李力敏,辛素芳，劉 佩，王 艷，馮 卿，曲 凡

(1.河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院，河北 石家莊 050035；2.河北省胸科醫(yī)院，河北 石家莊 050041；3.石家莊醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校，河北 石家莊 050500)

臍血tau蛋白、激活素A聯(lián)合檢測對新生兒腦損傷的診斷價(jià)值

李力敏1,辛素芳1，劉 佩1，王 艷2，馮 卿3，曲 凡1

(1.河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院，河北 石家莊 050035；2.河北省胸科醫(yī)院，河北 石家莊 050041；3.石家莊醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，河北 石家莊 050500)

目的 探討臍血tau蛋白、激活素A聯(lián)合檢測在新生兒腦損傷中的診斷價(jià)值。方法 將60例患絨毛膜羊膜炎的母親所生新生兒納入實(shí)驗(yàn)組，并根據(jù)其出生后神經(jīng)系統(tǒng)表現(xiàn)、腦影像學(xué)檢查分為腦損傷組26例和非腦損傷組34例；同時選取20例健康母親所生新生兒作為對照組。采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測3組新生兒臍血tau蛋白、激活素A的水平。結(jié)果腦損傷組臍血tau蛋白、激活素A水平明顯高于非腦損傷組和對照組(P均<0.05)；且隨著腦損傷程度的加重，tau蛋白、激活素A水平進(jìn)一步增高。結(jié)論 臍血tau蛋白、激活素A對具有宮內(nèi)感染風(fēng)險(xiǎn)的新生兒腦損傷早期診斷有一定意義。

臍血；tau蛋白；激活素A；新生兒腦損傷

圍生期感染是導(dǎo)致腦癱發(fā)生的主要危險(xiǎn)因素之一,母親患絨毛膜羊膜炎可使新生兒以后發(fā)展為腦癱的危險(xiǎn)性增加4倍[1]。而對宮內(nèi)感染致新生兒腦損傷的早期預(yù)測及正確處理，可降低其病死率，提高其遠(yuǎn)期生活質(zhì)量。目前新生兒腦損傷的診斷和預(yù)后評估主要的依據(jù)是神經(jīng)系統(tǒng)臨床表現(xiàn)、影像學(xué)、電生理檢查等，這些手段存在著診斷滯后性，使得許多腦損傷患兒錯過最佳治療的時間窗，遺留不同程度的神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥如腦性癱瘓、精神發(fā)育遲滯等。tau蛋白是一種反映神經(jīng)細(xì)胞損傷程度的標(biāo)志物[2]，其與顱腦損傷關(guān)系的研究逐年增多，但在新生兒腦損傷中的研究報(bào)道尚少。激活素A具有抗炎活性，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎癥過程中廣泛表達(dá),能有效抑制腦損傷后因缺血再灌注導(dǎo)致的過度炎癥反應(yīng)[3]。tau蛋白與激活素A聯(lián)合檢測炎癥反應(yīng)對新生兒腦損傷的影響目前尚少見報(bào)道。本研究通過測定具有宮內(nèi)感染風(fēng)險(xiǎn)的新生兒臍血tau蛋白、激活素A的表達(dá)，并結(jié)合其出生后神經(jīng)系統(tǒng)臨床表現(xiàn)、腦影像學(xué)檢查及新生兒神經(jīng)行為(NBNA)評分，探討臍血tau蛋白、激活素A的表達(dá)與新生兒腦損傷的關(guān)系，旨在為早期干預(yù)提供有力的依據(jù)。

1 臨床資料

1.1 一般資料 選擇2012年8月—2013年12月在河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院出生母親患絨毛膜羊膜炎的新生兒60例作為實(shí)驗(yàn)組，均符合絨毛膜羊膜炎的診斷[4]，至少出現(xiàn)下述一項(xiàng)表現(xiàn)：母親心率≥100次/min，胎兒心率≥160次/min，母親發(fā)熱≥38℃，子宮激惹，羊水惡臭，母親白細(xì)胞計(jì)數(shù)≥15×109L-1，中性粒細(xì)胞≥90%。排除母親有妊娠期并發(fā)癥如妊高征子癇前期、妊娠期糖尿病、妊娠期合并心臟病、胎盤早剝、妊娠期合并甲狀腺功能減低癥等患者，圍生期窒息缺氧的新生兒，有遺傳代謝性疾病、神經(jīng)系統(tǒng)畸形及其他系統(tǒng)嚴(yán)重畸形者。對所有入選的早產(chǎn)兒在出生后48～72h內(nèi)進(jìn)行腦B超檢查，B超發(fā)現(xiàn)有彌漫性腦水腫、顱內(nèi)出血、缺氧缺血灶者診斷為早產(chǎn)兒腦損傷。對于早期懷疑有彌散性腦室周圍白質(zhì)軟化，腦B超檢查陰性的部分病例，在新生兒早期行腦MRI檢查協(xié)助診斷，發(fā)生基質(zhì)-腦室內(nèi)出血、 腦室周圍出血及梗死及腦室周圍白質(zhì)軟化，其他的部位損傷如蛛網(wǎng)膜下腔、小腦出血，基底核及橋腦的變性或壞死等改變之一者進(jìn)入腦損傷組。足月兒生后72h行NBNA評分，NBNA≤35分[4]為腦損傷，其中NBNA評分>32～35分為輕度腦損傷，NBNA評分28～32分為重度腦損傷。實(shí)驗(yàn)組新生兒根據(jù)上述標(biāo)準(zhǔn)分為2組：腦損傷組26例，男15例，女11例； 足月兒8例，早產(chǎn)兒18例；早產(chǎn)兒胎齡(33.23±3.77)周；出生體質(zhì)量(1.8±0.65)kg；剖宮產(chǎn)10例，自然分娩16例。輕度腦損傷17例，NBNA評分(31.5±3.5)分；重度腦損傷9例，NBNA評分(28.3±3.0)分。非腦損傷組34例,男19例，女15例；足月兒21例，早產(chǎn)兒13例；胎齡(33.46±1.86)周；出生體質(zhì)量(2.02±0.43)kg；剖宮產(chǎn)10例，自然分娩24例。隨機(jī)收集同期健康母親所生新生兒20例作為對照組,男11例，女9例；足月兒12例，早產(chǎn)兒8例；早產(chǎn)兒胎齡(33.31±2.91)周；出生體質(zhì)量(2.0±0.44)kg；剖宮產(chǎn)7例，自然分娩13例，矯正胎齡40周時行NBNA 評分均>35分。3組新生兒生產(chǎn)方式、性別、胎齡、出生體質(zhì)量比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)，具有可比性。

1.2 方法 在新生兒娩出且第1聲哭聲前用注射器抽取臍動脈血2mL裝入不加抗凝劑的試管中，室溫放置，0.5h內(nèi)放入離心機(jī)4000r/min離心15min，留取上清液，置于-80℃冰箱保存待測。血清tau蛋白及激活素A水平檢測采用酶聯(lián)免疫分析(ELISA)法，試劑盒由上海原生物工程研究所提供，操作步驟嚴(yán)格按說明書由專人完成。

2 結(jié) 果

2.1 3組臍血中tau蛋白及激活素A水平比較 腦損傷組臍血中tau蛋白及激活素A水平明顯高于非腦損傷組及對照組(P均<0.05)，非腦損傷組與對照組組間比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)。見表1。

表1 3組臍血中tau蛋白及激活素A水平比較

注：①與腦損傷組比較，P<0.05。

2.2 腦損傷組不同損傷程度患兒臍血tau蛋白、激活素A水平比較 重度腦損傷患兒臍血tau蛋白及激活素A水平高于輕度腦損傷患兒(P均<0.05)。見表2。

表2 腦損傷組不同損傷程度患兒臍血tau蛋白及激活素A水平比較

注：①與輕度腦損傷比較，P<0.05。

2.3 腦損傷組臍血tau蛋白、激活素A水平及NBNA評分相關(guān)性分析 經(jīng)Pearson直線相關(guān)分析，腦損傷組新生兒臍血tau蛋白與激活素A水平呈顯著正相關(guān)(r=0.520，P<0.05)，而新生兒臍血tau蛋白與激活素A水平均與NBNA評分呈負(fù)相關(guān)(r=-0.696，-0.641，P<0.05)。

3 討 論

新生兒腦損傷的發(fā)生受圍生期多種因素的影響, 其中宮內(nèi)感染所導(dǎo)致的新生兒腦損傷是目前研究的熱點(diǎn)之一。多種動物實(shí)驗(yàn)研究證明，非特異性炎癥甚至在無病原體存在時，細(xì)胞因子的釋放也可能導(dǎo)致胎兒腦損傷的發(fā)生[5]。母體宮內(nèi)感染所導(dǎo)致的胎兒炎癥反應(yīng)綜合征(FIRS)是腦室內(nèi)出血、腦室周圍白質(zhì)軟化的重要因素，可引起新生兒腦損傷如腦癱的發(fā)生。Romero等[6]研究結(jié)果顯示，羊水中炎癥細(xì)胞因子(IL-6和IL-1β)水平的增高與早產(chǎn)兒發(fā)生腦白質(zhì)損傷存在著密切關(guān)系，也與遠(yuǎn)期腦癱的發(fā)生存在著較高的相關(guān)性。

tau蛋白是腦內(nèi)神經(jīng)元細(xì)胞支架蛋白之一，主要分布在大腦的額葉、顳葉、海馬和內(nèi)嗅區(qū)神經(jīng)元以及外周神經(jīng)的軸突內(nèi)。其正常的功能是維持微管的穩(wěn)定性，也是神經(jīng)元極性形成和軸突生長發(fā)育不可缺少的因素之一。tau蛋白在神經(jīng)元變性疾病的腦脊液中含量明顯增多，可作為一種神經(jīng)元和軸突損傷的潛在標(biāo)志物[7]。tau蛋白還是一種含磷的糖蛋白，神經(jīng)元的可塑性與其磷酸化程度有關(guān)，許多因素可引發(fā)tau蛋白過度磷酸化，如Ab、thrombin、LPA、TNF-α、IL-1等可以通過多種信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路改變激酶或磷酸酯酶的活性。tau蛋白的過度磷酸化降低tau蛋白與微管的親和力，使游離tau蛋白濃度升高，為進(jìn)一步聚集形成螺旋絲提供了條件，導(dǎo)致tau蛋白從微管上解離，引起微管功能紊亂，進(jìn)而導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞死亡[7]。臨床研究證明，血清tau蛋白濃度與腦梗死面積及腦缺血患者的神經(jīng)功能缺損程度呈顯著正相關(guān)[8]。趙子艾等[9]研究發(fā)現(xiàn)，在創(chuàng)傷性腦損傷后6h內(nèi)，血漿中tau蛋白及其降解產(chǎn)物的含量與傷情的嚴(yán)重程度有關(guān)。腦損傷后，tau蛋白從神經(jīng)細(xì)胞釋放到腦脊液中，再通過血腦屏障滲漏到外周血液中，因此，外周血及腦脊液中tau蛋白濃度可反映腦損傷程度[10]。本研究結(jié)果顯示，腦損傷組臍血tau蛋白水平較非腦損傷組及對照組明顯升高，推測隨著宮內(nèi)感染程度加重，腦損傷程度進(jìn)一步加重，釋放入血的tau蛋白增加，表明腦損傷程度與tau蛋白水平呈正相關(guān)。tau蛋白含量的增高提示神經(jīng)細(xì)胞的繼發(fā)損害，進(jìn)一步證明tau蛋白是一種反映神經(jīng)細(xì)胞損傷程度的指示物。

激活素A是一種多功能細(xì)胞因子，具有抗炎活性，在組織損傷及炎癥修復(fù)中具有重要作用。Jones等[11]研究發(fā)現(xiàn)，激活素A在參與全身炎性反應(yīng)的過程中，首先與TNF-a共同被調(diào)控釋放，再進(jìn)一步誘導(dǎo)單核巨噬細(xì)胞分泌卵泡抑素及IL-6，是炎性反應(yīng)啟動階段的關(guān)鍵性的炎性調(diào)節(jié)遞質(zhì)之一。激活素A作為前炎性細(xì)胞因子參與其他炎性遞質(zhì)調(diào)控，具有抑制炎性反應(yīng)及誘發(fā)炎癥效應(yīng)的雙重作用，有利于防止機(jī)體由免疫反應(yīng)過度所造成的損害[12]。有研究資料發(fā)現(xiàn)，由圍生期宮內(nèi)感染所致早產(chǎn)者，孕婦在分娩前，循環(huán)中激活素A水平在其他急性期細(xì)胞因子如TNF-α及ILs出現(xiàn)前即增高，外周血中的激活素A水平亦增加[13]。當(dāng)宮內(nèi)感染發(fā)生后，通過Toll蛋白樣受體病原體經(jīng)多種途徑促進(jìn)激活素A的產(chǎn)生和釋放，激活素A進(jìn)一步促進(jìn)幾種關(guān)鍵性的炎性遞質(zhì)如IL-1β、TNF-α、IL-6等釋放產(chǎn)生，促進(jìn)炎癥反應(yīng)的啟動，IL-1β、TNF-α、IL-6等也反過來促進(jìn)激活素A的分泌，形成了一個正反饋環(huán)[14]。IL-1β、TNF-α、IL-6等細(xì)胞因子對少突膠質(zhì)細(xì)胞前體細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞和成髓少突膠質(zhì)細(xì)胞等有直接損傷作用，可誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞凋亡的發(fā)生，導(dǎo)致遲發(fā)性神經(jīng)細(xì)胞死亡[15]。相關(guān)研究證明，腦損傷患者發(fā)病后血清激活素A水平在短時間內(nèi)升高，腦損傷程度愈重，其水平愈高，可用于評價(jià)腦損傷患者的嚴(yán)重程度及預(yù)后[3]。本研究發(fā)現(xiàn)臨床患絨毛膜羊膜炎的母親所生新生兒臍血激活素A水平較對照組明顯增高，且腦損傷組臍血激活素A水平較非腦損傷組顯著增高，且與病情呈正相關(guān)。提示臍血激活素A參與炎癥反應(yīng)過程，炎癥反應(yīng)引起FIRS，進(jìn)而引起新生兒腦損傷。說明激活素A可作為一項(xiàng)判斷腦損傷病情的指標(biāo)，對新生兒腦損傷的早期診斷有重要價(jià)值。

綜上所述，激活素A參與炎癥反應(yīng)過程，tau蛋白與神經(jīng)細(xì)胞損傷程度呈正相關(guān)，二者聯(lián)合檢測可更為準(zhǔn)確地預(yù)測宮內(nèi)感染致腦損傷的發(fā)生,從而指導(dǎo)臨床對新生兒腦損傷早期發(fā)現(xiàn)、早期干預(yù)、早期治療，降低新生兒神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥的發(fā)生率，提高人口素質(zhì)。且該方法對新生兒無創(chuàng)，檢測方便，值得研究探討。

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Diagnostic value of determination of tau protein and activin A in cord blood for neonatal brain injury

LI Limin1, XIN Sufang1, LIU Pei1, WANG Yan2, FENG Qing3，QYU Fan1

(1.The Fourth Hospital of Hebei University, Shijiazhuang 050035, Hebei, China; 2.Chest Hospital of Hebei Province, Shijiazhuang 050041, Hebei, China; 3.Shijiazhuang Medical College, Shijiazhuang 050500, Hebei, China)

Objective It is to explore the diagnostic value of determination of tau protein and activin A in cord blood for neonatal brain injury.Methods The neonates mothered by 60women with amniotic membrane inflammation were selected as experimental group, and divided into brain injury group (26cases) and non-brain injury group according to their performance of nervous system and brain imaging after birth.At the same time, the neonates of 20cases of healthy mothers were selected as healthy control group.ELISA was used to detect the levels of tau protein and activin A in cord blood.Results The levels of tau protein, activin A in cord blood in brain injury group were obviously higher than that in non-bran injury group and control group (P<0.05); Along with the degree of brain injury aggravated the tau protein and activin A levels increased further.Conclusion Tau protein, activin A in cord blood has some significance for the early diagnosis of brain injury in the neonates with risk of fetal intrauterine infection.

cord blood; tau protein；activin A；brain injury

李力敏，女，主治醫(yī)師，主要從事兒科臨床工作。

河北省科技廳資助項(xiàng)目(12277742)

10.3969/j.issn.1008-8849.2015.14.003

R0651.15

A

1008-8849(2015)14-1489-03

2014-12-18