龐載元 吳賢麗 華毅

（攀枝花市中心醫(yī)院，四川 攀枝花 617067）

4種中藥對30株廣泛耐藥銅綠假單胞菌的抑菌作用

龐載元 吳賢麗 華毅

（攀枝花市中心醫(yī)院，四川 攀枝花 617067）

目的：探討黃芩等4種中藥對廣泛耐藥銅綠假單胞菌的抑菌作用。方法：采用中藥抗菌試驗試管法測定藥物的最低抑菌濃度（M IC）。結(jié)果：黃芩、連翹、黃連、金銀花對30株廣泛耐藥銅綠假單胞菌有不同程度的體外抑菌作用，M IC均值分別為475.00，345.83，60.94，379.17 mg/m L，與標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC27853的M IC相近。其中黃連的抑菌作用最強。結(jié)論：4種中草藥對30株廣泛耐藥銅綠假單胞菌均有不同程度的抑菌作用，本地與外地收集的菌株，抑菌作用無顯著性差異（P＞0.05）。

黃芩；連翹；黃連；金銀花；廣泛耐藥銅綠假單胞菌；體外抑菌試驗

隨著抗菌藥的廣泛使用，細(xì)菌的耐藥問題變得越來越突出，嚴(yán)重威脅著人類健康，己成為人們必須面對的難題，特別是廣泛耐藥菌的出現(xiàn)使臨床感染治療面臨嚴(yán)峻的挑戰(zhàn)，由于缺乏有效的抗菌藥治療，已成為院內(nèi)感染致死的一個重要原因。

廣泛耐藥銅綠假單胞菌[1]是院內(nèi)感染的重要條件致病菌，對碳青霉烯類、氟喹諾酮類、氨基苷類及β-內(nèi)酰胺類抗菌藥同時耐藥，多黏菌素可能是目前對碳青霉烯類抗菌藥耐藥銅綠假單胞菌或鮑曼不動桿菌最為有效的抗菌藥物之一，但毒副作用較大，臨床較少使用；替加環(huán)素具有廣譜抗菌活性，是目前治療廣泛耐藥菌感染的首選，但對銅綠假單胞菌無抗菌活性[2]。開發(fā)新的抗菌藥是克服該菌耐藥性的有效途徑，但新藥開發(fā)周期長、投資大，醫(yī)藥經(jīng)費負(fù)擔(dān)重。

中藥治療感染性疾病有悠久的歷史，常用的抗菌中草藥有近百種[3]，因而從中藥中篩選出能對廣泛耐藥銅綠假單胞菌具有較強作用的藥物或相關(guān)成分可能是一條捷徑。經(jīng)文獻(xiàn)檢索，有關(guān)中藥抑菌的研究較多，但未見中藥對廣泛耐藥銅綠假單胞菌抑菌、殺菌的研究報道，因此，研究中藥對廣泛耐藥銅綠假單胞菌的體外抗菌活性具有重大的現(xiàn)實意義。

本實驗采用中藥抗菌實驗試管法，參考了有關(guān)文獻(xiàn)[4]并根據(jù)多年來的經(jīng)驗作了適當(dāng)?shù)母倪M(jìn)。現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

孵箱，1 000μL無菌吸頭，1 000μL加樣槍，帶帽無菌試管若干，比濁儀，API 0.85%3 m L無菌鹽水管，試管架若干。

1.2 菌株的選擇

收集近期（2010年4月 -2011年4月）來自本院和外地（浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院）的廣泛耐藥銅綠假單胞菌30株，選擇標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC 27853，ATCC25922，ATCC25923做對比分析。

1.3 中藥的選擇

通過查閱文獻(xiàn)，選擇有抗菌活性的4種中藥配方顆粒（本院藥房提供），由四川新綠色藥業(yè)科技發(fā)展股份有限公司生產(chǎn)的黃芩、連翹、黃連、金銀花，產(chǎn)品批號分別為0906004，1011091，1008054，1001002。

1.4 中藥藥液的制備

取50 m L的無菌燒杯，用無菌蒸餾水溶解中藥配方顆粒，使其藥液相當(dāng)于生藥的質(zhì)量濃度為1 000 mg/m L。

1.5 細(xì)菌的培養(yǎng)與稀釋

將選定的實驗菌株,接種血平板培養(yǎng)基37℃孵育24 h。取API 0.85%3 m L無菌鹽水管，挑取菌落配制成0.5麥?zhǔn)媳葷釂挝?，相?dāng)于菌含量1.5× 108cfu/m L。

1.6 最低抑菌濃度（M IC）的測定

按臨床標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會（CLSI）推薦的液體稀釋法測定實驗菌株的M IC值。具體應(yīng)用倍比稀釋法對藥物進(jìn)行稀釋，稀釋液為梅里埃的非苛養(yǎng)革蘭陰性桿菌藥敏專用肉湯。

1.7 操作步驟

在10支無菌試管中加入1 m L肉湯，于第1管加1 m L中藥（1 000 mg/m L），混勻后取出1 m L加入第2管，混勻后取出 1 m L加入第3管，反復(fù)操作至第9管，第10管不加藥液做陽性對照，在每個試管中加入 0.5麥?zhǔn)蠁挝坏木?20μL，第9管不加菌液做陰性對照，充分混勻后放置37℃孵箱中培養(yǎng)，24 h后觀察細(xì)菌生長情況。在陽性對照管細(xì)菌生長正常，陰性對照管無菌生長的條件下，判斷無渾濁的試管的最小濃度即為M IC。以上所有無菌操作均需在生物安全柜中進(jìn)行。

2 結(jié)果

黃芩、連翹、黃連、金銀花對30株廣泛耐藥銅綠假單胞菌有不同程度的體外抑菌作用，M IC均值分別為475.00，345.83，60.94，379.17 mg/m L，與標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC27853的M IC相近。其中黃連的抑菌作用最強。見表1。

3 討論

由表1可見，黃芩、連翹、黃連、金銀花對30株廣泛耐藥銅綠假單胞菌有不同程度的體外抑菌作用。其中黃連的抑菌作用最強。連翹和金銀花的抑菌作用與冷會勇[5]報道的多重耐藥鮑曼不動桿菌的抑菌作用相似，黃連的抗菌活性，與李建志[6]報道的銅綠假單胞菌體外抗菌活性相似。4種中藥對本地與外地收集的菌株，抑菌作用無顯著性差異（P＞ 0.05）。

表1 4種中藥對30株廣泛耐藥銅綠假單胞菌的抑菌作用

選擇適當(dāng)?shù)慕o藥途徑方能發(fā)揮中藥的抗菌作用。常用的抗菌中藥有近百種，然而其抑菌濃度遠(yuǎn)高于抗菌藥[7]，按常規(guī)劑量口服血藥濃度遠(yuǎn)遠(yuǎn)達(dá)不到抑菌濃度。以本試驗為例：黃連M IC均值為60.94 mg/m L，按成人5 000 m L體液算，需要一次口服 304.7 g生藥才可能在體內(nèi)達(dá)到抑菌濃度，而黃連的常規(guī)劑量為2～ 10 g[8]，遠(yuǎn)遠(yuǎn)達(dá)不到應(yīng)有的血藥濃度。如果用此劑量口服治療胃腸道感染，因為不必吸收入血，理論上能達(dá)到抑菌濃度；如果用此劑量口服治療肺部感染，因為血藥濃度遠(yuǎn)遠(yuǎn)達(dá)不到抑菌濃度，感染治療難以奏效。

中藥治療呼吸道感染，吸入給藥是不錯的選擇。由于呼吸道面積大，毛細(xì)血管豐富、致密，藥物吸收快，吸收速率僅次于靜脈給藥[8]，藥物用量少，可以克服口服血藥濃度過低的瓶頸，通過霧化吸入，藥物可直達(dá)病所。張衛(wèi)東[9]報道：13例患者用多黏菌素E進(jìn)行霧化吸入治療廣泛耐藥銅綠假單胞菌性肺炎取得較好臨床療效，有效率為69.2%，研究中13例均未發(fā)生嚴(yán)重不良反應(yīng)。中藥霧化吸入治療肺炎[10-12]和上呼吸道感染[13-15]的報道較多，療效肯定。本研究資料顯示，雖然4種中藥對廣泛耐藥銅綠假單胞菌有不同的體外抗菌活性，但按常規(guī)劑量口服在體內(nèi)遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能達(dá)到應(yīng)有的抑菌濃度。中藥霧化吸入治療廣泛耐藥菌引起的肺炎是值得一試的方法。

在中藥抗菌研究的過程中，前人的研究結(jié)果提示中藥在抗菌作用方面蘊藏著巨大潛力。中藥的給藥途徑有很多，在應(yīng)用研究方面需要打破常規(guī)，不斷創(chuàng)新與開拓，才能使中藥更好地造福于人類。

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The Bacteriostatic Effect of Four K inds of Traditional Chinese Herbal M edicines on Thirty Strains of Extensively Drug-resistant Pseudomonas Aeruginosa

Pang Zaiyuan，Wu Xianli，Hua Yi(Center Hospital of Panzhihua City,Sichuan Panzhihua 617067，China)

Objective：To evaluate bacteriostatic effects of four kinds of Chinese herbal medicines,including baicalin,on the extensively drug-resistant Pseudomonas aeruginosa.M ethods:The antibacterial medicine test tube method for TCM was adopted to determine the minimum inhibitory concentration （M IC）of the tested drug.Results：Scutellaria,Forsythia,Coptis and Honeysuckle showed a different degree of bacteriostatic effect in vitro antibacterial test on 30 strains of extensively drug-resistant Pseudomonas aeruginosa.The M IC mean value was 475.00,345.83,60.94 and 379.17 mg/m L respectively,which was sim ilar to the M IC of the standard strain ATCC27853,and Coptis chinensis showed the strongest inhibitory effect.Conclusion:Four kinds of Chinese herbal medicines had different antibacterial effects on 30 strains of extensively drug-resistant Pseudomonas aeruginosa，and there was no significant difference of bacteriostasis（P＞0.05）between the strains collected locally and from other places.

Scutellaria；Forsythia；Coptis；Honeysuckle；Extensively Drug-resistant Pseudomonas Aeruginosa；in Vitro Antibacterial Test

10.3969/j.issn.1672-5433.2015.02.006

2014-10-08）

龐載元，男，副主任技師。研究方向：臨床微生物檢驗。E-mail：yangfan621225@qq.com