汪 蘭

廣東藥學(xué)院基礎(chǔ)學(xué)院，廣東廣州 510006

子宮頸癌屬于常見(jiàn)的婦科疾病之一，隨著人們生活水平、生活質(zhì)量的提高，宮頸癌發(fā)病率呈逐年上升的趨勢(shì)發(fā)展，據(jù)有關(guān)研究表明，宮頸癌占女性生殖器官癌瘤中的第一位[1]。宮頸癌在世界各國(guó)均有大量的患病人群，發(fā)病率與死亡率極高[2]，根據(jù)地區(qū)的不同，觀察發(fā)現(xiàn)子宮頸癌患病人群的發(fā)展趨勢(shì)，可將其總結(jié)為鄉(xiāng)村高于城市，山區(qū)高于平原。一旦患有子宮頸癌，將給女性患者的身體健康帶來(lái)極大的威脅[3]，依據(jù)此類事實(shí)，本文將我院一年來(lái)收治的宮頸癌患者共56 例和宮頸良性腫瘤患者44例進(jìn)行研究，通過(guò)檢測(cè)子宮頸癌中Sam68 蛋白、核增殖抗原、皮鈣黏附蛋白等項(xiàng)目的表達(dá)，對(duì)Sam68蛋白在宮頸癌細(xì)胞增殖的影響進(jìn)行了深入的研究和探討，相關(guān)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本組選擇我院于2012 年12 月～2013 年12月收治的宮頸癌患者共56 例和宮頸良性腫瘤患者44 例，前者作為觀察組，后者作為對(duì)照組，同時(shí)每位患者均經(jīng)臨床資料、病理學(xué)及實(shí)驗(yàn)室檢查證實(shí)存在宮頸組織病變，對(duì)每一名患者腫瘤組織中Sam68 蛋白、核增殖抗原（Ki67）、皮鈣粘附蛋白（E-cadherin）指數(shù)變化進(jìn)行分析和比較。100例患者均為女性，年齡23 ～78 歲，平均年齡（53.2±6.7）歲，兩組患者病情、年齡、病程比較均無(wú)明顯差異（P ＞0.05），可以進(jìn)行對(duì)比分析。

1.2 方法

本次研究使用的試劑為Sam68 蛋白單克隆抗體（由上海瑞奇生物科技有限公司生產(chǎn)制造）[4]，免疫組化 Power Vision 二步法試劑盒PV-6002（由北京欣興唐生物科技有限公司生產(chǎn)制造）， DAB 顯色試劑盒（由北京康為世紀(jì)生產(chǎn)制造）[5]；嚴(yán)格按照試劑盒及Sam68 蛋白說(shuō)明書進(jìn)行操作，Sam68 蛋白、E-cadherin采用免疫組化PV 二步法染色，Sam68 蛋白抗?jié)舛葹? ∶10[7]，E-cadherin 抗?jié)舛葹? ∶200[8]。

1.3 診斷結(jié)果

在實(shí)驗(yàn)室顯微鏡下觀察Sam68 蛋白的性質(zhì)，若其胞核、胞漿染色呈棕黃色則為陽(yáng)性，根據(jù)免疫組化半定量計(jì)分法對(duì)Sam68 蛋白陽(yáng)性染色程度進(jìn)行計(jì)分，無(wú)著色為0 分，淺黃色為1 分，棕黃色為2 分，棕褐色為3 分[9]；根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞比例進(jìn)行計(jì)分，陽(yáng)性細(xì)胞比例≤5%計(jì)0 分，陽(yáng)性細(xì)胞比例在5%～10%間計(jì)1 分，陽(yáng)性細(xì)胞比例在11%～50%間計(jì)2 分，陽(yáng)性細(xì)胞比例在51%～80%間計(jì)3 分，陽(yáng)性細(xì)胞比例大于80%計(jì)4 分[10]；根據(jù)Sam68 蛋白染色與陽(yáng)性細(xì)胞比例的乘積判斷其陽(yáng)性結(jié)果，0 分即為-，1 ～4分即為+，5 ～12 分即為++～+++。

在實(shí)驗(yàn)室顯微鏡下觀察E-cadherin 的性質(zhì)，若其胞核、胞漿染色呈棕黃色則為陽(yáng)性，根據(jù)免疫組化半定量計(jì)分法對(duì)E-cadherin 陽(yáng)性染色程度進(jìn)行計(jì)分，計(jì)分情況與Sam68 蛋白陽(yáng)性染色計(jì)分方法相同；根據(jù)E-cadherin 陽(yáng)性細(xì)胞占細(xì)胞總數(shù)的平均值判斷其陽(yáng)性率，小于10%即為-，10%～50%即為+，大于50%即為++～+++。ki67 檢測(cè)方法與E-cadherin 基本相同。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS16.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)上述治療進(jìn)行數(shù)據(jù)的分析，計(jì)量資料采用（）表示，進(jìn)行t 檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料進(jìn)行x2檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)為α=0.05，相關(guān)性分析采用 Spearman 秩相關(guān)分析法[11]，P ＜0.05 時(shí)為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

本組選取的宮頸癌患者共56 例和宮頸良性腫瘤患者44 例，對(duì)兩組患者腫瘤組織中Sam68 蛋白、Ki67、E-cadherin 指數(shù)變化情況進(jìn)行分析和比較后，對(duì)于所取得的成果比較滿意，Sam68 蛋白表達(dá)與TNM 分期、腫瘤大小有關(guān)，差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.05）；Sam68 蛋白表達(dá)與患者年齡、分化程度無(wú)關(guān)，差異無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05）；Sam68 的表達(dá)水平臨床病理因素的關(guān)系，如表1。Sam 68 蛋白在乳腺癌和乳腺良性腫瘤中表達(dá)，差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.05）。見(jiàn)圖1。

圖1 乳腺癌組織中 Sam68 蛋白表達(dá)情況（×400）。Sam68 蛋白在乳腺癌組織中，a 為強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)；b 為度陽(yáng)性表達(dá)；c 為弱陽(yáng)性表達(dá)；d 為陰性表達(dá)

表1 Sam68的表達(dá)水平臨床病理因素的關(guān)系

本次研究，兩組患者Sam68 蛋白 E-cadherin 陽(yáng)性例數(shù)為82（82%），基于Spearman 秩相關(guān)分析法的基礎(chǔ)上，觀察到Sam68 蛋白與E-cadherin 表達(dá)呈負(fù)相關(guān)的關(guān)系， r=-0.247，P=0.021。兩組患者Sam68 蛋白與E-cadherin 的表達(dá)關(guān)系綜合比較，見(jiàn)表2。

表2 兩組患者Sam68蛋白與E-cadherin的表達(dá)關(guān)系綜合比較

采用Spearman 秩相關(guān)分析法，觀察到Sam68蛋白與Ki67 表達(dá)呈正相關(guān)的關(guān)系，r=-0.236，P=0.027。兩組患者Sam68 蛋白與ki67 的表達(dá)關(guān)系綜合比較見(jiàn)表3。

表3 兩組患者Sam 68 蛋白與Ki67 表達(dá)關(guān)系綜合比較

3 討論

子宮頸癌是一種常見(jiàn)的婦科疾病，由于該病具有較高的發(fā)病率與致死率，嚴(yán)重威脅著女性的生命健康，根據(jù)相關(guān)研究數(shù)據(jù)顯示，國(guó)內(nèi)宮頸癌死亡率占總癌癥死亡率的第四位[12]。近年來(lái)，子宮頸癌發(fā)病率越來(lái)越高，世界各地區(qū)均存在著許多子宮頸癌患者，該病好發(fā)于40 ～50 歲的女性，在臨床上子宮頸癌的治療方法比較單一[13]，主要依賴于手術(shù)治療，患者處于早期子宮頸癌發(fā)展階段，通常采用子宮切除術(shù)進(jìn)行治療。若發(fā)展到子宮頸癌晚期的患者，一般都會(huì)采用根治性治療方式[14]，并聯(lián)合外照射及近距離照射，此種治療方法雖然能夠在一定程度上控制病情，提高患者生存率，但是易于出現(xiàn)局部復(fù)發(fā)的情況[15]。

隨著科技與醫(yī)學(xué)水平的提高，治療子宮頸癌患者由20 世紀(jì)90 年代的化療聯(lián)合標(biāo)準(zhǔn)放療方式，直至變?yōu)榻裉斓穆?lián)合放化療方式[16]，能夠最大限度的提高患者生存率，降低復(fù)發(fā)率與病死率，延長(zhǎng)患者生存周期。早期子宮頸癌患者若采用單純放療就可得到良好的治療效果，甚至治愈，但是采用聯(lián)合放化療，則治療效果相對(duì)不足，并且存在一定的風(fēng)險(xiǎn)性，易于產(chǎn)生一系列毒副后果。聯(lián)合放化療適用于治療子宮頸癌晚期患者，雖然會(huì)出現(xiàn)局部復(fù)發(fā)率，但治療效果相對(duì)理想[17]。

在子宮頸癌的檢測(cè)中Sam68 蛋白具有較高的診斷意義，子宮頸癌患者體內(nèi)Sam68 蛋白指數(shù)相對(duì)較高，尤其表現(xiàn)在對(duì)宮頸癌組織的表達(dá)[18]上，本次研究對(duì)100 例患者進(jìn)行治療后，子宮頸癌患者Sam68 蛋白表達(dá)水平明顯高于宮頸良性腫瘤患者，并且與E-cadherin 表達(dá)呈正相關(guān)的關(guān)系，與Ki67 表達(dá)呈負(fù)相關(guān)的關(guān)系，由此可證明，Sam68 蛋白對(duì)宮頸癌細(xì)胞增殖有著明顯的作用關(guān)系。同時(shí)觀察Sam68 的表達(dá)水平臨床病理因素的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)Sam68 蛋白表達(dá)與TNM 分期、腫瘤大小有關(guān)，與患者年齡、分化程度無(wú)關(guān)。

本次研究結(jié)果與大量實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)結(jié)果基本相似，這就說(shuō)明，Sam68 蛋白在正常宮頸組織中的表達(dá)明顯低于宮頸癌組織，Sam68 的表達(dá)及其胞質(zhì)中的定位與宮頸癌組織轉(zhuǎn)移有著密切的關(guān)聯(lián)，因此，在臨床上Sam68 蛋白能夠作為檢測(cè)早期宮頸癌總生存時(shí)間、無(wú)病生存時(shí)間的重要指標(biāo)，并且具有一定的臨床預(yù)測(cè)價(jià)值。與此同時(shí)，子宮頸癌患者下調(diào)Sam68 的表達(dá)水平具有抑制 Akt/GSK-3β/Snail 向上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化[19]，從而抑制宮頸癌組織及細(xì)胞的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移，是一種有效的預(yù)測(cè)宮頸癌組織淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的獨(dú)立預(yù)測(cè)因子。

根據(jù)大量研究表明，Sam68 蛋白有著控制細(xì)胞惡化、抑制腫瘤組織發(fā)展、促進(jìn)惡性細(xì)胞凋亡的特性，隨著研究的逐漸深入，發(fā)現(xiàn)Sam68 的表達(dá)水平與宮頸癌病理因素、預(yù)后有著密切的聯(lián)系，從E-cadherin、Ki67 等癌細(xì)胞增殖抗原中可發(fā)現(xiàn)，Sam68 蛋白確實(shí)具備促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞增殖的作用。

在早期宮頸腫瘤轉(zhuǎn)移的過(guò)程中，上皮細(xì)胞間質(zhì)化出現(xiàn)的首要特性是E-cad 蛋白表達(dá)水平消除或不明顯，Sam68 蛋白能夠根據(jù)不同途徑調(diào)控其下游分子GSK-3β、Snail 轉(zhuǎn)錄因子[20]，從而對(duì)E-cad herin 蛋白表達(dá)水平造成影響。本次研究，Sam68 蛋白與E-cadherin 表達(dá)呈負(fù)相關(guān)的關(guān)系，r=-0.247；P=0.021，與Ki67 表達(dá)呈正相關(guān)的關(guān)系，r=-0.236；P=0.027，這就說(shuō)明Sam68 蛋白對(duì)E-cadherin、Ki67有著不同的影響。

綜上所述，研究既往的有關(guān)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，我們會(huì)發(fā)現(xiàn)有許多臨床指標(biāo)與子宮頸癌的預(yù)后息息相關(guān)，例如分子功能影像學(xué)指標(biāo)、離體標(biāo)本相關(guān)指標(biāo)、宮頸癌腫瘤內(nèi)環(huán)境指標(biāo)、與宮頸癌細(xì)胞生物學(xué)特性相關(guān)指標(biāo)等，但由于許多指標(biāo)的檢測(cè)過(guò)程太過(guò)復(fù)雜，存在一定的局限性，而在宮頸癌組織中Sam68 蛋白的表達(dá)明顯高于正常宮頸組織，因此，Sam68 蛋白對(duì)宮頸癌細(xì)胞增殖具有促進(jìn)作用。

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