李 萍，王海波，牛海玲，趙金榮，李秀娟

(解放軍第260醫(yī)院，河北 石家莊 050041)

子宮內(nèi)膜異位癥患者內(nèi)膜組織中kiss-1及血清和腹腔液中sflt-1、VEGF、MCP-1、RANTES表達(dá)的意義

李 萍，王海波，牛海玲，趙金榮，李秀娟

(解放軍第260醫(yī)院，河北 石家莊 050041)

目的 研究子宮內(nèi)膜異位癥患者內(nèi)膜組織中kiss-1及血清和腹腔液中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子可溶性受體(sflt-1)、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)、單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)、T細(xì)胞表達(dá)和分泌的調(diào)節(jié)性激活因子(RANTES)表達(dá)的意義。方法 選取子宮內(nèi)膜異位癥行腹腔鏡手術(shù)患者256例作為觀(guān)察組，根據(jù)病變部位、大小、粘連程度分為Ⅰ～Ⅱ期組76例，Ⅲ～Ⅳ期組180例。選取同期因卵巢良性腫瘤、卵巢系膜囊腫、宮頸病變等入院治療的患者114例作為對(duì)照組。采用免疫組化法測(cè)定受檢者子宮內(nèi)膜組織標(biāo)本kiss-1的表達(dá)情況，采用ELISA方法測(cè)定受檢者血清和腹腔液中sflt-1、VEGF、MCP-1、RANTES表達(dá)情況。結(jié)果 觀(guān)察組kiss-1陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于對(duì)照組(P<0.05)。Ⅰ～Ⅱ期組kiss-1陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于Ⅲ～Ⅳ期組(P<0.05)。觀(guān)察組血清和腹腔液中sflt-1、VEGF、MCP-1、RANTES表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組(P均<0.05)。Ⅰ～Ⅱ期組血清和腹腔液中sflt-1、VEGF和RANTES表達(dá)水平低于Ⅲ～Ⅳ期組(P<0.05)。結(jié)論kiss-1、sflt-1、VEGF、MCP-1、RANTES水平與子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)展密切相關(guān)，可能參與了其發(fā)病過(guò)程，可以作為子宮內(nèi)膜異位癥的輔助檢測(cè)指標(biāo)。

子宮內(nèi)膜異位癥；kiss-1；血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子可溶性受體；單核細(xì)胞趨化蛋白-1；血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子；T細(xì)胞表達(dá)和分泌的調(diào)節(jié)性激活因子

子宮內(nèi)膜異位癥多發(fā)于生育年齡女性，多表現(xiàn)為痛經(jīng)、持續(xù)性下腹痛，經(jīng)量增多、經(jīng)期延長(zhǎng)及卵巢功能減退和喪失、性交痛和不孕。臨床研究表明，子宮內(nèi)膜異位癥生物標(biāo)志物對(duì)患者的早期診斷、病情預(yù)測(cè)、療效評(píng)估有重要作用[1]。kiss-1表達(dá)減弱可能與子宮內(nèi)膜異位癥的侵襲過(guò)程有關(guān)[2]。研究表明，子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生可能與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)-VEGFR-sVEGFR系統(tǒng)有關(guān)，而血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子可溶性受體(sflt-1)與子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生呈負(fù)相關(guān)[3]。單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)能夠參與機(jī)體的免疫炎癥調(diào)節(jié)，而子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生與患者全身免疫功能異常有關(guān)，研究表明，患者內(nèi)膜組織中MCP-1水平明顯高于正常者，且MCP-1水平在分泌期和增生期也不同[4]。T細(xì)胞表達(dá)和分泌的調(diào)節(jié)性激活因子(RANTES)，能夠參與炎性反應(yīng)并調(diào)控細(xì)胞的生長(zhǎng)分化。本研究進(jìn)一步探討了子宮內(nèi)膜異位癥患者子宮內(nèi)膜組織中kiss-1及血清和腹腔液中sflt-1、VEGF、MCP-1、RANTES表達(dá)的意義，以期為臨床提供更多的參考。

1 臨床資料

1.1 一般資料 選取我院2009年11月—2014年10月收治的子宮內(nèi)膜異位癥行腹腔鏡手術(shù)患者256例作為觀(guān)察組，均符合“子宮內(nèi)膜異位癥的診斷與治療規(guī)范”[5]，且經(jīng)病理證實(shí)，年齡15～46(36±9)歲；月經(jīng)初潮年齡10～16(13±3)歲；月經(jīng)周期24～30(27±4)d；月經(jīng)持續(xù)時(shí)間4～8(7±3)d；孕次0～2(1.0±0.4)次；體質(zhì)量指數(shù)(BMI)(23±4)kg/m2；CA125陽(yáng)性173例(67.6%)；合并子宮肌瘤68例(26.6%)；痛經(jīng)142例(55.5%)，非經(jīng)期下腹痛46例(18.0%)，性交痛8例(3.1%)。觀(guān)察組患者再根據(jù)病變部位、大小、粘連程度分為2組:Ⅰ～Ⅱ期組76例，年齡16～45(35±10)歲；月經(jīng)初潮年齡10～15(12±3)歲；月經(jīng)周期25～29(26±5)d；月經(jīng)持續(xù)時(shí)間5～8(7±3)d；孕次0～2(0.9±0.5)次； BMI(22±4)kg/m2；CA125陽(yáng)性40例(52.6%)；合并子宮肌瘤20例(26.3%)；痛經(jīng)39例(51.3%)，非經(jīng)期下腹痛14例(18.4%)，性交痛2例(2.6%)。Ⅲ～Ⅳ期組180例，年齡15～46(37±9)歲；月經(jīng)初潮年齡10～16(13±4)歲；月經(jīng)周期26～30(27±5)d；月經(jīng)持續(xù)時(shí)間4～8(7±3)d；孕次0～2(1.1±0.4)次； BMI(24±4)kg/m2；CA125陽(yáng)性133例(73.9%)；合并子宮肌瘤48例(26.7%)；痛經(jīng)103例(57.2%)，非經(jīng)期下腹痛32例(17.8%)，性交痛8例(3.3%)。選取同期因卵巢良性腫瘤、卵巢系膜囊腫、宮頸病變等入院治療的患者114例作為對(duì)照組，年齡14～50(37±10)歲；月經(jīng)初潮年齡9～16(12±3)歲；月經(jīng)周期23～31(28±4)d；月經(jīng)持續(xù)時(shí)間4～7(5±2)d；孕次0～2(2.5.±1.0)次；BMI(22±3)kg/m2；CA125陽(yáng)性20例(17.5%)。3組年齡、月經(jīng)初潮年齡、月經(jīng)周期、月經(jīng)持續(xù)時(shí)間、孕次、BMI比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05),均排除惡性腫瘤者,服用性激素、免疫抑制劑或非甾體類(lèi)抗炎藥者,半年內(nèi)有妊娠或哺乳史者,風(fēng)濕、類(lèi)風(fēng)濕或其他免疫系統(tǒng)疾病者。本研究通過(guò)我院臨床試驗(yàn)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 方法

1.2.1 kiss-1檢測(cè) 取子宮內(nèi)膜組織標(biāo)本，包埋、切片備用。采用羊抗人kiss-1metastin多克隆抗體(英國(guó)ABCAM提供)，免疫組化試劑盒(北京瑞達(dá)醫(yī)藥科技有限公司),嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。Kiss染色呈棕黃或棕褐色顆粒，定位于細(xì)胞質(zhì)。根據(jù)染色強(qiáng)度分為4級(jí)：0分為無(wú)染色,1分為淡黃色,2分為中度黃色,3分為棕褐色。根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞所占比例分為3級(jí)：≤10%為1級(jí)，10%～50%為2級(jí)，>50%為3級(jí)。根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞的百分比和染色強(qiáng)度分為4個(gè)等級(jí)：(-)為0～1分,(+)為2～3分,()為4～5分,()為>5分。

1.2.2 血清及腹腔液指標(biāo)檢測(cè) ①血清：抽取患者空腹肘靜脈血5mL，2500r/min離心15min，取上清液置于-70℃冰箱保存待測(cè)。②腹腔液：術(shù)中采用負(fù)壓吸引，取無(wú)血液污染的患者腹腔液5mL，置于無(wú)菌離心管中，2500r/min離心15min，取上清置于-70℃冰箱保存待測(cè)。③操作：sflt-1、VEGF、MCP-1、RANTES均采用ELISA法進(jìn)行測(cè)定(試劑盒均購(gòu)自上海信然生物技術(shù)有限公司)，使用前將所有試劑充分混勻。加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)樣品50μL于反應(yīng)孔內(nèi),然后立即加入50μL的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，振蕩混勻，37℃溫育1h,洗板3次。加入親和鏈酶素-HRP 37℃溫育30min。洗板3次。每孔加入底物A、B各50μL，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10min。加入終止液后立即在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值，根據(jù)樣品的吸光值在坐標(biāo)上找出對(duì)應(yīng)的濃度。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，計(jì)數(shù)資料采用2檢驗(yàn)，計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 kiss-1在子宮內(nèi)膜組織中的陽(yáng)性表達(dá)情況 觀(guān)察組、Ⅰ～Ⅱ期組、Ⅲ～Ⅳ期組kiss-1陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于對(duì)照組(P均<0.05)。Ⅰ～Ⅱ期組kiss-1陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于Ⅲ～Ⅳ期組(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 kiss-1在子宮內(nèi)膜組織的陽(yáng)性表達(dá)情況 例

注：①與對(duì)照組比較，P<0.05；②與Ⅰ～Ⅱ期組比較，P<0.05。

2.2 血清和腹腔液中sflt-1、VEGF、MCP-1、RANTES表達(dá)情況比較 觀(guān)察組、Ⅰ～Ⅱ期組、Ⅲ～Ⅳ期組血清和腹腔液中sflt-1、VEGF、MCP-1、RANTES水平明顯高于對(duì)照組(P均<0.05)。Ⅲ～Ⅳ期組血清和腹腔液中sflt-1、VEGF、和RANTES水平明顯高于Ⅰ～Ⅱ期組(P均<0.05),Ⅰ～Ⅱ期組和Ⅲ～Ⅳ期組血清和腹腔液中MCP-1水平比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均 >0.05)。見(jiàn)表2。

3 討 論

子宮內(nèi)膜異位癥多發(fā)于育齡期女性，雖然本病屬于良性疾患，但其具有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和種植的惡性特征，可導(dǎo)致患者不孕、慢性疼痛等，嚴(yán)重影響其正常生活工作。目前其發(fā)病機(jī)制不明，有多種學(xué)說(shuō)闡述其發(fā)病病因，病理改變?yōu)楫愇粌?nèi)膜組織隨激素水平變化發(fā)生周期性出血，同時(shí)伴有周?chē)M織增生和粘連，在病變區(qū)可見(jiàn)紫褐色斑點(diǎn)或小泡，最后可發(fā)展為紫藍(lán)色實(shí)質(zhì)性結(jié)節(jié)或包塊。研究表明，子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)病與基因、炎性遞質(zhì)、血供有關(guān)[6-8]。

表2 各組血清和腹腔液中sflt-1、VEGF、MCP-1、RANTES水平比較

注：①與對(duì)照組比較，P<0.05；②與Ⅰ～Ⅱ期組比較，P<0.05。

王偉等[9]和錢(qián)燕萍等[10]研究表明，kiss-1及其表達(dá)產(chǎn)物可以影響機(jī)體的神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)，其可以促進(jìn)下丘腦促性腺激素釋放激素分泌，并可以抑制腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移，而子宮內(nèi)膜異位癥患者多有遠(yuǎn)處種植現(xiàn)象。申慶文等[11]研究表明，kiss-1在子宮內(nèi)膜異位癥的表達(dá)降低，同時(shí)發(fā)現(xiàn)不同臨床分期中kiss-1表達(dá)不同，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。但本研究發(fā)現(xiàn)子宮內(nèi)膜異位癥組、Ⅰ～Ⅱ期組、Ⅲ～Ⅳ期組kiss-1陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于對(duì)照組,Ⅰ～Ⅱ期組kiss-1陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于Ⅲ～Ⅳ期組。這一結(jié)論與金海鴻等[12]的研究結(jié)果一致，可能與患者入選的標(biāo)準(zhǔn)或調(diào)查樣本大小有關(guān)。

目前，血管形成是子宮內(nèi)膜異位癥的研究熱點(diǎn)，而VEGF和sflt-1可以促進(jìn)子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞的增殖。王春紅等[13]對(duì)34例子宮內(nèi)膜異位癥患者進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)，VEGF表達(dá)在分泌期和增生期失去了正常的周期性變化，均呈現(xiàn)高水平表達(dá)。同時(shí)，子宮內(nèi)膜異位癥患者異位組織中微血管密度明顯升高[14]。本研究證實(shí)，子宮內(nèi)膜異位癥組sflt-1和VEGF水平均較對(duì)照組高，且Ⅲ～Ⅳ期水平高于Ⅰ～Ⅱ期。說(shuō)明sflt-1和VEGF可能參與了子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)病過(guò)程。

MCP-1的研究較為廣泛，其參與機(jī)體多種生理或病理性活動(dòng)，主要參與機(jī)體免疫炎癥調(diào)控，同時(shí)可以上調(diào)VEGF的表達(dá)水平，通過(guò)誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞遷移，參與到血管生成中[15]。RANTES主要作用是激活T細(xì)胞，趨化、激活多種白細(xì)胞。研究表明，RANTES與子宮內(nèi)膜異位癥患者組織炎癥、痛經(jīng)評(píng)分呈正相關(guān)(P均<0.05)，說(shuō)明RANTES可能與子宮內(nèi)膜碎片逆流進(jìn)入腹腔后導(dǎo)致的炎癥反應(yīng)有關(guān)[15-16]。本研究表明，子宮內(nèi)膜異位癥組MCP-1和RANTES水平均高于對(duì)照組，且Ⅲ～Ⅳ期組RANTES水平高于Ⅰ～Ⅱ期組，而Ⅰ～Ⅱ期組和Ⅲ～Ⅳ期組MCP-1比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

綜上所述，kiss-1、sflt-1、VEGF、MCP-1、RANTES水平與子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)展密切相關(guān)，可能參與了其發(fā)病過(guò)程，可以作為子宮內(nèi)膜異位癥的輔助檢測(cè)指標(biāo)。

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Significance of the expression of kiss-1in endomentrial tissue and the expression of sflt-1, VEGF,MCP-1, RANTES in serum and peritoneal fluid in the patients with endometriois

LI Ping, WANG Haibo, NIU Hailing, ZHAO Jinrong, LI Xiujuan

(The 260th Hospital of the PLA, Shijiazhuang 050041, Hebei, China)

Objective It is to study the significance of the expression of kiss-1in endomentrial tissue and the expression of sflt-1, VEGF, MCP-1, RANTES in serum and peritoneal fluid in the patients with endometriois.Methods 256cases of patients with endometriosis undergoing laparoscopic surgery were selected as observation group, in which according to the lesion, the size of adhesions there were 76cases of stage Ⅰ-Ⅱ (Ⅰ-Ⅱ stage group), Ⅲ-Ⅳ of 180cases (Ⅲ-Ⅳ stage group).114cases of patients admitting to hospital because of ovarian tumor, mesosalpinx cyst, cervical lesions were selected as control group.The expression of kiss-1endomentrial tissue was detected by immunohistochemistry, and the expression of sflt-1, VEGF, MCP-1, RANTES in serum and peritoneal fluid were detected by ELISA.Results The positive rate of the expression of kiss-1in observation group was significantly lower than that in the control group(P<0.05), and the rate in Ⅰ-Ⅱ stage group was significantly higher than that in Ⅲ-Ⅳ stage group(Pall<0.05).The levels of the expression of sflt-1, VEGF, MCP-1, RANTES in serum and peritoneal fluid were significantly higher than those in the control group(P<0.05).The levels in Ⅰ-Ⅱstage group were significantly lower than those in Ⅲ-Ⅳ stage group (Pall<0.05).Conclusion The levels of kiss-1, sflt-1, VEGF, MCP-1, RANTES are closely related with the development of endometriosis, which may be involved in its pathogenesis, and can be used as auxiliary determing indexes of endometriosis.

endometriosis; kiss-1; soluble vascular endothelial growth factor receptor; monocyte chemoattractant protein-1; vascular endothelial growth factor; T cell expressed and secreted regulatory activator

李萍，女，主治醫(yī)師，碩士，主要從事子宮內(nèi)膜異位癥的研究。

10.3969/j.issn.1008-8849.2015.14.007

R473.71

A

1008-8849(2015)14-1501-03

2014-12-14