張 英，曹良順，張賽航，石亞靜，石雪靜，韓淑英*

(1.河北聯(lián)合大學(xué) 藥學(xué)院，河北 唐山 063000；2.河北聯(lián)合大學(xué) 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，河北 唐山 063000)

?

以腸囊法考察藥物及營(yíng)養(yǎng)成分吸收研究進(jìn)展

張 英1，曹良順1，張賽航1，石亞靜2，石雪靜1，韓淑英2*

(1.河北聯(lián)合大學(xué) 藥學(xué)院，河北 唐山 063000；2.河北聯(lián)合大學(xué) 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，河北 唐山 063000)

外翻腸囊法是在體外培養(yǎng)小腸腸環(huán)和刷狀緣膜囊技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展而來(lái)的藥物吸收測(cè)定方法。整理近年來(lái)腸囊法應(yīng)用的相關(guān)資料，總結(jié)腸囊法在藥物及營(yíng)養(yǎng)成分吸收研究方面的應(yīng)用，為其進(jìn)一步應(yīng)用提供參考依據(jù)。

腸囊法；藥物；營(yíng)養(yǎng)成分；吸收

外翻腸囊法是1954年由Wilson和Wiseman首次提出，其是在體外培養(yǎng)小腸腸環(huán)和刷狀緣膜囊技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展而來(lái)的一種生理學(xué)試驗(yàn)方法[1-2]。外翻腸囊法是指在動(dòng)物昏迷時(shí)立即分離小腸，去掉腸系膜，用生理鹽水或緩沖液將其沖洗干凈，然后根據(jù)試驗(yàn)?zāi)康膶⑺枘c段分割為若干小段，外翻使腸黏膜向外，結(jié)扎一端形成腸囊狀，灌注人工培養(yǎng)液后結(jié)扎另一端，置于添加有被測(cè)物質(zhì)的培養(yǎng)液中，通入95%氧氣和5%二氧化碳的混合氣體，培養(yǎng)一定時(shí)間后，根據(jù)囊內(nèi)外被測(cè)物質(zhì)的變化情況反應(yīng)腸道對(duì)物質(zhì)吸收狀況的體外測(cè)定方法。該方法操作簡(jiǎn)便，試驗(yàn)條件易控制，重復(fù)性好，經(jīng)濟(jì)適用，而且能詳細(xì)觀察到物質(zhì)進(jìn)出腸段的情況，現(xiàn)已被廣泛用于研究藥物動(dòng)力學(xué)和養(yǎng)分吸收機(jī)制[3-4]。

1 小腸營(yíng)養(yǎng)成分吸收研究進(jìn)展

1.1 葡萄糖

宋曉丹等[5]已證實(shí)在離體情況下，β-CM7 在 7.5×10-7～7.5×10-5mol/L 濃度范圍內(nèi)對(duì)葡萄糖的小腸吸收均有一定的抑制作用，且其抑制作用與濃度呈正相關(guān)。孟愛(ài)國(guó)等[6]采用α-葡萄糖苷酶實(shí)驗(yàn)及酶抑制動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)和離體大鼠小腸葡萄糖吸收模型，發(fā)現(xiàn) redicamine B 對(duì)α-葡萄糖苷酶和小腸葡萄糖吸收均呈劑量依賴性抑制作用，與拜糖平相比較無(wú)顯著性差異，且 redicamine B 對(duì)α-葡萄糖苷酶活性的抑制屬于競(jìng)爭(zhēng)性抑制，其能顯著抑制小腸葡萄糖的吸收，有望成為一種治療糖尿病的新型藥物。高秀娟等[7]采用外翻長(zhǎng)囊法，發(fā)現(xiàn)蕎精補(bǔ)腎膠囊對(duì)小腸葡萄糖的吸收具有抑制作用，當(dāng)藥物質(zhì)量濃度為20.0g/L時(shí)抑制作用最明顯，抑制率為(67.7±10.5)% ，與阿卡波糖抑制作用相當(dāng)。高升等[8]利用翻轉(zhuǎn)的離體小腸模型，通過(guò)測(cè)定 60min 內(nèi) β-CM5 不同濃度組腸囊內(nèi)葡萄糖含量及葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)率、腸道黏膜 α-葡萄糖苷酶和Na+-K+-ATP 酶活力，發(fā)現(xiàn) β-CM5 可通過(guò)抑制葡萄糖吸收相關(guān)酶活性，下調(diào)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)載體 mRNA 的表達(dá)，從而抑制腸道葡萄糖吸收，提示 β-CM5 可能具有降糖作用。

1.2 其他營(yíng)養(yǎng)成分

隆紅艷等[9]將外翻腸囊(5～7cm)置于溫育管中，分別向溫育管中加入兒寶顆粒劑和甘草鋅，測(cè)定腸囊中葡萄糖、VitB6、酪氨酸含量。結(jié)果表明兒寶顆粒劑能明顯提高離體家兔小腸中葡萄糖含量(P<0.001～0.01)，且其含量顯著高于甘草鋅(P<0.01)；此外，其還能明顯提高離體家兔小腸中VitB6和酪氨酸含量(P<0.01～0.05)。Henry[10]對(duì)核黃素的吸收機(jī)理進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)核黃素可通過(guò)主動(dòng)吸收機(jī)制從黏膜液進(jìn)入漿膜液。Blair等[11]試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，葉酸的吸收存在飽和機(jī)制。

2 小腸藥物吸收研究進(jìn)展

2.1 快速吸收成分群

譚琴等[12]采用大鼠腸外翻模型，收集3個(gè)濃度車(chē)前子提取物給藥后不同時(shí)間的腸囊液樣品，采用 HPLC進(jìn)行檢測(cè)分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)車(chē)前子中6種成分均可進(jìn)入腸囊，在90min后能全部被檢測(cè)到，腸囊對(duì)藥物成分吸收具有選擇性，與空腸相比，回腸可更多更快地給出吸收成分信息。

龔慕辛等[13]采用大鼠外翻腸囊模型，收集3種濃度吳茱萸湯給藥后不同時(shí)間的腸囊液樣品，采用 HPLC檢測(cè)樣品中的有效成分，發(fā)現(xiàn)高濃度湯中吳茱萸堿在空腸和回腸段中未被檢出，中濃度僅在空腸150min后被檢出，而低濃度在60min后的時(shí)間點(diǎn)均可被檢出。不同濃度吳茱萸湯吸收趨于穩(wěn)定后的成分比例與原湯中各成分比例有所不同，表明腸道對(duì)各成分的吸收具有選擇性。與回腸相比，空腸可更多更快地給出吸收成分信息。

2.2 不同物質(zhì)吸收比較

張琪等[14]采用外翻腸囊法制備離體小腸吸收模型，采用 HPLC測(cè)定小腸吸收的黃芩苷含量。結(jié)果發(fā)現(xiàn)黃芩苷及黃芩苷磷脂復(fù)合物在 120min 內(nèi)透過(guò)腸壁的黃芩苷含量均隨時(shí)間的延長(zhǎng)而增多，且黃芩苷在小腸內(nèi)的吸收顯著高于黃芩苷磷脂復(fù)合物(P<0.05 )。

2.3 藥物吸收動(dòng)力學(xué)特點(diǎn)研究

陳曉鵬等[15]應(yīng)用大鼠腸外翻模型，采用 HPLC測(cè)定有效成分含量，計(jì)算養(yǎng)血清腦顆粒中芍藥苷和阿魏酸的吸收參數(shù)，發(fā)現(xiàn)養(yǎng)血清腦顆粒中芍藥苷和阿魏酸在各腸段均為線性吸收，相關(guān)系數(shù)的平方均達(dá)到0.9 以上，符合零級(jí)吸收速率。

王紅等[16]應(yīng)用大鼠外翻腸囊模型，采用反相離子對(duì)色譜法測(cè)定不同濃度溴吡斯的明在各腸段的吸收量，計(jì)算吸收速率常數(shù)( Ka )和表觀滲透系數(shù)( Papp )，并考察 P-糖蛋白抑制劑(環(huán)孢素和維拉帕米)對(duì)藥物吸收的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)溴吡斯的明在十二指腸內(nèi)有較好的吸收，在空腸和回腸有一定吸收，在結(jié)腸中吸收較少。

2.4 藥物作用機(jī)制研究

崔志清等[17]采用翻轉(zhuǎn)小鼠離體小腸囊的方法，觀察炙甘草和甘草酸對(duì)葡萄糖-鈉轉(zhuǎn)運(yùn)電位的影響，借以探討炙甘草和甘草酸的作用機(jī)制是否與糖-鈉轉(zhuǎn)運(yùn)電位密切相關(guān)Na+-K+-ATP酶相關(guān)，進(jìn)一步了解炙甘草和甘草酸抗心律失常的機(jī)理。

2.5 藥物腸透膜能力比較

劉曉穎等[18]利用外翻腸囊法制備大鼠腸吸收離體模型，測(cè)定西酞普蘭、布洛芬、酮洛芬、氯霉素、鹽酸地爾硫5種藥物的累積吸收率，并與該5種藥物經(jīng)脂質(zhì)體毛細(xì)管電泳( LCE )法測(cè)得的脂水分配系數(shù)(logP)排序結(jié)果進(jìn)行比較。結(jié)果發(fā)現(xiàn)這5種藥物在大鼠小腸壁中均有不同程度的吸收，累積吸收率由高至低依次為西酞普蘭>鹽酸地爾硫>布洛芬>酮洛芬>氯霉素，與 LCE 法測(cè)定結(jié)果一致。由此可知，外翻腸囊法可用于評(píng)價(jià)和比較多種藥物的腸透膜能力。

2.6 生物利用率評(píng)鑒

譚玨[19]通過(guò)體外構(gòu)建肉仔雞外翻回腸腸囊模型，研究不同補(bǔ)鋅制劑在腸囊中的吸收效果。結(jié)果表明，外翻腸囊法在微量元素保健品生物利用率評(píng)價(jià)方面是一種行之有效的評(píng)價(jià)方法。

2.7 研究藥物吸收特性

張英豐等[20]采用離體外翻腸囊模型研究穿心蓮內(nèi)酯在不同腸段、不同濃度下的吸收特性，采用 HPLC-UVD 測(cè)定樣品濃度，計(jì)算吸收速率常數(shù)( Ka )。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，隨著藥液中穿心蓮內(nèi)酯質(zhì)量濃度的上升，腸吸收速率常數(shù)呈線性增加，且各個(gè)腸段的吸收速率均無(wú)顯著性差異。由此可知，穿心蓮內(nèi)酯在小腸內(nèi)不存在特殊的“吸收窗”，在小腸中均為被動(dòng)擴(kuò)散吸收。

王偉等[21]應(yīng)用大鼠腸外翻模型，采用HPLC 檢測(cè)延胡索提取物中的延胡索甲素( CDL )和延胡索乙素( THP )含量，計(jì)算各成分的吸收參數(shù)，發(fā)現(xiàn)不同濃度延胡索提取物中 CDL 和 THP 在各腸段均為線性吸收，R2均大于 0.95，符合零級(jí)吸收特定。CDL 和 THP 的吸收速率常數(shù)( Ka )均隨延胡索提取物給藥劑量的增加而增加，表明其為被動(dòng)吸收。

2.8 藥物新劑型研究

王梅等[22]采用新型前體脂質(zhì)體制備方法制備齊墩果酸前體脂質(zhì)體，采用大鼠離體外翻腸囊法、高效液相色譜法測(cè)定齊墩果酸前體脂質(zhì)體在大鼠小腸中的吸收情況，以同法考察齊墩果酸溶液吸收情況作為對(duì)照。結(jié)果發(fā)現(xiàn)齊墩果酸前體脂質(zhì)體給藥后大鼠漿膜側(cè)藥物濃度-時(shí)間曲線下面積顯著大于對(duì)照組(P<0.01)。由此可知，齊墩果酸前體脂質(zhì)體可增加齊墩果酸在大鼠小腸中的吸收，初步表明齊墩果酸前體脂質(zhì)體這一劑型的可行性。

3 結(jié)語(yǔ)

綜上所述，外翻腸囊法是一種簡(jiǎn)便有效的研究腸吸收的離體試驗(yàn)方法，能較客觀地反映藥物在腸內(nèi)的透膜吸收情況，常用于藥物吸收能力、部位及機(jī)制的考察。但由于體內(nèi)外條件有較大差異，如體內(nèi)腸道存在的蠕動(dòng)作用、活體腸道內(nèi)豐富的血液循環(huán)及消化道黏膜內(nèi)的代謝和細(xì)菌等因素都是體外試驗(yàn)無(wú)法完全模擬的，同時(shí)在操作過(guò)程中腸道黏膜或多或少會(huì)受到損傷，故實(shí)驗(yàn)結(jié)果與真正的生理結(jié)論之間存在一定誤差，仍需尋找更適于模擬腸道內(nèi)吸收環(huán)境的體外檢測(cè)方法。

[1] 董紅林,蔡軍偉,楊晶.研究小腸吸收的常用方法[J].醫(yī)學(xué)研究通訊,1999,28(12):28-29.

[2] CHAPDELAINE P,TREMBLAY R,R DUB J Y. P-Nitrophenol- alpha- glucopyramoside as substrate formeasurement of maltase activity in human semen[J]. Clin Chem,1978,24(2):208.

[3] 徐運(yùn)杰,方熱軍.外翻腸囊法在養(yǎng)分吸收機(jī)制中的研究進(jìn)展[J].飼料博覽,2009,22(1):5-8.

[4] 徐運(yùn)杰,方熱軍.外翻腸囊法的應(yīng)用研究[J].飼料研究,2009,32(2):9-12.

[5] 宋曉丹,任歡歡,印虹,等.β-酪啡肽-7對(duì)大鼠離體小腸葡萄糖吸收的抑制效應(yīng)[J].營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào), 2010,32(2): 117-120,125.

[6] 孟愛(ài)國(guó),劉春艷,馬紅翠.RadicamineB體外抑制小腸葡萄糖的吸收作用[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2011,17(16): 217-220.

[7] 高秀娟,馬會(huì)霞,姚榮妹,等.蕎精補(bǔ)腎膠囊對(duì)小腸葡萄糖吸收的體外抑制作用[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2012,18(9):214-216.

[8] 高升,范英蘭,唐歡宇,等.β-CM5對(duì)離體大鼠小腸葡萄糖吸收的影響[J]. 畜牧與獸醫(yī),2012,44(10): 4-8.

[9] 隆紅艷,朱荃,汪受傳,等.兒寶顆粒劑對(duì)離體家兔小腸吸收功能[J]．南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版,2000,16(4):219-210.

[10] HENRY M. Uptake of riboflavin by rat intestinal mucosa in vitro[J]. Journal of Nutrition, 1990,120(6): 588-593.

[11] BLAIR J A, JOHNSON I T, MATTY A J. Absorption of folic acid by everted segments of rat jejunum [J]. The Journal of Physiology,1974(236):653-661.

[12] 譚琴,朱晶晶,王維皓,等.腸外翻技術(shù)快速發(fā)現(xiàn)車(chē)前子吸收成分群的研究[J].中國(guó)中藥雜志,2011,36(2):150-153.

[13] 龔慕辛,王雅璕,宋亞芳,等.外翻腸囊法快速發(fā)現(xiàn)吳茱萸湯吸收成分群的研究[J].中國(guó)中藥雜志,2010,35(11):1399-1403.

[14] 張琪,陳忻,張楠,等.外翻腸囊法比較黃芩苷磷脂復(fù)合物與黃芩苷在大鼠小腸的吸收[J]. 中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué),2011,28(6): 501-504.

[15] 陳曉鵬,李昂,褚揚(yáng),等.養(yǎng)血清腦顆粒中有效成分的腸外翻吸收研究[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2013,19(4):159-162.

[16] 王紅,譚群友,張梨,等.溴吡斯的明在大鼠離體腸的吸收動(dòng)力學(xué)[J]. 中國(guó)新藥與臨床雜志, 2012,31(6): 317-321.

[17] 崔志清,郭世鐸,張惠茹,等.炙甘草和甘草酸對(duì)翻轉(zhuǎn)小鼠離體小腸糖-鈉轉(zhuǎn)運(yùn)電位的影響[J].中草藥,1995,26(12): 643-644,673.

[19] 劉曉穎,蘇湲淇,甘曉玲,等.外翻腸囊法評(píng)價(jià)及比較5種藥物大鼠腸透膜能力[J].中國(guó)藥房,2009,20(22):1704-1706.

[18] 譚玨.基于外翻腸囊法的補(bǔ)鋅制劑生物利用率評(píng)價(jià)研究[D].杭州:浙江工商大學(xué),2013.

[21] 張英豐,李玉潔,楊慶,等.采用離體外翻腸囊模型進(jìn)行穿心蓮內(nèi)酯的腸吸收特性研究[J]. 中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2010,26(9):107-110.

[22] 王偉,楊偉鵬,梁日欣,等.延胡索提取物在大鼠腸外翻實(shí)驗(yàn)中的吸收研究[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2011,27(6):121-125.

[23] 王梅,高曉黎.齊墩果酸新型前體脂質(zhì)體大鼠小腸吸收實(shí)驗(yàn)研究[J].新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2007,30(2):122-124.

(責(zé)任編輯：尹晨茹)

Research Progress of Nutrient and Medicine Absorption by Gut Sacs

Zhang Ying1,Cao Liangshun1,Zhang Saihang1,Shi Yajing2,Shi Xuejing1,Han Shuying*

(1.School of Pharmacy ,Hebei United University,Tangshan 063000,China;2.College of Basic Medicine ,Hebei United University, Tangshan 06300,China)

Eversion gut sac method is in vitro measuring method developed on the basis of cultivation of small bowel loop and brush border membrane capsule technologyOrganize gut SAC application related information in recent years, introducing gut SAC applications in drug and nutrient absorption, and provide the basis for further application of gut SAC.

Gut Sacs;Drug;Nutrient;Absorption

2014-11-15

教育部大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目(201210081007)；唐山市“十二五”科技重點(diǎn)項(xiàng)目(10130203-3)；河北聯(lián)合大學(xué)大學(xué)生創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)計(jì)劃項(xiàng)目(X2014132)

張英(1994-)，女，河北聯(lián)合大學(xué)在讀生，研究方向?yàn)橹兴幩幚怼?/p>

韓淑英(1959-)，女，碩士，河北聯(lián)合大學(xué)教授，碩士生導(dǎo)師，研究方向?yàn)橹兴幏乐涡难芗膊　-mail:shuyinghan59@126.com

S816.11

A

1673-2197(2015)02-0047-02

10.11954/ytctyy.201502016