程技術(shù)研究中心，江西南昌 330029；2.解放軍總醫(yī)院第一附屬醫(yī)院藥劑藥理科，北京100048

止汗擦劑為醫(yī)院制劑[1]，具有消毒、殺菌作用，處方由5%甲醛、2%苯酚、3.75%乙醇組成的水溶液。它可使皮膚發(fā)赤，改善皮下血液循環(huán)，有利于藥物的滲透與吸收，是臨床使用較廣的藥物，主治手足多汗癥。止汗擦劑由苯酚和乙醇等組成，原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)對(duì)苯酚采用紫外吸收系數(shù)法進(jìn)行控制，未對(duì)乙醇含量進(jìn)行控制，為更好的控制產(chǎn)品的質(zhì)量，建立專屬性好、準(zhǔn)確度高的氣相色譜法對(duì)止汗擦劑中苯酚[2-6]和乙醇[7-12]的含量進(jìn)行控制，并進(jìn)行方法學(xué)考察。結(jié)果表明，所建立的方法簡(jiǎn)便、快捷，靈敏度高，準(zhǔn)確度好。

1 儀器與試藥

Agilent 6890N 型氣相色譜儀，氫火焰離子化檢 測(cè) 器（FID），Sartorius BP211D 精 密 電 子 天 平（德國(guó)賽多利斯股份公司）。苯酚、乙醇對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)100509-201203、130106-201202）；止汗擦劑（某醫(yī)院，批號(hào)130311、131108-1、131108-2、131108-3）；N，N-二甲基甲酰胺為色譜純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱HP-5 石英毛細(xì)管柱（30mm×0.53mm，5.0μm）；程序升溫：初始柱溫90℃，保持6min，以20℃/min 的速率升至170℃，保持7min。進(jìn)樣口溫度220℃，檢測(cè)器溫度250℃，分流比為2 ∶1，氮?dú)饬魉?mL/min，氫氣的流速40mL/min，空氣流速400mL/min。

2.2 溶液的制備

供試品溶液：精密量取本品1mL，置50mL 量瓶中，加N，N-二甲基甲酰胺稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

對(duì)照品溶液：精密稱取對(duì)照品苯酚0.1986g、乙醇0.3013g，置50mL 量瓶中，加N，N-二甲基甲酰胺溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品貯備溶液。精密量取對(duì)照品貯備溶液各1mL，置同一10 量瓶中，用N，N-二甲基甲酰胺稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。

陰性樣品溶液：按處方比例取甲醛溶液5mL，置100mL 量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度，作為空白輔料；再精密量取空白輔料1mL，置50mL 量瓶中，加N，N-二甲基甲酰胺稀釋至刻度，作為空白輔料溶液。

2.3 專屬性試驗(yàn)

分別吸取“2.2”項(xiàng)下制備的供試品溶液、對(duì)照品溶液和陰性樣品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件，測(cè)定，記錄色譜圖。結(jié)果苯酚和乙醇色譜峰的理論板數(shù)均大于5000，分離度均大于2.0，陽(yáng)性樣品溶液對(duì)測(cè)定無(wú)干擾，見圖1（A、B、C）。

圖1 氣相色譜圖

2.4 線性關(guān)系及檢出限

精 密 量 取 對(duì) 照 品 貯 備 溶 液2.0、1.0、1.0、2.5、2.5、2.5mL，分別5、5、10、50、100、200mL 量瓶中，用N，N-二甲基甲酰胺稀釋至刻度，搖勻，作為線性供試液。精密量取上述線性供試液各1μL，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，以各自測(cè)得的峰面積為縱坐標(biāo)（A），濃度為橫坐標(biāo)（c）進(jìn)行線性回歸。苯酚、乙醇回歸方程分別為：A=5861 c -73.487（0.9998）和A=2561.6 c -9.5617（0.9999）。結(jié)果表明苯酚在0.0497 ～1.59mg/mL 濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；乙醇在0.0753 ～2.41mg/mL 濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。另取對(duì)照品溶液，采用逐步稀釋法，按上述色譜條件測(cè)定和方法進(jìn)樣分析，檢測(cè)限以S/N=3 計(jì)算。結(jié)果苯酚、乙醇的檢出限分別為0.32、0.61μg/mL。

2.5 精密度試驗(yàn)

取“2.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液6 份，照“2.1”項(xiàng)下色譜條件，分別進(jìn)樣，計(jì)算峰面積相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）。結(jié)果苯酚、乙醇的RSD 分別為0.63%、0.94%。

2.6 重復(fù)性

取止汗擦劑（批號(hào)為130311）樣品6份，按“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，依法測(cè)定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算含量，結(jié)果苯酚和乙醇的RSD 分別為0.71%、1.47%。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取“2.2”項(xiàng)下供試品溶液（批號(hào)130311），照“2.1”項(xiàng) 下 色 譜 條 件，分 別 于0、6、12、18、24h 進(jìn)樣，計(jì)算峰面積的RSD。苯酚、乙醇的RSD 分別為0.54%、0.82%。結(jié)果表明供試品溶液在24h 內(nèi)，穩(wěn)定性良好。

2.8 回收率試驗(yàn)

精密量取9 份按處方比例配制的空白輔料各1mL，分別置50mL 量瓶中，分別精密加入對(duì)照品貯備溶液4.0、5.0、6.0mL，用N，N-二甲基甲酰胺稀釋至刻度，搖勻，進(jìn)行回收率測(cè)定。苯酚、乙醇的平均回收率為102.8%（RSD=1.44%）、101.0%（RSD=1.45%）。結(jié)果表明方法的準(zhǔn)確性良好，見表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=9）

2.9 樣品測(cè)定

取對(duì)照品溶液及供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖，以外標(biāo)法按峰面積計(jì)算，結(jié)果：批號(hào)130311、131108-1、131108-2、131108-3 的苯酚含量（g/mL）分別為1.64%、1.80%、1.81%、1.79%；乙醇含量（g/mL）分別為2.82%、3.05%、3.00%、3.00%。

3 討論

3.1 溶劑的選擇

乙醇與水、乙醚、氯仿、酯、烴類衍生物等有機(jī)溶劑混溶；苯酚微溶于冷水，可在水中形成白色混濁，易溶于65℃以上的熱水，易溶于醇、醚等有機(jī)溶劑。N，N-二甲基甲酰胺與水、醇、醚、酮、不飽和烴、芳香烴烴等混溶，溶解能力強(qiáng)。考慮水與氣相色譜柱的固定液反應(yīng)或溶解造成柱流失，降低柱效，不宜用水作為溶劑，而選擇N，N-二甲基甲酰胺作為溶劑。

3.2 色譜柱的選擇

苯酚與乙醇均為弱極性分子，均含有羥基，當(dāng)苯酚受到苯環(huán)π 鍵的影響，使氧和碳形成p-π 共軛，使得羥基強(qiáng)度減小，也能夠電離，所以也呈酸性，乙醇不電離，所以它的羥基強(qiáng)度最大，而碳氧單鍵強(qiáng)度最小，故乙醇的極性強(qiáng)于苯酚。根據(jù)相似相溶原則-即待測(cè)組分與固定液極性匹配原則選擇色譜柱：（1）選擇DB-5 和HP-5 毛細(xì)管柱，從分離度和分離效果來分析，HP-5 的效果較好；（2）同時(shí)考察了非極性DB-1、HP-1 毛細(xì)管柱；中等極性毛細(xì)管柱DB-1701、DB-17；強(qiáng)極性毛細(xì)管柱DBWAX、DB-FFAP、HP-INNOWAX 共7 種色譜柱的分離效果，結(jié)果均不理想。

3.3 色譜條件的優(yōu)化

常壓下乙醇的沸點(diǎn)78.4℃，苯酚的沸點(diǎn)182℃，兩組份的沸點(diǎn)相差較大，在恒溫條件下，假如柱溫較低，則低沸點(diǎn)組合分離得好，而高沸點(diǎn)組分的流出時(shí)間會(huì)太長(zhǎng)，造成峰展寬，甚至滯留在柱中造成柱污染，反之柱溫太高，低沸點(diǎn)組分又難以分離，故采用程序升溫條件。

本實(shí)驗(yàn)方法簡(jiǎn)便、快捷，靈敏度高，結(jié)果準(zhǔn)確。可用于止汗擦劑質(zhì)量的有效控制。

[1] 中國(guó)醫(yī)院制劑規(guī)范（西藥制劑第二版）[S].北京：中國(guó)醫(yī)院科技出版社，85-86.

[2] 國(guó)家藥典委員會(huì)編.中華人民共和國(guó)藥典（二部）[S].2010 年版.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：443.

[3] 馬延慧，程麗萍，郇瑜，等.氣相色譜法測(cè)定止癢洗劑中苯酚和薄荷腦的含量[J].中國(guó)藥物與臨床，2014，24（9）：1162-1163.

[4] 王玉飛，金米聰，李繼革.頂空固相微萃取-氣相色譜法測(cè)定尿中苯酚[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2011，21（10）：2401-2402.

[5] 徐道華，張紅偉.氣相色譜法測(cè)定復(fù)方薄荷腦苯酚酊中薄荷腦和苯酚的含量[J].西北藥學(xué)雜志，2011，26（6）：427-429.

[6] 蘭文，劉雁鳴，石笑弋.氣相色譜法測(cè)定樟酚酊中樟腦及苯酚的含量[J].中南藥學(xué)，2013，11（12）：931-934.

[7] 國(guó)家藥典委員會(huì)編.中華人民共和國(guó)藥典（二部）[S].2010 年版.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：10-11.

[8] 施俊輝，史亞軍，唐梅，等.氣相色譜內(nèi)標(biāo)法測(cè)定黃芩提取物亞微乳中的乙醇?xì)埩鬧J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2011，17（15）：66-68.

[9] 王坤，翟宇，王英華.頂空毛細(xì)管氣相色譜法測(cè)定苦參素中丙酮和乙醇?xì)埩袅縖J].藥物分析雜志，2010，30（7）：1258-1260.

[10] 趙美艷，徐琛，呂燕平，等.氣相色譜法測(cè)定聚維酮碘溶液中乙醇和乙酸的殘留量[J].中國(guó)臨床藥學(xué)雜志，2014，23（2）：103-106.

[11] 姜姍，倪健，黃淑惠，等.毛細(xì)管柱氣相色譜法測(cè)定10個(gè)廠家養(yǎng)陰清肺糖漿中乙醇的含量[J].中華中醫(yī)藥雜志，2011，26（7）：1609-1611.

[12] 孔霽，臧恒昌，王彥厚.氣相色譜法測(cè)定阿莫西林克拉維酸鉀片中的乙醇?xì)埩袅縖J].食品與藥品，2014，16（2）：120-122.