劉國慶，魏建榮，招啟柏，胡鐘勝，張?zhí)毂瑮願^宇，符云鵬

1 江蘇中煙工業(yè)有限責任公司，南京 210019；2 河南農(nóng)業(yè)大學，鄭州 450002

不同調(diào)制方法對曬黃煙葉綠素降解和脂氧合酶活性的影響

劉國慶1，魏建榮1，招啟柏1，胡鐘勝1，張?zhí)毂?，楊奮宇1，符云鵬2

1 江蘇中煙工業(yè)有限責任公司，南京 210019；2 河南農(nóng)業(yè)大學，鄭州 450002

為提高曬黃煙外觀質(zhì)量，以湖南寧鄉(xiāng)曬黃煙全曬方法為對照，在全曬過程中分別引入捂曬、烤曬的方法，研究了調(diào)制過程中葉綠素a、葉綠素b和脂氧合酶（LOX）活性的變化。結(jié)果表明：烤曬可以提高LOX的活性峰值，捂曬可以有效延長LOX作用時間。葉綠素a含量、葉綠素b含量與LOX活性均呈顯著負相關關系。三種調(diào)制方式葉綠素降解發(fā)生的階段不同，但調(diào)制結(jié)束時降解率均達到90%以上，相對而言，T1捂曬效果最好，調(diào)制結(jié)束葉綠素總量為0.05 mg·g-1DW，降解率為97.73%。

曬黃煙;脂氧合酶;葉綠素

曬黃煙是我國特有的晾曬煙類型之一[1]，也是我國發(fā)展“中式卷煙”的特色原料之一[2-3]。湖南寧鄉(xiāng)曬黃煙屬于淺色曬煙，在混合型卷煙、烤煙型卷煙配方中都可適量配用[4]，在烤煙型卷煙中還能使焦油量降低[5]。目前對曬黃煙的研究相對較少，主要集中在栽培與管理[6-8]、煙葉品質(zhì)等方面[9-13]，在調(diào)制理論和調(diào)制技術方面報道較少[14-15]。在生產(chǎn)上，采用傳統(tǒng)全曬方法生產(chǎn)的曬黃煙葉面常存在浮青、死青，一定程度上影響到煙葉的商品等級及外觀品質(zhì)。脂氧合酶（Lipoxidase，LOX）是一種氧合酶，是一種含非血紅素鐵的蛋白，酶蛋白由單肽鏈組成，它專門催化具有順，順－1，4-戊二烯結(jié)構(gòu)的不飽和脂肪酸的加氧反應，生成具有共扼雙鍵的氫過氧化物，在植物中其底物主要是亞油酸和亞麻酸。LOX具有對葉綠體色素的漂白作用[16-17]，研究調(diào)制過程中葉綠素的變化對于改進調(diào)制方法，提高外觀質(zhì)量有著重要的意義。

1 材料和方法

1.1 試驗設計

本試驗設三個處理，T0對照，為傳統(tǒng)的全程曬制，T1捂曬（凋萎變黃期捂曬結(jié)合、定色干葉期曬制、干筋漂白期曬制），T2烤曬（凋萎變黃期捂曬結(jié)合、定色干葉期烤制、干筋漂白期曬制）。試驗設在湖南寧鄉(xiāng)，曬黃煙品種為寸三皮，所用煙葉為中部生理成熟葉。曬黃煙的調(diào)制不同于烤煙和晾煙，沒有密閉或半密閉的調(diào)制場所,充分利用白天自然光、熱、風資源，協(xié)調(diào)煙葉失水與變黃，晚上收堆存放。為了反映曬制和捂曬的作用，在取樣時主要依據(jù)出曬時間、堆捂時間和煙葉變化進程取樣，而沒有采用等時間距取樣。按照煙葉失水和外觀的變化，將煙葉調(diào)制過程劃分為三個階段[12]，依次為凋萎變黃期（0 h～28h）,定色干葉期（28 h～73h），干筋漂白期（73 h～169h）。

1.2 試驗方法

1.2.1 脂氧合酶的測定

采用分光光度法[18]。底物的制備：100 mL 0.05 mol/L檸檬酸－磷酸緩沖液（pH=6.3）加入0.1 mL Tween20，搖勻，加入0.25 mL亞油酸，搖勻乳化。酶液的提?。悍Q樣0.2 g，加磷酸緩沖液（pH =7.0）6.0 mL，冰水浴中研磨，勻漿，單層紗布過濾。12000 rpm離心20 min，取上清液與底物混合，以無水乙醇終止反應，以A234nm的變化值表示生成的產(chǎn)物，用鮮重△ OD234·g-1·min-1FW 來表示酶活力。

1.2.2 葉綠素的測定

采用分光光度法[19]。

1.2.3 數(shù)據(jù)處理及作圖

采用Microsoft Excel 2007進行，相關分析采用SPSS17.0。

2 結(jié)果與分析

2.1 調(diào)制方法對葉綠素的影響

2.1.1 葉綠素a

調(diào)制過程中，三個處理葉綠素a的含量趨勢見表1。調(diào)制結(jié)束，三個處理的葉綠素a含量差別不大。但從各階段降解率看，T0對照、T1捂曬的葉綠素a降解主要發(fā)生在凋萎變黃期和定色干葉期，T2烤曬的葉綠素a降解則三個階段較為均衡。

表1 調(diào)制過程中葉綠素a含量的變化Tab.1 Changes of chlorophyll-a content in tobacco leaves during the curing process

2.1.2 葉綠素b

調(diào)制過程中，三個處理葉綠素b的含量變化趨勢見表2，調(diào)制結(jié)束，三個處理的葉綠素b含量差別不大。但從各階段降解率看，T0對照葉綠素b降解在三個階段較為均衡，T1捂曬主要發(fā)生在定色干葉期，T 2烤曬主要發(fā)生在干筋漂白期。

表2 調(diào)制過程中葉綠素b含量的變化Tab.2 Changes of chlorophyll-b content in tobacco leaves during the curing process

2.1.3 葉綠素a/b

調(diào)制過程中，三個處理葉綠素a/b比值呈現(xiàn)明顯減少趨勢（見表3），說明葉綠素a比葉綠素b降解得要快，調(diào)制結(jié)束，三個處理間也有差異，T0對照葉綠素a/b比值最大，T1捂曬最小，T2烤曬居中。從各階段看，三個處理葉綠素a/b的比值也呈現(xiàn)了不同的變化，在凋萎變黃期，T0對照葉綠素a/b比值的減少幅度大于T1捂曬、T2烤曬；在定色干葉期，T1捂曬葉綠素a/b比值的減少幅度最大，T0對照次之，T2烤曬最??；在干筋漂白期，T2烤曬葉綠素a/b比值的減少幅度最大，T1捂曬次之，T0對照最小。據(jù)上，T0對照葉綠素a/b比值快速下降的時期發(fā)生在凋萎變黃期和定色干葉期，T1捂曬葉綠素a/b比值快速下降的時期發(fā)生在定色干葉期和干筋漂白期，T2烤曬葉綠素a/b比值快速下降的時期發(fā)生在干筋漂白期。

表3 調(diào)制過程中葉綠素a/b比值的變化Tab.3 Chl.a/Chl.b changes in tobacco leaves during the curing process

2.2 調(diào)制方法對LOX活性的影響

調(diào)制過程中，三個處理LOX活性總體呈現(xiàn)增高趨勢（見圖1），T0對照、T2烤曬呈現(xiàn)先增加后減少的拋物線型，T1捂曬呈現(xiàn)一直增加的趨勢。在凋萎變黃期，T0對照LOX活性最高，其它兩個處理LOX活性接近；在定色干葉期，T0對照LOX活性最高，T1捂曬LOX活性最低，T2烤曬LOX活性居中；在干筋漂白期，T2烤曬LOX酶活最高，T0對照LOX活性最低，T1捂曬LOX活性居中。在調(diào)制的73h，T0對照的LOX活性已經(jīng)呈現(xiàn)明顯下降趨勢，而在169h，T1捂曬、T2烤曬LOX還保持著較高的活性，說明捂曬、烤曬處理能夠有效延長LOX保持較高活性的時間，這對于葉綠素的降解有著積極的意義。

2.3 葉綠素含量和LOX活性的相關分析

調(diào)制過程中三個處理LOX活性總體呈增高趨勢，葉綠素含量則呈明顯下降趨勢。對LOX活性和葉綠素a、葉綠素b含量分別作相關性分析，均為負相關（如表3）。三個處理的葉綠素a，b含量與LOX活性的相關性均有統(tǒng)計學意義。

圖1 調(diào)制過程中脂氧合酶活性的變化Fig. 1 Changes of LOX activity in tobacco leaves during the curing process

表4 脂氧合酶活性與葉綠素含量的相關分析Tab.4 Correlation analysis of LOX activity and chlorophyll content

3 結(jié)論與討論

比較了全曬，捂曬和烤曬三種調(diào)制方法，發(fā)現(xiàn)捂曬處理中，葉綠素降解的更早，在定色干葉期末，降解率顯著高于其他兩個處理，而且最終也更為充分，調(diào)制結(jié)束時T0對照葉綠素總量為0.08mg·g-1DW，含量最高，T1捂曬葉綠素總量為0.05 mg·g-1DW，含量最低。

葉綠素a含量、葉綠素b含量與LOX活性均呈顯著負相關，而采用捂曬方法能夠延長LOX保持較高活性的時間，這或許是捂曬處理有利于葉綠素充分降解的原因之一。

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Effect of different curing methods on chlorophyll degradation and lipoxidase activity in yellow sun-cured tobacco

LIU Guoqing1, WEI Jianrong1, ZHAO Qibai1, HU Zhongsheng1, ZHANG Tianbing1, YANG Fenyu1,FU Yunpeng2
1 China Tobacco Jiangsu Industrial Co. Ltd, Nanjing 210019, China；2 Henan Agriculture University, Zhengzhou 450002, China

Chlorophyll-a and chlorophyll-b content and the dynamic of lipoxygenase activity, which are important to sensory quality of yellow sun-cured tobacco, were studied by using different curing methods. Results indicated that fl ue-curing measure could increase Lipoxygenase activity and bulking measure could extend effective time of Lipoxygenase. There was a signi fi cant negative correlation between lipoxygenase activity and chlorophyll-a, chlorophyll-b content respectively. Degradation rate of chlorophyll reached up to 90%when treated with yellow sun-curing, fl ue-curing and bulking measures. Bulking measure was the best as chlorophyll content reached 0.05 mg·g-1DW and its degradation rate was 97.73%.

yellow sun-cured tobacco; lipoxidase; chlorophyll

:LIU Guoqing, WEI Jianrong, ZHAO Qibai, et al. Effect of different curing methods on chlorophyll degradation and lipoxidase activity of yellow sun-cured tobacco [J]. Acta Tabacaria Sinica, 2015,21 (2)

劉國慶，魏建榮，招啟柏,等. 不同調(diào)制方法對曬黃煙葉綠素降解和脂氧合酶活性的影響[J]. 中國煙草學報，2015,21（2）

劉國慶（1975—），碩士研究生，農(nóng)藝師，主要從事煙葉基地建設工作，Email:nj01777@163.com

符云鵬（1964—），博士，副教授，主要從事煙草栽培及生理生化研究，Email:ypfu01@163.com

2014-01-21