卓 燊,喬 雪,秦海洸*

(1.廣西科技大學(xué) 醫(yī)學(xué)院，廣西 柳州545005；2.廣西中醫(yī)藥大學(xué)，廣西 南寧530001)

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蔓性千斤拔免疫增強(qiáng)活性部位化學(xué)成分研究

卓 燊1,喬 雪2,秦海洸1*

(1.廣西科技大學(xué) 醫(yī)學(xué)院，廣西 柳州545005；2.廣西中醫(yī)藥大學(xué)，廣西 南寧530001)

目的：研究蔓性千斤拔免疫增強(qiáng)活性部位的化學(xué)成分。方法：采用硅膠柱層析、反相ODS柱色譜、高效液相色譜法等方法對(duì)化合物進(jìn)行分離、純化，使用核磁共振等光譜手段確定化合物結(jié)構(gòu)。結(jié)果：分離得到6個(gè)已知化合物，分別為染料木素(1)、5,7,3',4'-四羥基異黃酮(2)、8-(1,1-二甲基烯丙基)染料木黃酮(3)、鷹嘴豆芽素A(4)、蔓性千斤拔素D(5)、胡蘿卜苷(6)。結(jié)論：蔓性千斤拔的免疫增強(qiáng)活性部位為乙酸乙酯萃取部位，化合物6為首次從該植物中分離得到。

蔓性千斤拔；活性部位；免疫增強(qiáng)；化學(xué)成分

千斤拔為豆科千斤拔屬多年生草本植物蔓性千斤拔(FlemingiaphilippinensisMerr.et Rolfe )的干燥根，屬于瑤族常用藥之一?，F(xiàn)代藥理研究表明，千斤拔具有抗炎、鎮(zhèn)痛、保護(hù)周?chē)窠?jīng)損傷等作用，對(duì)于其免疫增強(qiáng)作用少有報(bào)道[1]。因此，本課題組通過(guò)NK細(xì)胞活性測(cè)定、ConA誘導(dǎo)的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率實(shí)驗(yàn)和小鼠碳廓清實(shí)驗(yàn)法確定了蔓性千斤拔的免疫增強(qiáng)活性部位為乙酸乙酯萃取部位，之后對(duì)此部位進(jìn)行化學(xué)成分研究，從中分離鑒定出6個(gè)化合物。其中，化合物6為首次從該植物中分離得到。

1 儀器與材料

Bruker ARX-300/600MHz超導(dǎo)核磁共振儀(Bruker公司)；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)；Sephadex LH-20(Pharmacia公司)；ODS 硅膠(Merck公司)；薄層色譜用硅膠GF254、柱色譜硅膠(青島海洋化工廠)；試劑均為分析純。千斤拔藥材購(gòu)自云南省玉溪市，經(jīng)鑒定為蔓性千斤拔。

2 千斤拔的提取與分離

取蔓性千斤拔藥材5kg，適當(dāng)粉碎。用10倍量蒸餾水浸泡過(guò)夜，加熱回流提取3次，每次0.5h，過(guò)濾后合并提取液。將提取液進(jìn)行減壓濃縮至適量，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯萃取，分別減壓濃縮成浸膏，晾干，稱(chēng)重，備用。

取乙酸乙酯萃取物130g，使用開(kāi)放硅膠柱色譜法分離，用二氯甲烷-甲醇進(jìn)行梯度洗脫，合并相同流分。用開(kāi)放ODS柱色譜、凝膠柱色譜等反復(fù)分離純化，得到化合物1-6。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1:無(wú)色針晶(丙酮)，mp 297～299℃。1H-NMR(600MHz，C3D6O) δ: 8.18(1H,s,H-2),6.39(1H,d,J=2.1Hz,H-6),6.25(1H,d,J=2.1Hz,H-8),7.46(2H,d,J=8.3Hz,H-2',6'),6.92(2H,d,J=8.3Hz,H-3',5');13C-NMR(150MHz,C3D6O) δ:155.2(C-2),124.8(C-3),180.1(C-4),170.5(C-5),104.9(C-6),167.8(C-7),97.5(C-8),160.1(C-9),108.2(C-10),124.2(C-1'),133.5(C-2',6'),116.5(C-3',5'),161.3(C-4')。數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[2]報(bào)道基本一致,因此確定為染料木素。

化合物2:黃色針晶(甲醇)，mp 268～ 270 ℃。1H-NMR (600MHz，CDCl3)δ：8.20(1H,s,H-2),6.43(1H,d,J=2.2 H z,H-6),6.24(1H,d,J =2.2 Hz,H-8),7.11(1H,d,J =8.2,H-5'),7.62(1H,d,J =8.2Hz,H-6');13C-NMR(150MHz，DMSO-d6) δ:158.2(C-2),124.1(C-3),184.2(C-4),165.4(C-5),103.1(C-6),167.8(C-7),97.1(C-8),164.3(C-9),108.8(C-10),113.4(C-1'),107.5(C-2'),160.3(C-3'),159.8 (C-4'),110.7(C-5'),135.5(C-6')。數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[3]報(bào)道基本一致 ，故鑒定為5,7,3',4'-四羥基異黃酮。

化合物3:黃色塊晶(甲醇)。1H-NMR (600MHz，CDCl3) δ：7.85 (1H,s,H-2),6.27 (1H,s,H-6),7.34(2H,d,J=8.5 Hz,H-2',6'),6.89 (2H,d,J=8.5 Hz,H-3',5');13C-NMR(CDCl3,120MHz): 150.2(C-2),122.5(C-3),180.4(C-4),160.1 (C-5),101.2(C-6),161.1(C-7),108.9 (C-8),155.6 (C-9),106.3(C-10),122.1 (C-1'),129.5 (C-2',6'),115.2 (C-3',5'),155.4 (C-4'),40.3 (C-1''),147.9 (C-2''),112.8(C-3''),26.9 (C-4'',2)。與文獻(xiàn)[4]報(bào)道數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定該化合物為8-(1,1-二甲基烯丙基)染料木黃酮。

化合物4:黃色針晶(甲醇)。1H-NMR (600MHz，DMSO-d6) δ:3.62 (3H,s,4'-OCH3),6.17 (1H,d,J=1.5Hz,H-6),6.28 (1H,d,J=1.5Hz,H-8);13C-NMR (120MHz,DMSO-d6): 152.8 (C-2),120.5 (C-3),178.9 (C-4),161.2 (C-5),97.8 (C-6),163.4 (C-7),93.1 (C-8),156.2 (C-9),103.2 (C-10),121.7 (C-1'),128.8 (C-2'),112.1 (C-3'),158.2 (C-4'),113.1 (C-5'),129.6 (C-6'),55.5 (-OCH3)。與文獻(xiàn)[5]報(bào)道的數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定為鷹嘴豆芽素A。

化合物5:白色粉末(甲醇)。1H-NMR (600MHz，CDCl3) δ： 2.97(2H,m,H-3),6.51(2H,s,H-3',5'),1.79(3H,s,4''-CH3),1.83(3H,s,5''-CH3);13C-NMR (CDCl3,120MHz):78.8 (C-2),43.5 (C-3),197.8 (C-4),161.2 (C-5),108.4 (C-6),158.5 (C-7),108.1 (C-8),163.2 (C-9),103.4 (C-10),117.3 (C-1'),156.6 (C-2'),104.9 (C-3'),158.3 (C-4'),109.2 (C-5'),128.6 (C-6'),22.8 (C-1''),123.1 (C-2''),134.9 (C-3''),19.4 (C-4''),27.3 (C-5''),22.6 (C-1'''),123.4 (C-2'''),136.3 (C-3'''),19.2 (C-4'''),26.5 (C-5''')。數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6]報(bào)道基本一致，故鑒定為蔓性千斤拔素D。

化合物6:白色粉末(甲醇)。1H-NMR (600MHz，CD3OD) δ：5.48(1H,d,J =5.3,H-6),4.51(H,d,J =7.2Hz,H-1'),3.32(2H,q,J =5.8,H-2',3'),3.45( 1H,q,J= 4.2Hz,H -4'),3.24(1H,m,H-5' ) ;13C-NMR (120MHz,CD3OD): 36.7(C-2),31.5(C-3),41.5(C-4),139.1(C-5),121.3(C-6),31.2(C-7),31.2(C-8),49.9(C-9),35.7(C-10),20.1(C-11),37.9(C-12),42.0(C-13),56.8(C-14),22.6(C-15),27.7(C-16),55.1(C-17),10.2(C-18),17.9(C-19),35.4(C-20),18.3(C-21),33.2(C-22),25.4(C-23),44.9 (C-24),28.6(C-25),18.8(C-26),18.5(C-27),21.9(C-28),11.7(C-29),100.4(C-1'),73.2(C-2'),75.5(C-3'),68.9(C-4'),76.3(C-5'),61.6(C-6') 。與文獻(xiàn)[7]數(shù)據(jù)基本一致，故鑒定為胡蘿卜苷。

[1] 張麗霞,彭建明,馬潔.千斤拔研究進(jìn)展[J].中藥材,2007,30(7):887-890.

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[3] 張雪,宋啟示.銹毛千斤拔根的化學(xué)成分研究[J].中草藥,2009,40(6):865-868.

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[6] 李華,李鳳嵐,馬小軍.千斤拔異戊烯基黃酮研究[C].中國(guó)藥學(xué)會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)暨第八屆中國(guó)藥師周論文集,2008.

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(責(zé)任編輯：宋勇剛)

2015-06-12

廣西壯族自治區(qū)衛(wèi)生廳自籌經(jīng)費(fèi)科研課題(Z2012602)； 廣西壯族自治區(qū)教育廳一般資助項(xiàng)目(2013YB289)；廣西植物功能物質(zhì)研究與利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室主任基金項(xiàng)目(FPRU2014-8)；廣西科技大學(xué)科學(xué)基金項(xiàng)目合同(?？漆t(yī)1307201)

卓燊(1975-)，女，廣西科技大學(xué)主管中藥師，研究方向?yàn)橹兴幩幮С煞帧?/p>

秦海洸(1970-)，男，廣西科技大學(xué)教授，研究方向?yàn)橹嗅t(yī)藥治療皮膚病、性病。

R284.1

A

1673-2197(2015)21-0026-01

10.11954/ytctyy.201521011