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農(nóng)桿菌介導(dǎo)的煙草瞬時(shí)表達(dá)影響因素研究

【作者】 孫蔓莉；孟玉玲；張強(qiáng)；黃桂艷；單衛(wèi)星

【機(jī)構(gòu)】 西北農(nóng)林科技大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院；西北農(nóng)林科技大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院；旱區(qū)作物逆境生物學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室

通過探究根癌農(nóng)桿菌(Agrobacterium tumefaciens)介導(dǎo)的煙草瞬時(shí)表達(dá)體系的影響因素,確定煙草瞬時(shí)表達(dá)的最佳條件,為目的基因的功能研究提供技術(shù)支持。利用馬鈴薯晚疫病抗性基因RB和致病疫霉菌效應(yīng)基因Avrblb 1作為報(bào)告基因,采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的注射滲透法,摸索農(nóng)桿菌菌懸液OD600值和菌系(遺傳背景)、煙草品種及其生長(zhǎng)時(shí)期等因素,確定煙草高效的基因瞬時(shí)表達(dá)條件。研究結(jié)果表明:介導(dǎo)煙草基因瞬時(shí)表達(dá)的根癌農(nóng)桿菌菌懸液適宜OD600值為0.3～0.8;在菌懸液OD600值為0.1及以上時(shí),AGL1、GV3101和C58C1介導(dǎo)的報(bào)告基因瞬時(shí)表達(dá)效率相似,均引發(fā)較強(qiáng)的葉片壞死反應(yīng);在農(nóng)桿菌菌懸液OD600值小于0.1時(shí),AGL1介導(dǎo)的瞬時(shí)表達(dá)效率最高。測(cè)試的煙草品種都具備較高的瞬時(shí)表達(dá)效率,苗齡6～8周的煙草適合分析。通過測(cè)試農(nóng)桿菌菌懸液OD600值和菌系(遺傳背景)、煙草品種及其生長(zhǎng)時(shí)期等因素,確定本氏煙和普通煙均可實(shí)現(xiàn)基因高效瞬時(shí)表達(dá)的條件。

摘自《西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)》 2015年01期