徐利劍，吳葉鋒，趙鳳杰，胡海英，劉海鵬

(1.浙江眾益制藥股份有限公司，浙江 麗水 323000；2.浙江普洛康裕天然藥物有限公司，浙江 金華 321017；3.優(yōu)勝美特制藥有限公司，浙江 金華 321025)

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HPLC法測(cè)定健腦補(bǔ)腎丸中甘草酸含量

徐利劍1，吳葉鋒2，趙鳳杰2，胡海英3，劉海鵬2

(1.浙江眾益制藥股份有限公司，浙江 麗水 323000；2.浙江普洛康裕天然藥物有限公司，浙江 金華 321017；3.優(yōu)勝美特制藥有限公司，浙江 金華 321025)

目的：建立高效液相色譜法測(cè)定健腦補(bǔ)腎丸中甘草酸的含量。方法：使用Ultimate XB-C18柱，以甲醇∶0.2mol/L乙酸銨溶液︰冰乙酸(63∶37∶2)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為250nm。結(jié)果：甘草酸在0.015～0.45mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，平均回收率為98.1%，RSD為0.94%。結(jié)論：本方法準(zhǔn)確、快速、簡(jiǎn)便、重現(xiàn)性好，可以有效用于健腦補(bǔ)腎丸制劑的質(zhì)量控制。

健腦補(bǔ)腎丸；甘草酸；高效液相色譜；含量測(cè)定

健腦補(bǔ)腎丸以人參、鹿茸為君藥，當(dāng)歸、白芍、山藥和白術(shù)為臣藥，佐以杜仲、牛膝等十八味藥，使以甘草調(diào)和諸藥，起健腦補(bǔ)腎、益氣健脾、安神定志之功。臨床應(yīng)用的健腦補(bǔ)腎中成藥劑型主要為口服液和傳統(tǒng)丸劑。健腦補(bǔ)腎口服液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)(WS3-B-2209-96)中只對(duì)人參藥材進(jìn)行簡(jiǎn)單鑒別，健腦補(bǔ)腎丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中僅有顯微鑒別。文獻(xiàn)使用HPLC法測(cè)定健腦補(bǔ)腎丸中的綠原酸[1]，但該制劑組方與本研究有差別，本研究所考察的健腦補(bǔ)腎丸的藥味多達(dá)25味，且采用醇提、水提二種工藝，成分更復(fù)雜。甘草酸含量是整個(gè)工藝過(guò)程中(水提、濃縮、干燥等工序)的重要控制參數(shù)。本研究以甲醇︰36%乙酸(25∶5)作溶劑提取甘草酸，并建立了HPLC法測(cè)定健腦補(bǔ)腎丸中甘草酸的含量。

1 儀器與試藥

10A型高效液相色譜儀(日本Shimadzu公司)。健腦補(bǔ)腎丸(榮昌制藥(淄博)有限公司，規(guī)格：每15粒重2g，批號(hào) 100608、100609、100610)；甘草酸銨對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)110731-200614，純度97.95%)；甲醇、乙腈為色譜純，磷酸、乙酸銨和冰乙酸為分析純，水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液配制

對(duì)照品溶液：精密稱(chēng)取甘草酸銨對(duì)照品適量(相當(dāng)于甘草酸 12.5mg)，置25mL量瓶中，加流動(dòng)相溶解并定容，搖勻；精密移取該溶液5mL置50mL量瓶中，加流動(dòng)相定容，搖勻，制成含150μg/mL的對(duì)照品溶液。

供試品溶液：取樣品適量，研細(xì)，精密稱(chēng)取1.5g置具塞錐形瓶中，精密加入溶劑25mL，稱(chēng)重，超聲處理(功率350W，頻率40kHz)40min，放冷，稱(chēng)重后用溶劑補(bǔ)足損失的量，搖勻，過(guò)濾，即得。

空白溶液：按處方量稱(chēng)取缺甘草的藥材，按健腦補(bǔ)腎丸制備工藝制成缺甘草樣品；取缺甘草樣品適量，研細(xì)，精密稱(chēng)取1.5g，同供試品溶液制備方法操作，即得。

2.2 色譜條件

色譜柱為Ultimate XB-C18柱；流動(dòng)相為甲醇︰0.2 mol/L乙酸銨溶液︰冰乙酸(63∶37∶2)；檢測(cè)波長(zhǎng)為250nm；流速為1.0mL/min；柱溫為35 ℃；進(jìn)樣量為10μL。理論板數(shù)按甘草酸峰計(jì)不低于2 500。典型色譜見(jiàn)圖1。

2.3 線性試驗(yàn)

精密稱(chēng)取甘草酸銨對(duì)照品38.28mg(相當(dāng)于甘草酸37.5mg)置25mL量瓶中，加流動(dòng)相溶解并定容，制成1.5mg/mL的對(duì)照品貯備液；分別精密移取貯備液1、2、3mL，各置100mL量瓶中，加流動(dòng)相定容；進(jìn)一步稀釋?zhuān)酶什菟釢舛确謩e為0.015、0.03、0.045、0.15、0.3、0.45mg/mL的對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣測(cè)定，以進(jìn)樣量m為橫坐標(biāo)，峰面積A為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程A=4.254 6×105m+854.97，r=0.999 9。表明甘草酸在0.015～0.45mg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.4 精密度試驗(yàn)

取供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，計(jì)算得甘草酸含量的RSD為1.17%，表明儀器精密度良好。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱(chēng)取同批樣品，共6份，按“2.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果甘草酸含量的RSD為1.16%，表明本方法重復(fù)性良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

將供試品溶液分別于配制后0、1、2、4、8、24h進(jìn)樣，結(jié)果甘草酸含量的RSD為1.79%，表明供試品溶液在24h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.7 回收率試驗(yàn)

精密稱(chēng)取已知含量的同批樣品約0.75g，共5份，分別精密加入甘草酸銨對(duì)照品0.66mg，研細(xì)混勻。按“2.1”項(xiàng)下供試品溶液制備方法操作，進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果甘草酸的平均回收率為98.1%，RSD為0.94%(n=5)。

2.8 樣品測(cè)定

取3批健腦補(bǔ)腎丸，分別按“2.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果甘草酸含量分別為0.86、0.65和0.77mg/g。暫定本品每克含甘草以甘草酸(C42H62O16)計(jì)不得低于0.6mg。

3 討論

本試驗(yàn)采用甲醇︰36%乙酸(25∶5)超聲提取，可有效提取檢測(cè)指標(biāo)成分并減少干擾，操作簡(jiǎn)單，誤差小。

取對(duì)照品和供試品，配成一定濃度的樣品，照紫外方法[2]在紫外光區(qū)190～400nm的波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，結(jié)果在250nm波長(zhǎng)處有最大吸收。同時(shí)，在250nm處，所用流動(dòng)相及溶劑、輔料等空白均無(wú)吸收。對(duì)照品和供試品測(cè)得相鄰雜質(zhì)峰的分離度均大于1.5，故選定檢測(cè)波長(zhǎng)為250nm。

雖然從現(xiàn)有文獻(xiàn)及中國(guó)藥典中可以查閱到健腦補(bǔ)腎丸中各味藥材的檢測(cè)方法，但在實(shí)際應(yīng)用中，單味藥材的檢測(cè)并不代表在不同處方的制劑產(chǎn)品中適用。在本品的水提、濃縮、干燥等工序中，投入甘草藥材中甘草酸的含量與成品含量的比例較穩(wěn)定。故本研究以甘草酸為指標(biāo)成分，采用HPLC法測(cè)定，可為健腦補(bǔ)腎丸的質(zhì)量控制提供參考。

[1] 靳維榮, 高國(guó)敬, 藤建北. 高效液相色譜法測(cè)定健腦補(bǔ)腎丸中綠原酸含量[J]. 時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥, 2006,17(2):195-196.

[2] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(二部)[M]. 北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010.

(責(zé)任編輯：魏 曉)

Determination of Glycyrrhizic Acid in Jiannao Bushen Wan by HPLC

Xu Lijian1, Wu Yefeng2, Zhao Fengjie2, Hu Haiying3, Liu Haipeng2

(1.Zhejiang Zhongyi Pharmaceutical Co.Ltd., Lishui 323000，China;2. Zhejiang Apeloa Kangyu Natural Medicine Co.Ltd., Jinhua 321017，China;3. Yosemade Pharmaceutical Co.Ltd., Jinhua 321025，China)

Objective:An HPLC method was established for the determination of glycyrrhizinic acid in Jiannao Bushen Wan. Methods:An Ultimate XB Cl8column was used with the mobile phase of methanol∶0.2mol/L ammonium acetate solution:glacial acetic acid(63∶37∶2) at the detection wavelength of 250nm. The calibration curve was linear in the concentration range of 0.015～0.45mg/mL.Results: The average recoveries was 98.1%, with RSD of 0.94%.Conclusion:The method is accurate, rapid, simple and reproducible, can be used for quality control of Jiannao Bushen Wan.

Jiannao Bushen Wan; Glycyrrhizinic Acid; HPLC; Determination

2014-09-29

徐利劍(1974-)，男，浙江眾益制藥股份有限公司工程師，研究方向?yàn)樗幤焚|(zhì)量控制。

R284

A

1673-2197(2015)03-0028-02

10.11954/ytctyy.201503011