程 坤

(邢臺醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，河北 邢臺 054000)

膀胱移行細(xì)胞腫瘤組織中FGFR3、E2F-1及P21蛋白表達(dá)的相關(guān)性

程 坤

(邢臺醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校，河北 邢臺 054000)

目的 探討FGFR3、E2F-1及P21蛋白在膀胱移行細(xì)胞乳頭狀瘤、膀胱移行細(xì)胞癌組織中的表達(dá)情況及在膀胱移行細(xì)胞癌發(fā)生和發(fā)展中的作用。方法 采用免疫組織化學(xué)方法檢測30例膀胱移行細(xì)胞乳頭狀瘤和92例膀胱移行細(xì)胞癌患者瘤組織中FGFR3、E2F-1及P21蛋白的表達(dá)情況，并分析各指標(biāo)與膀胱移行細(xì)胞癌分級、年齡和性別的關(guān)系。結(jié)果 在膀胱移行細(xì)胞乳頭狀瘤和膀胱移行細(xì)胞癌中，F(xiàn)GFR3、E2F-1及P21蛋白表達(dá)陽性率分別為57%(17/30)和82%(75/92),47%(14/30)和71%(65/92)，50%(15/30)和73%(67/92),膀胱癌組織中FGFR3、E2F-1及P21蛋白表達(dá)陽性率均明顯高于乳頭狀瘤組織(P均<0.05)。Spearman等級相關(guān)分析顯示膀胱腫瘤組織中FGFR3與E2F-1蛋白和P21蛋白表達(dá)呈顯著正相關(guān)關(guān)系(r=1.000,P<0.05；r=1.000,P<0.05);E2F-1蛋白和P21蛋白表達(dá)呈顯著正相關(guān)關(guān)系(r=1.000,P<0.05)。FGFR3、E2F-1和P21蛋白的表達(dá)與膀胱移行細(xì)胞癌病理組織學(xué)分級情況、患者年齡及性別無關(guān)。結(jié)論 FGFR3、E2F-1及P21蛋白的表達(dá)異?？赡芘c膀胱移行細(xì)胞腫瘤組織的發(fā)生發(fā)展有關(guān),FGFR3、E2F-1及P21蛋白的聯(lián)合檢測可為診斷膀胱移行細(xì)胞腫瘤良、惡性提供有力參考依據(jù)。

膀胱腫瘤；FGFR3蛋白；E2F-1蛋白；P21蛋白；免疫組化

膀胱癌是泌尿系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤，在全世界范圍內(nèi)，其發(fā)病率居惡性腫瘤的前十位。男性發(fā)病率高于女性。在過去的六七十年中，全世界膀胱癌發(fā)病率也逐年升高，尤其是在發(fā)展中國家。分子生物學(xué)研究證實(shí)癌癥的發(fā)生是需要多個因素作用、多個步驟促進(jìn)而逐步形成的，發(fā)生過程可涉及癌基因的激活和抑癌基因的失活等。筆者擬通過免疫組織化學(xué)方法檢測成纖維細(xì)胞生長因子受體3(FGFR3)、E2F-1及P21蛋白在膀胱腫瘤組織中的表達(dá)情況，探討3種蛋白在膀胱良、惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中的作用及關(guān)系。

1 研究資料

1.1材料 選取河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院2000—2009年收治經(jīng)手術(shù)切除的膀胱移行細(xì)胞腫瘤 (BTCT) 組織標(biāo)本122例,患者術(shù)前均未進(jìn)行放療、化療及免疫治療。膀胱移行細(xì)胞乳頭狀瘤(TCP)30例，男19例,女11例;年齡27～71歲。膀胱移行細(xì)胞癌92例，男81例,女11例;年齡30～85歲；WHO標(biāo)準(zhǔn)病理分級G1級38例，G2級31例，G3級23例。

1.2 方法 所有標(biāo)本均經(jīng)10%甲醛固定24 h，石蠟包埋，采用5 μm厚的蠟塊連續(xù)組織切片切5張，1張做蘇木精-伊紅染色以核實(shí)診斷，3張做FGFR3， E2F-1，P21免疫組化染色，1張PBS液做一抗空白對照。FGFR3單克隆抗體購于美國Santa Cruz公司，E2F-1和P21單克隆抗體購于香港ABCOM公司，免疫組化試劑盒等購于福建邁新試劑公司。免疫組化操作步驟按說明書進(jìn)行。FGFR3一抗為工作液，E2F-1和P21一抗稀釋濃度為1∶20。經(jīng)顯色、復(fù)染、脫水、透明后封片。

1.3 蛋白表達(dá)陽性判定標(biāo)準(zhǔn) FGFR3蛋白表達(dá)主要定位于細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì),表現(xiàn)為黃色或棕黃色著色。E2F-1蛋白表達(dá)主要位于細(xì)胞核，P21細(xì)胞質(zhì)顯示陽性。根據(jù)細(xì)胞染色程度、范圍與分布不同進(jìn)行分級，每張切片觀察10個高倍視野，陽性細(xì)胞數(shù)≤10%為0分，11%～30%為1分，>30%～60%為2分；>60%為3分。陽性細(xì)胞不著色為0分，淺棕色為1分，棕黃色為2分，深棕黃色為3分。陽性細(xì)胞數(shù)與陽性細(xì)胞著色情況積分相加1～2分為(+)，3～4分為(),5～6分為()。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 15軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，率的比較采用卡方檢驗(yàn)。相關(guān)分析采用Spearman等級相關(guān)分析。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié) 果

2.1膀胱移行細(xì)胞乳頭狀瘤和膀胱移行細(xì)胞癌組織中FGFR3、E2F-1及P21蛋白表達(dá)情況 膀胱移行細(xì)胞乳頭癥狀瘤和移行細(xì)胞癌中GFR3、E2F-1及P21蛋白均有陽性表達(dá)，后者陽性率均高于乳頭狀瘤組織(P均<0.05)。膀胱癌組織中FGFR3、E2F-1及P21蛋白表達(dá)情況見表1。其中膀胱移行細(xì)胞癌組織中FGGR3蛋白陽性物質(zhì)主要定位于細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)，E2F-1蛋白陽性物質(zhì)定位于細(xì)胞核，P21蛋白陽性表達(dá)表現(xiàn)為細(xì)胞質(zhì)染色。FGFR3、E2F-1及P21蛋白在膀胱移行細(xì)胞癌中陽性表達(dá)鏡下表現(xiàn)見圖1～3。

表1 膀胱移行細(xì)胞腫瘤組織中FGFR3、E2F-1及P21蛋白表達(dá)情況 例

圖1 FGFR3在膀胱移行細(xì)胞癌組織中表達(dá)情況(SABC×100)

圖2 E2F-1在膀胱移行細(xì)胞癌組織中表達(dá)情況(SABC×100)

2.2 不同病理分級、年齡、性別膀胱移行細(xì)胞癌組織中FGFR3、E2F-1及P21蛋白表達(dá)情況 不同病理分級、年齡、性別的膀胱移行細(xì)胞癌組織中FGFR3、E2F-1及P21蛋白表達(dá)陽性率比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)。見表2。

圖3 P21在膀胱移行細(xì)胞癌組織中的表達(dá)情況(SABC×400)

表2 不同病理分級、年齡、性別膀胱移行細(xì)胞癌組織中FGFR3、E2F-1及P21蛋白表達(dá)情況 例(%)

2.3 FGFR3、E2F-1及P21蛋白表達(dá)的相關(guān)性分析 在膀胱移行細(xì)胞癌中,FGFR3蛋白呈陽性表達(dá)的75例中E2F-1蛋白陽性表達(dá)59例,陰性表達(dá)16例；P21蛋白陽性表達(dá)63例,陰性表達(dá)12例。FGFR3蛋白呈陰性表達(dá)的17例中E2F-1蛋白陽性表達(dá)10例,陰性表達(dá)7例；P21蛋白陽性表達(dá)8例,陰性表達(dá)9例。E2F-1蛋白呈陽性表達(dá)的66例中P21蛋白陽性表達(dá)52例,陰性表達(dá)14例；E2F-1蛋白呈陰性表達(dá)的26例中P21蛋白陽性表達(dá)15例,陰性表達(dá)11例。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果顯示膀胱移行細(xì)胞癌組織中FGFR3與E2F-1蛋白、P21蛋白表達(dá)呈顯著正相關(guān)關(guān)系(r=1.000,P<0.05；r=1.000,P<0.05);E2F-1蛋白和P21蛋白表達(dá)呈顯著正相關(guān)關(guān)系(r=1.000,P<0.05)。

3 討 論

FGFR3為酪氨酸激酶受體基因家族五成員(FGFR1、 FGFR2、FGFR3、FGFR4、FGFR5)之一[1]，F(xiàn)GFR3特殊位點(diǎn)的突變及受體的功能異?；罨?，破壞了機(jī)體組織的正常生長和發(fā)育，可以導(dǎo)致人體軟骨發(fā)育不全或者致死性骨骼發(fā)育不全等人類遺傳性疾病[2]。近年來研究證明，F(xiàn)GFR3的激活突變也與尿路上皮性腫瘤的早期形成密切相關(guān)，且FGFR3蛋白在膀胱移行細(xì)胞癌中陽性表達(dá)率多見于低分期低分級的腫瘤中[3]。本研究結(jié)果顯示，F(xiàn)GFR3蛋白在膀胱移行細(xì)胞癌不同組織分級中的陽性表達(dá)率差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明FGFR3的表達(dá)與膀胱移行細(xì)胞癌組織分級不相關(guān)，可能與各級別所取樣本例數(shù)少有關(guān)。

E2F-1蛋白是調(diào)節(jié)細(xì)胞周期和凋亡的E2F家族的原型成員[4]。研究表明，E2F-1蛋白在神經(jīng)膠質(zhì)瘤、胃癌、黑色素瘤和乳腺癌等多種腫瘤組織中均高表達(dá)，提示E2F-1蛋白能促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展[5]。謝慶祥等[6]研究證明，E2F-1隨著膀胱移行細(xì)胞癌惡性程度的升高其陽性表達(dá)率也升高，說明其在膀胱腫瘤的發(fā)生中起促癌作用, E2F-1可以作為早期診斷膀胱腫瘤的一個候選因子；體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)也顯示E2F-1即將成為治療某些增殖性疾病和腫瘤的靶基因[7]。本研究結(jié)果顯示，E2F-1蛋白在膀胱移行細(xì)胞癌組織中的陽性表達(dá)率明顯高于膀胱移行細(xì)胞乳頭狀瘤組織，提示高表達(dá)的E2F-1可能與膀胱癌發(fā)生發(fā)展有關(guān)，但是E2F-1蛋白的表達(dá)水平與膀胱移行細(xì)胞癌的病理分級無關(guān)。

P21蛋白為Ras基因家族共同編碼的胞質(zhì)內(nèi)參與跨膜信號傳遞的主要物質(zhì)，有GTP酶活性，對細(xì)胞生長信號起調(diào)節(jié)作用，能夠抑制腫瘤細(xì)胞的增殖[8]。當(dāng)P21發(fā)生突變時(shí)，可導(dǎo)致正常膀胱黏膜細(xì)胞惡變。有研究證實(shí)，P21對評估膀胱移行細(xì)胞癌惡性程度及預(yù)后有一定的參考價(jià)值，并且P21蛋白在有惡變傾向的腺性膀胱炎中陽性表達(dá)[9]。劉伯龍等[10]認(rèn)為P21蛋白的陽性表達(dá)率隨著膀胱移行細(xì)胞癌病理分化越差、臨床分期越晚而升高。本研究結(jié)果顯示，P21蛋白在膀胱移行細(xì)胞癌組織中的陽性表達(dá)率明顯高于膀胱移行細(xì)胞乳頭狀瘤組織。隨著腫瘤的發(fā)生與進(jìn)展，P21蛋白的陽性表達(dá)率呈增高趨勢，但不同組織分級中的陽性表達(dá)率差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

綜上所述， FGFR3、E2F-1及P21蛋白表達(dá)異常可能與膀胱移行細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān), 三者聯(lián)合檢測可為臨床診斷膀胱移行細(xì)胞腫瘤良、惡性提供有力參考依據(jù)。

[1] Laederich MB，Horton WA. FGFR3 targeting strategies for achondroplasia[J]. Expert Rev Mol Med，2012，14:e11

[2] Simon R，Burger H，Sernjonow A，et al. Patterns of chromosomal imbalances in muscle invasive bladder cancer[J]. Int J Oncol，2000，17(5)：1025-1029

[3] Foldynova-Trantirkova S，Wilcox WR，Krejci P. Sixteen years and counting: the current understanding of fibroblast growth factor receptor 3 (FGFR3) signaling in skeletal dysplasias[J]. Hum Mutat，2012，33(1):29-41

[4] 陳緒龍，祝青國. E2F轉(zhuǎn)錄因子家族的研究進(jìn)展[J]. 現(xiàn)代醫(yī)學(xué),2014,42(9):1109-1113

[5] Zacharatos P,Kotsinas A,Evangelou K,et al. Distinct expression patterns of the transcription factor E2F-1 in relation to tumour growth parameters in common human carcinomas[J]. Pathol，2004,203(3):744-753

[6] 謝慶祥,張閩峰,林福地,等. 膀胱癌中轉(zhuǎn)錄因子E2F的表達(dá)及其臨床意義[J]. 診斷病理學(xué)雜志,2002,9(2)：102-103

[7] Palaiologou M，Koskinas J，Karanikolas M，et al. E2F-1 is overexpressed and pro-apoptotic in human hepatocellular carcinoma[J]. Virchows Arch，2012，460(5):439-446

[8] 陳宏偉，王春華，李軍良，等. p21活化蛋白激酶在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用研究進(jìn)展[J]. 山東醫(yī)藥，2014，54(19)：97-99

[9] 羅蓉. Ras P21蛋白檢測與腺性膀胱炎及膀胱癌的關(guān)系[J]. 臨床合理用藥，2013，6(11):128-129

[10] 劉伯龍，李解方， 胡和平，等. Clusterin和p21在膀胱癌中的表達(dá)及臨床意義[J]. 現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2009，9(7):1297-1299

The correlation between the expression of FGFR3, E2F-1 and P21 protein in bladder tumor

CHENG Kun

(Xingtai Medical College, Xingtai 054000, Hebei, China)

Objective It is to approach the expression of FGFR3, E2F-1 and P21 protein in bladder transitional cell papilloma tissues and bladder transitional cell carcinoma, and explore the role in the development and development of bladder transitional cell carcinoma. Methods The expression of FGFR3, E2F-1 and P21 protein were detected by immunohistochemical method in 30 cases of bladder transitional cell papilloma tissues and 92 cases of bladder transitional cell carcinoma, the relationship between the levels, age and sex with the bladder transitional cell carcinoma were analyzed. Results The positive expression rate of FGFR3, E2F-1 and P21 protein in bladder transitional cell papilloma and bladder cancer was 57% (17/30) and 82%(75/92), 47% (14/30) and 71% (65/92), 50% (15/30) and 73% (67/92); there were significant differences between the two groups (allP<0.05). Spearman rank correlation analysis showed that the expression of FGFR3 protein was significantly positively correlated with the expression of E2F-1 protein and P21 protein in bladder tumor tissues (r=1.000,P<0.05;r=1.000,P<0.05); the expression of E2F-1 protein was significantly correlated with the expression of P21 protein (r=1.000,P<0.05). The expression of FGFR3, E2F-1, P21 protein in bladder cancer were not associated with grade, age and gende.Conclusion The abnormal expression of FGFR3, E2F-1 and P21 may be related to the development of bladder transitional cell carcinoma, the combined detection of FGFR3, E2F-1 and P21 can provide a useful reference for the diagnosis of benign and malignant bladder tumor.

bladder tumor; FGFR3; E2F-1; P21; immunohistochemistry

程坤，女，醫(yī)學(xué)碩士，研究方向?yàn)椴±韺W(xué)與病理生理學(xué)。

邢臺市科技局立項(xiàng)課題(2013ZC078)

10.3969/j.issn.1008-8849.2015.21.006

R737.14

A

1008-8849(2015)21-2296-03

2014-11-20