蘇江 朱靜 周彬

（四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院·四川省人民醫(yī)院風(fēng)濕免疫科，四川 成都 610072）

系統(tǒng)性紅斑狼瘡（systemic lupus erythematosus，SLE）是一種自身免疫介導(dǎo)引起全身多器官受累的慢性炎癥性疾病。其確切的病因尚不清楚，目前認(rèn)為SLE的發(fā)病與多種遺傳因素、性激素等內(nèi)源性因素與外源性因素如感染、紫外線等復(fù)雜的多層次的相互作用的結(jié)果。本病的發(fā)病機(jī)制極為復(fù)雜，遠(yuǎn)未闡明，包括免疫耐受缺陷、淋巴細(xì)胞凋亡障礙、T、B 淋巴細(xì)胞以及NK 細(xì)胞等功能調(diào)節(jié)障礙、補(bǔ)體缺陷、免疫復(fù)合物清除障礙、細(xì)胞因子分泌調(diào)節(jié)障礙等。研究發(fā)現(xiàn)，凋亡細(xì)胞和免疫復(fù)合物清除缺陷可以活化免疫細(xì)胞表面和內(nèi)部的Fc受體或T 細(xì)胞受體（T cell receptor，TCR），激活以Ⅰ型干擾素（Interferon type I，IFN－I）為代表的先天免疫系統(tǒng)導(dǎo)致免疫調(diào)節(jié)的異常，參與SLE發(fā)病。無論在SLE 患者還是動物模型都證實(shí)了IFN－α的高表達(dá)。許多的研究結(jié)果促成了目前的結(jié)論：IFN－I，特別是IFN－α 是一個重要的致病因子與SLE的很多免疫學(xué)特征和破壞機(jī)制有關(guān)［1，2］。IFN－α有10多種亞型，不同的IFN－α亞型可能在SLE 的發(fā)病中發(fā)揮不同的作用，由于酶聯(lián)免疫吸附法（enzymelinked immunosorbent assay，ELISA）敏感性較低，針對外周血IFN－α在SLE 發(fā)病中的作用的研究還十分有限，目前國內(nèi)尚未見IFN－α2在與SLE 患者外周血表達(dá)以及與疾病活動性的相關(guān)研究。

1 對象和方法

1.1 研究對象 41例SLE 患者來自四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院·四川省人民醫(yī)院風(fēng)濕免疫科住院患者，均為女性，年齡17～57歲，平均33.1歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合美國風(fēng)濕病學(xué)會（American College of Rheumatology，ACR）1997年修訂的SLE診斷標(biāo)準(zhǔn)。②SLE 疾病活動指數(shù)（systemic lupus erythematosus disease activity index，SLEDAI）［3］大于等于6分。正常對照組39名女性，均為本院體檢正常人群，年齡22～57歲，平均36.7歲。年齡在兩組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.2 方法 在患者治療前，完成SLEDAI評分以及血細(xì)胞分析、抗核抗體（antinuclear antibody，ANA）、抗dsDNA 抗體、免疫球蛋白（IgG、IgA、IgM）、補(bǔ)體（C3、C4）、紅細(xì)胞沉降率（erythrocyte sedimentation rate，ESR）、c反應(yīng)蛋白（c reactive protein，CRP）及24小時尿蛋白定量等實(shí)驗(yàn)室檢查，并且留取空腹血清樣本，－80°冰箱保存?zhèn)溆?。IFN－α2的檢測采用Luminex液相芯片技術(shù)，試劑盒購自美國Millipore公司，具體操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 非正態(tài)分布資料以中位數(shù)（P25，P75）表示，組間比較采用Mann－Whitney U 檢驗(yàn)，相關(guān)分析采用Spearman 檢驗(yàn)，所有統(tǒng)計(jì)均采用SPSS 17.0 統(tǒng)計(jì)軟件包分析處理。P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

41 例活動性SLE 患者血清中有36 例可測到IFN－α2［24.09（2.11，194.50）pg／ml］，39例健康對照血清中有15例可測到IFN－α2［0（0，1.12）pg／ml］，兩組IFN－α2 檢測值均不符合正態(tài)分布，采用Mann－Whitney U 檢驗(yàn)結(jié)果顯示，SLE 患者IFN－α2 表達(dá)水平顯著高于健康對照（P ＜0.01）。SLE 患者血清IFN－α2水平分別與SLEDAI評分、抗dsDNA 抗體水平、ESR 水平呈正相關(guān)（r＝0.354，P ＝0.034；r＝0.325，P＝0.038；r＝0.415，P＝0.018），與C3、C4、外周血白細(xì)胞水平呈負(fù)相關(guān)（r＝－0.447，P＝0.003；r＝－0.470，P＝0.002；r＝－0.347，P＝0.045），而與ANA 滴度、免疫球蛋白（IgG、IgA、IgM）、CRP、淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)、血小板計(jì)數(shù)、24小時尿蛋白定量等無相關(guān)性，見表1。

表1 IFN－α2與SLE患者臨床指標(biāo)的相關(guān)性分析Table 1 Correlation of IFN－α2and clinical indexes of systemic lupus erythematosus

3 討論

越來越多的證據(jù)表明IFN－α是參與SLE 發(fā)病的關(guān)鍵細(xì)胞因子，Ytterberg和Schnitzer首次報(bào)道了活動性SLE患者血清中存在高水平的IFN－α，且與狼瘡活動指數(shù)和抗dsDNA 抗體滴度相關(guān)［4］。近年來，國內(nèi)外的一些研究也相繼報(bào)道了患者高水平的IFN－α（mRNA 基因表達(dá)水平或血清水平）和SLE 活動性相關(guān)。而采用ELISA 法直接檢測外周血循環(huán)IFN－α水平的研究并不十分成功［5－8］，國內(nèi)鄧姍等采用ELISA法僅在48%患者的血清中檢測到IFN－α［9］。且 在SLE患者IFN－α水平與疾病活動度的研究結(jié)果也存在差異。王濤等的研究沒有發(fā)現(xiàn)外周血IFN－α水平與SLEDAI評分存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的相關(guān)性［10］，可能與不同廠家ELISA 試劑盒靈敏度差異有關(guān)。

目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)IFN－α家族有10 余個亞型，在蛋白水平上有78%～95%的相似性［11］。有研究顯示，可能有其他IFN－α亞型水平的增高，也提示不同IFNα亞型可能在SLE 的發(fā)病中起不同的作用。目前針對IFN－α不同亞型與SLE關(guān)系的研究還鮮有報(bào)道，國外也僅見A Becker－Merok等報(bào)道了循環(huán)IFN－α2 水平在2／3的SLE患者的血清中表達(dá)增加，且與疾病活動和多種細(xì)胞因子的激活有關(guān)［12］。

本研究使用以敏感的磁珠為基礎(chǔ)的液相芯片技術(shù)，發(fā)現(xiàn)87.8%的SLE 患者外周血清中可檢測到可測到IFN－α2，顯著高于正常對照。SLE 患者外周血IFN－α2水平與疾病活動度以及ESR、抗dsDNA 抗體水平、補(bǔ)體水平等相關(guān)，提示IFN－α2是IFN－α家族中參與SLE發(fā)病的重要亞型。與生物活性分析法相比，固相ELISA 法似乎不夠靈敏度，早期在患者血清中直接檢測IFN－α2水平的結(jié)果令人失望［13］。由于采用了更高的靈敏度液相磁珠分析法，A Becker－Merok等的研究數(shù)據(jù)已經(jīng)與最早采用生物活性分析研究SLE 患者IFN－I活性的結(jié)果相當(dāng)，在具有較高疾病活動度的SLE 患者中，約50% 的患者血清干擾素活性增加［12，14］。來自于狼瘡小鼠模型和SLE 患者的臨床和遺傳學(xué)研究的數(shù)據(jù)提示IFN－I在SLE 的發(fā)病機(jī)制中起關(guān)鍵作用并且和臨床特征相關(guān)。通過生物和／或基因表達(dá)研究發(fā)現(xiàn)高IFN－α活性與增高的SLE 疾病活動評分以及抗RO 抗體和抗dsDNA 抗體持續(xù)存在相關(guān)［15，16］。本研究尚存在一定的局限性，前述提及與IFN－α2存在微小結(jié)構(gòu)差異的10多種亞型，它們均通過相同的IFN 受體發(fā)揮作用，目前還不能被檢測。同時，細(xì)胞因子的檢測還沒有金標(biāo)準(zhǔn)（免疫或生物活性分析法）。由于本研究的橫斷面設(shè)計(jì)，我們不能獲得細(xì)胞因子在SLE患者外周血表達(dá)的動態(tài)變化。并且受樣本量大小的限制，我們也不能進(jìn)行詳細(xì)的亞組分析。

4 結(jié)論

循環(huán)IFN－α2 水平與循環(huán)抗dsDNA 抗體水平呈正相關(guān)，可能與循環(huán)免疫復(fù)合物能刺激漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞生成干擾素有關(guān)［2］，但 在A Becker－Merok 等的研究沒有觀察到IFN－α2 水平與抗dsDNA 抗體水平有相關(guān)性，不排除與種族差異有關(guān)。

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