楊傳盛，　黃　湛，　羅智輝，　雷睿文，　陳卓榮，　吳家豪，　歐林洋，　李　敏

乳腺癌患者外周血STC-1含量變化的臨床意義研究

楊傳盛，黃湛，羅智輝，雷睿文，陳卓榮，吳家豪，歐林洋，李敏

作者單位： 512026廣東韶關(guān)，粵北人民醫(yī)院頭頸乳腺外科

第一作者： 楊傳盛，男，碩士研究生，副主任醫(yī)師，研究方向：頭頸腫瘤和乳腺腫瘤的診治與臨床研究，

E-mail: yangchuansh@126.com

【摘要】目的探討血清標(biāo)記物STC-1在乳腺癌患者癌組織和外周血中的含量變化及其臨床意義。方法采用熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)80例乳腺癌患者外周血、40例乳腺良性腫瘤患者外周血及30例正常人外周血中STC-1的表達(dá)水平，并對(duì)其中60例乳腺癌患者的糖鏈抗原125(CA-125)等血清腫瘤標(biāo)志物進(jìn)行比較分析。分析比較檢測(cè)過(guò)程中STC-1與CA-125的特異性與敏感度。結(jié)果80例乳腺癌患者外周血中STC-1的陽(yáng)性表達(dá)率為43.8% (35/80)；而40例乳腺良性腫瘤患者外周血中STC-1的陽(yáng)性表達(dá)率僅為5.0% (2/40)；30例健康人中無(wú)1例陽(yáng)性表達(dá)。乳腺癌患者與乳腺良性腫瘤患者、乳腺癌患者與健康人的外周血STC-1基因表達(dá)水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，乳腺癌患者組顯著高于乳腺良性腫瘤組及健康組。在乳腺癌的檢測(cè)過(guò)程中：STC-1的特異度明顯低于CA-125，而其敏感度卻明顯高于CA-125；二者聯(lián)合使用時(shí)檢測(cè)的特異度與敏感度均顯著提高(P<0.05)。結(jié)論STC-1可能在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中起重要作用，乳腺癌外周血STC-1的含量升高可以作為一個(gè)癌變的高危指標(biāo)。

【關(guān)鍵詞】斯鈣素基因；乳腺癌；腫瘤標(biāo)志物；逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)；基因檢測(cè)

Research on the content changes of the STC-1 and its role in the diagnosis of breast cancer.YANGChuansheng，HUANGZhan，LUOZhihui，LEIRuiwen，CHENZhuorong，WUJiahao，OULinyang，LImin.(DepartmentofHeadandNeckBreastSurgery，YueBeiPeople’sHospital，Shaoguan512026，China)

Correspondingauthor:YANGChuansheng，E-mail:yangchuansh@126.com

Abstract：ObjectiveTo investigate the expression level of stanniocalcin-1(STC-1) in peripheral blood of patients with breast cancer and discuss its clinical value as circulating tumor marker.MethodsThe fluorescent quantitation reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) was used to detect STC-1 in the peripheral blood of 80 patients with breast cancer,40 patients with breast benign tumors and 30 healthy subjects，and serum carcino-embryonic carbohydrate antigen 125 (CA-125) were detected among 60 patients with breast cancer and analyzed comparatively.ResultsThe positive rate of STC-1 in 80 patients with breast carcinoma was 43.8%(35/80)，the positive rate of STC-1 in 40 patients with benign tumors was 5.0%(2/40)，but there was no expression of STC-1 in 30 healthy patients.The expression level of STC-1 in peripheral blood of patients with breast cancer was higher than that of breast benign tumors and that of the healthy subjects with statistical significance.In the detecting process of the breast cancer, the STC-1 was of lower specificity than CA-125；while its sensitivity is higher than that of the CA-125.However,both the specificity and sensitivity were remarkably increased when the STC-1 and CA-125 were detected in combination(P<0.05).ConclusionsSTC-1 protein expression played an important role in breast cancer initiation and progression，and may be a potential biomarker for prognosis assessment of breast cancer

Keywords：stanniocalcin-1；breast cancer；tumor marker；reverse transcription polymerase chain reaction；gene detection

乳腺癌的發(fā)病率在世界范圍內(nèi)正不斷上升，占所有女性癌癥的25%[1]，且發(fā)病有逐漸年輕化的趨勢(shì)。據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì)，全球每年約有120萬(wàn)名女性被診斷為乳腺癌，且每年乳腺癌發(fā)病率以5%～20%的速度上升。盡管近年來(lái)由于診療技術(shù)的進(jìn)步，乳腺癌的病死率有所下降，但它仍是女性腫瘤致死的第一位病因。因此，臨床上需要尋找一種檢查方法簡(jiǎn)單、可對(duì)乳腺癌早期診斷、監(jiān)測(cè)病情變化及評(píng)價(jià)療效和判斷預(yù)后具有重要意義的腫瘤標(biāo)記物。目前臨床上乳腺癌的血清學(xué)標(biāo)志物并不多,而特異性和敏感性較高的可以獨(dú)立作為腫瘤標(biāo)記的更少。近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一種稱為人類斯鈣素-1( human stanniocacin-1, hSTC-1)的糖蛋白激素, 主要存在于多種不同腫瘤組織和腫瘤細(xì)胞系中, 包括肝癌、胃癌、食管癌、乳腺癌、直腸癌、腎上腺癌等[2-4]。由于STC-1在非腫瘤人群外周血中不表達(dá),提示STC-1作為腫瘤標(biāo)志物具有較高的特異性,可能成為乳腺癌一個(gè)新的腫瘤標(biāo)記物[5-9]。本研究比較了STC-1在乳腺癌患者與乳腺良性腫瘤患者及健康人外周血各組之間表達(dá)水平的差異，同時(shí)結(jié)合血清腫瘤標(biāo)志物糖鏈抗原125(CA-125)，初步探討STC-1基因作為乳腺癌腫瘤標(biāo)志物的診斷價(jià)值，同時(shí)探討其與臨床分期和轉(zhuǎn)移的關(guān)系，為乳腺癌的早期診斷、早期治療、預(yù)后判斷提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1材料和方法

1.1材料

1.1.1研究對(duì)象在2013年1月至2014年8月期間，隨機(jī)收集廣東省粵北人民醫(yī)院80例乳腺癌患者，均為女性，年齡29～84歲，經(jīng)病理檢查證實(shí)為原發(fā)性乳腺癌,術(shù)前未經(jīng)過(guò)任何化療和抗腫瘤治療。采集乳腺癌患者治療前外周血，并收集同期其中60例患者血清CA-125的檢測(cè)結(jié)果。同時(shí)，收集40例乳腺良性腫瘤患者、30名健康體檢志愿者的外周血作為對(duì)照組，均為女性，年齡25～50歲。

1.1.2儀器與試劑低溫離心機(jī)、PCR儀、凝膠成像分析系統(tǒng)(Syngene)、酶標(biāo)儀(Bio-RAD model 450)、小鼠抗人STC-1抗體(Dako)、Trizol試劑為Invitrogen公司產(chǎn)品，RT-PCR試劑盒為日本Takara公司產(chǎn)品。STC-1與Bactin引物由北京賽百盛公司合成。

1.2方法

1.2.1樣本處理和總RNA的提取分別抽取受檢者外周靜脈血5 ml，抗凝后生理鹽水稀釋2～3倍，用淋巴細(xì)胞分離液分離有核細(xì)胞，加入1 ml Trizol試劑，應(yīng)用硫氰酸胍-酚-氯仿法提取總RNA。

表1　STC-1基因PCR引物序列

1.3RT-PCR結(jié)果判定

PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳，以溴酚藍(lán)作為電泳指示劑，于數(shù)字圖像分析儀2000下觀察目的條帶。269bpβ-actin條帶的出現(xiàn)，證明逆轉(zhuǎn)錄所得cDNA的完整性及PCR反應(yīng)的成功，陽(yáng)性結(jié)果為觀察到相應(yīng)大小的擴(kuò)增條帶(STC-1產(chǎn)物為377bp，β-actin產(chǎn)物為269 bp)。若同時(shí)出現(xiàn)產(chǎn)物為377 bp和269 bp兩條帶為陽(yáng)性表達(dá)；如果僅出現(xiàn)β-actin 條帶則為陰性表達(dá)(內(nèi)參和目的基因產(chǎn)物一次電泳的結(jié)果)。半定量RT-PCR軟件掃描其灰度值，具體應(yīng)用數(shù)字圖像分析儀2000掃描目的基因和內(nèi)參灰度，將兩者灰度比作為灰度值設(shè)為STC-1表達(dá)量。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS16.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。乳腺癌患者與乳腺良性腫瘤患者、乳腺癌患者與健康人及乳腺良性腫瘤患者與健康人3組之間STC-1基因表達(dá)水平的比較，數(shù)據(jù)分布經(jīng)正態(tài)性檢驗(yàn)后用秩和檢驗(yàn)；STC-1與腫瘤標(biāo)志物CA-125檢出率的比較用McNemar檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1外周血hSTC-1的表達(dá)結(jié)果

80例乳腺癌患者外周血中STC-1的陽(yáng)性表達(dá)率為43.8% (35/80)；而40例乳腺良性腫瘤患者外周血中STC-1的陽(yáng)性表達(dá)率為5.0% (2/40)；健康人則無(wú)1例陽(yáng)性表達(dá)，乳腺癌患者與乳腺良性腫瘤患者、乳腺癌患者與健康人的外周血STC-1基因表達(dá)水平差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.2STC-1與血清腫瘤標(biāo)志物CA-125聯(lián)合應(yīng)用的檢出率比較

本研究80例乳腺癌患者中有60例血樣與STC-1同步做了血清CA-125濃度檢查，因此，對(duì)這60組數(shù)據(jù)進(jìn)行了陽(yáng)性檢出率的比較。將STC-1相對(duì)表達(dá)水平高于0.5定義為陽(yáng)性，CA-125指標(biāo)陽(yáng)性即為陽(yáng)性，結(jié)果兩種方法檢出率不同，STC-1的檢出效能高于CA-125(χ2=5.31，P<0.05)，見表2。對(duì)乳腺癌的檢測(cè)中發(fā)現(xiàn)：STC-1的特異度明顯低于CA-125，而其敏感度卻明顯高于CA-125；二者聯(lián)合使用時(shí)檢測(cè)的特異度與敏感度均顯著提高(P<0.05)，見表3。

表2　乳腺癌患者血清STC-1與CA-125檢出情況的比較

表3　STC-1與CA-125 檢測(cè)對(duì)乳腺浸潤(rùn)性癌的診斷效果

3討論

1995年Wagner等[2]首先發(fā)現(xiàn)了人類組織中存在STC-1，Chang等[10]克隆出人類編碼STC的cDNA。大量研究證實(shí)STC-1存在于人類多種器官組織中，而外周血中不存在。隨著研究的不斷深入，人們發(fā)現(xiàn)STC-1的表達(dá)與人類腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。有學(xué)者認(rèn)為STC-1調(diào)節(jié)Ca/Pi濃度可能是腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移必要的傳導(dǎo)信號(hào)[11-12]。更多研究[13-14]表明，STC-1可以促進(jìn)缺氧區(qū)域血管生成和提高腫瘤細(xì)胞的缺氧耐受，在維持腫瘤細(xì)胞的能量代謝、新血管形成及腫瘤轉(zhuǎn)移中起重要作用。

李志祥等[15]研究發(fā)現(xiàn)，甲狀腺乳頭狀癌患者外周血中STC-1基因的陽(yáng)性表達(dá)率為39.62%(21/53)，張海晨等[16]研究發(fā)現(xiàn)肺腺癌患者外周血中STC-1基因的陽(yáng)性表達(dá)率為48.89%(22/45)。在本研究中，我們運(yùn)用熒光定量RT-PCR檢測(cè)80例乳腺癌患者、40例乳腺良性腫瘤患者及30名健康人外周血STC-1的表達(dá)，結(jié)果顯示，在乳腺癌患者外周血中STC-1的濃度明顯高于良性腫瘤患者組和健康人組，而且，良性腫瘤組外周血中STC-1也明顯高于健康人組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，這在一定程度上說(shuō)明外周血中STC-1的表達(dá)在乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展中可能起重要作用，有助于鑒別乳腺良惡性病變，對(duì)乳腺癌的早期診斷有意義。

通過(guò)本次研究發(fā)現(xiàn)，對(duì)于檢查的乳腺癌患者，STC-1的特異度明顯低于CA-125，而其敏感度卻明顯高于CA-125；二者聯(lián)合使用時(shí)檢測(cè)的特異度與敏感度均顯著提高(P<0.05)。這提示STC-1是CA-125檢測(cè)早期乳腺癌的一個(gè)有利的補(bǔ)充，血清中STC-1含量的升高可以作為一個(gè)乳腺癌變的高危指標(biāo)。

綜上所述，外周血STC-1在乳腺癌患者、乳腺良性腫瘤患者和健康人間的含量差異明顯，同時(shí)與臨床較常用的腫瘤標(biāo)志物進(jìn)行比較分析，證明其可能參與了乳腺癌發(fā)生及發(fā)展的過(guò)程，乳腺癌外周血STC-1的含量升高可以作為一個(gè)癌變的高危指標(biāo)，對(duì)于乳腺癌的早期診斷具有重要意義。

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論著

[收稿日期：2015-02-27] [本文編輯：朱吉鴿]

文章編號(hào)：1674-4136(2015)04-0209-04

doi：10.3969/j.issn.1674-4136.2015.04.002

基金項(xiàng)目：韶關(guān)市醫(yī)藥衛(wèi)生科研項(xiàng)目(Y14050)/韶關(guān)市科技計(jì)劃項(xiàng)目(2014CX/K260)