宋艷剛，李 波，王國(guó)祥

麗珠集團(tuán)利民制藥廠，廣東 韶關(guān) 512028

膠囊是由藥用明膠加輔料精制而成的帽、體兩節(jié)膠囊殼，主要用于盛裝固體藥物。2012年4月“鉻超標(biāo)藥用膠囊事件”后，國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局對(duì)2012年5月1日后新上市的膠囊劑藥品實(shí)行鉻限量檢驗(yàn)，確保公眾用藥安全［1］。

《中國(guó)藥典》2010年版已對(duì)膠囊中的有害元素鉻進(jìn)行了限量要求，采用原子吸收光譜法檢測(cè)。近年來，隨著質(zhì)譜技術(shù)的快速發(fā)展，電感耦合等離子體質(zhì)譜儀(ICP-MS)的應(yīng)用也越來越普遍，其具有極低的檢出限，使方法更加準(zhǔn)確可靠，靈敏便捷，逐漸成為食品藥品中元素分析的首選方法［2-6］。本研究擬對(duì)ICP-MS法測(cè)定某中藥膠囊中鉻含量的方法進(jìn)行驗(yàn)證，為下一步取代藥典方法提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器 Agi lent 7700x型電感耦合等離子體質(zhì)譜儀［(美國(guó)安捷倫公司，包括第三代八級(jí)桿碰撞反應(yīng)池系統(tǒng)(ORS3)；高精度、高靈敏度、耐高鹽、高效Micromist同心霧化器，Pel tier半導(dǎo)體控溫(-5～20℃)，高純石英雙通道霧室，石英矩管，鎳采樣錐和截取錐，數(shù)字式固態(tài)射頻發(fā)生器，X型提取透鏡組，OmegaⅢ離子透鏡雙曲面四級(jí)桿，9個(gè)數(shù)量級(jí)同時(shí)雙通道模式檢測(cè)器］；MARS5型微波消解儀(美國(guó)CEM公司)；PALL Cascada AN超純水機(jī)(美國(guó)頗爾公司)；AE200電子天平(瑞士梅特勒公司)。

1.2 試藥 硝酸(優(yōu)級(jí)純，德國(guó)默克公司)；鉻(GSBG62017-90)單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液（國(guó)家鋼鐵材料測(cè)試中心鋼鐵研究總院，濃度為100μg/mL）；鍺(GSB04-1728-2004)單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液（國(guó)家有色金屬及電子材料分析測(cè)試中心，濃度均為1 000μg/mL）；復(fù)方五指柑膠囊(麗珠集團(tuán)利民制藥廠，批號(hào)：130504、130605、131108)；水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的制備 取鉻單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液(1 000μg/mL)，用5%硝酸稀釋制成每1mL含鉻10.0μg、20.0μg的鉻標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備 精密量取鉻標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(10μg/mL)適量，用5%硝酸溶液稀釋成每1mL含鉻 0、1、5、10、50、100 ng的對(duì)照品溶液，臨用新配。

2.3 內(nèi)標(biāo)溶液的制備 取鍺標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，用5%硝酸溶液稀釋成適宜濃度。

2.4 供試品溶液的制備 取復(fù)方五指柑膠囊，傾出內(nèi)容物，稱取空膠囊約0.2 g，精密稱定，置聚四氟乙烯消解罐內(nèi)，加硝酸8mL，混勻，蓋上內(nèi)蓋，旋緊外套，置微波消解儀中按設(shè)定程序進(jìn)行消解。消解完成后，取出，放冷，用超純水轉(zhuǎn)移并用重量法定容至50 g，搖勻，用0.22μm濾膜濾過，棄去初濾液，收集續(xù)濾液作為供試品溶液；同法制備試劑空白溶液，作為空白校正，見表1。

表1 微波消解程序

2.5 ICP-MS工作條件參數(shù) 射頻功率：1 412W；采樣深度：8.0mm；載氣流速：0.65 L/min；輔助氣流速：13.0 L/min；冷卻氣流速：0.80 L/min；蠕動(dòng)泵轉(zhuǎn)速：50 r/min；重復(fù)次數(shù)：3。

2.6 測(cè)定法 按照電感耦合等離子體質(zhì)譜法(《中國(guó)藥典》2010年版(一部)附錄 D)測(cè)定，以72Ge為內(nèi)標(biāo)，儀器的內(nèi)標(biāo)進(jìn)樣管在儀器分析工作過程中始終插入內(nèi)標(biāo)溶液中，依次將儀器的樣品管插入各個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液中進(jìn)行測(cè)定(濃度依次遞增)，以每一濃度測(cè)得的3次讀數(shù)與內(nèi)標(biāo)讀數(shù)比值的平均值為縱坐標(biāo)，相應(yīng)濃度為橫坐標(biāo)，做標(biāo)準(zhǔn)曲線。另將儀器的樣品管插入供試品溶液中，測(cè)定，取3次讀數(shù)的平均值。從標(biāo)準(zhǔn)曲線上計(jì)算得相應(yīng)濃度，扣除相應(yīng)樣品空白，計(jì)算各元素的含量，即得。

2.7 線性關(guān)系 取系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，按上述方法進(jìn)行檢測(cè)，用其檢測(cè)值對(duì)濃度進(jìn)行線性回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線y=9160.5932x+568.9267，結(jié)果在0～100ng/g濃度范圍內(nèi)與檢測(cè)值線性關(guān)系良好，r=0.999 9，見圖1。

圖1 標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

2.8 檢出限與定量限 測(cè)定11份空白樣品溶液，以其響應(yīng)值的3倍所對(duì)應(yīng)的濃度進(jìn)樣檢測(cè)，作為檢測(cè)限，以其響應(yīng)值的10倍所對(duì)應(yīng)的濃度進(jìn)樣檢測(cè)，作為定量限，經(jīng)計(jì)算，方法的檢測(cè)限為0.02 ng/g，定量限為 0.07 ng/g。

2.9 精密度實(shí)驗(yàn) 取供試品溶液1份，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定，結(jié)果測(cè)定值的RSD值為0.78%，表明儀器精密度良好，見表2。

表2 精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.10 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取樣品6份，按照供試品溶液制備方法制備，依法測(cè)定，結(jié)果測(cè)定值的RSD值為3.5%，表明方法重復(fù)性良好，見表3。

表3 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.11 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 取樣品9份，分別各取3份加入鉻標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液 (20μg/mL)4、8、12μL，按照供試品溶液制備方法制備，依法測(cè)定，結(jié)果回收率平均值為90.65%，RSD值為2.83%，表明方法回收率良好，見表4。

表4 加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.12 與藥典測(cè)定方法比較 使用本方法與原子吸收分光光度法對(duì)同批次樣品進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果見表5。

表5 與藥典方法比較結(jié)果

3 討論

電感耦合等離子體質(zhì)譜法(ICP-MS)是近年來逐步被認(rèn)同和快速發(fā)展的用于檢測(cè)重金屬元素含量的方法，與傳統(tǒng)的原子吸收光譜法測(cè)重金屬等相比，具有檢測(cè)靈敏度高，可以同時(shí)測(cè)定多種元素等優(yōu)勢(shì)，操作簡(jiǎn)便、快捷，在2010版《中國(guó)藥典》中已被廣泛應(yīng)用［2］。通過驗(yàn)證，該方法的鉻元素標(biāo)準(zhǔn)曲線在0～100 ng/g濃度范圍內(nèi)，線性良好，相關(guān)系數(shù)r=0.999 9，檢測(cè)限為0.02 ng/g，定量限為0.07 ng/g，儀器精密度、樣品重復(fù)性和回收率良好，表明該方法準(zhǔn)確可靠。從驗(yàn)證結(jié)果看，膠囊劑藥品中鉻含量小于百萬分之二，符合中國(guó)藥典標(biāo)準(zhǔn)，該方法實(shí)測(cè)值較藥典方法(原子吸收光譜法)高，說明該方法靈敏度更高，可在實(shí)際工作中運(yùn)用此方法檢測(cè)膠囊劑藥品中的鉻元素含量。

［1］ 向靖宇，萬建平，楊小軍，等.從“鉻超標(biāo)藥用膠囊事件”分析我國(guó)藥品安全監(jiān)管［J］.中國(guó)藥房，2013，24(25)：2308-2310.

［2］ 朱琳嬌，陳運(yùn)動(dòng)，吳永江.電感耦合等離子體質(zhì)譜法檢測(cè)明膠空心膠囊中10種元素的含量［J］.中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2013，30(11)：1228-1232.

［3］ 郭素平.膠囊中鉻元素的測(cè)定方法驗(yàn)證分析［J］.山西中醫(yī)，2013，29(7)：50-51.

［4］ 劉永成，張麗英.石墨爐原子吸收光譜法測(cè)定膠囊中總鉻的不確定度分析［J］.黑龍江醫(yī)藥，2013，26(4)：584-586.

［5］ 李坤，胥艷，姜童祥.微波消解+石墨爐原子吸收光譜法快速測(cè)定硬質(zhì)空心膠囊中鉻［J］.中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2013，23(16)：3313-3315.

［6］ 張大成，馬新文，趙冬梅，等.藥用膠囊中鉻元素的LIBS快速檢測(cè)［J］.藥物分析雜志，2013，33(12)：2070-2073.