祖立闖，李 嬌，高 鵬，王金良，李 峰，沈志強(qiáng)，

（1. 山東綠都生物科技有限公司，山東 濱州 256600；2. 濱州市科學(xué)技術(shù)局，山東 濱州 256600；3. 山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究院，山東 濱州 256600）

抗體檢測在豬病防控中的應(yīng)用

祖立闖1，李 嬌1，高 鵬2，王金良3，李 峰3，沈志強(qiáng)1，3

（1. 山東綠都生物科技有限公司，山東 濱州 256600；2. 濱州市科學(xué)技術(shù)局，山東 濱州 256600；3. 山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究院，山東 濱州 256600）

開展抗體檢測工作對(duì)豬病的臨床診斷、流行動(dòng)態(tài)的監(jiān)測、疫苗免疫效果的評(píng)價(jià)及免疫程序的修訂等均具有重要的指導(dǎo)意義，隨著我國豬病防控體系的不斷發(fā)展和完善，抗體檢測將逐步成為豬病監(jiān)測的常態(tài)化工作。文內(nèi)對(duì)豬群抗體檢測的原理、主要方法、作用與意義、檢測結(jié)果分析等方面進(jìn)行了論述?？偨Y(jié)探討抗體檢測在豬病防控中的應(yīng)用，旨在呼吁加強(qiáng)對(duì)抗體檢測工作的重視，合理運(yùn)用抗體檢測結(jié)果修訂免疫程序，提高豬病防控能力。

抗體檢測；豬病防控；應(yīng)用

近年來，隨著我國養(yǎng)豬業(yè)的規(guī)?；⒓s化快速發(fā)展，疫病感染壓力亦越來越大，呈現(xiàn)出多種病原混合感染和繼發(fā)感染，持續(xù)感染和潛伏感染亦時(shí)常發(fā)生，臨床表現(xiàn)趨于溫和型和非典型病變，對(duì)豬病的綜合防控提出了挑戰(zhàn)。傳統(tǒng)的診療方式已不能滿足現(xiàn)代化養(yǎng)殖的防治要求，采取以疫苗免疫接種為主的預(yù)防措施逐步成為規(guī)?；i場疫病防控的主要措施。抗體檢測是評(píng)價(jià)疫苗免疫效果的主要方法，只有免疫豬群抗體水平達(dá)到一定的滴度才能防止相應(yīng)病原的感染。同時(shí)，對(duì)未進(jìn)行疫苗免疫豬群進(jìn)行抗體檢測可了解掌握豬群野毒感染情況，為制定豬場疫病綜合防控方案提供重要參考依據(jù)。故抗體檢測工作將逐步成為現(xiàn)代化養(yǎng)殖中疫病監(jiān)測的常態(tài)化工作，鑒于此，本文針對(duì)豬群抗體檢測的原理、主要方法、作用與意義、檢測結(jié)果分析等方面進(jìn)行論述，總結(jié)探討抗體檢測在豬病防控中的應(yīng)用，僅供獸醫(yī)工作者參考。

1 抗體檢測的原理

當(dāng)動(dòng)物機(jī)體受到抗原刺激后，體內(nèi)免疫細(xì)胞識(shí)別病原并產(chǎn)生一系列復(fù)雜的免疫連鎖反應(yīng)，產(chǎn)生與之相對(duì)應(yīng)的特異性抗體?？贵w可以特異性地直接中和抗原，也可以中和病原的毒性作用或阻斷病原對(duì)靶細(xì)胞的入侵[1]。抗體檢測的原理就是基于抗原-抗體的特異性結(jié)合反應(yīng)，通過檢測動(dòng)物體內(nèi)抗體水平，了解掌握抗原的免疫或感染水平。

2 抗體檢測的主要方法

隨著現(xiàn)代免疫學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展，基于抗原抗體反應(yīng)的各種抗體檢測方法不斷發(fā)展和成熟。目前，豬病常用的抗體檢測技術(shù)主要有中和試驗(yàn)、凝集試驗(yàn)、瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)、免疫熒光試驗(yàn)、ELISA、膠體金試紙條等方法。其中，中和試驗(yàn)方法準(zhǔn)確，但需要昂貴儀器設(shè)備、操作復(fù)雜、需經(jīng)驗(yàn)豐富的專業(yè)技術(shù)人員判斷結(jié)果。豬病中常用的凝集試驗(yàn)方法主要有顆粒性抗原與抗體反應(yīng)的直接凝集試驗(yàn)、以乳膠顆粒為載體的乳膠凝集試驗(yàn)、紅細(xì)胞參與的血凝抑制試驗(yàn)等。凝集試驗(yàn)方法操作簡單、檢測快速，但特異性較低；瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)無需儀器設(shè)備、操作簡單，但特異性較低，也不適合大批量樣品的檢測；膠體金試紙條檢測時(shí)間短、肉眼判讀結(jié)果、無需儀器設(shè)備、操作簡單，特別適合于基層獸醫(yī)部門和養(yǎng)殖場（戶）使用，但其敏感性較低，且檢測結(jié)果只能提供陽性、弱陽性、陰性的半定量結(jié)果，無法提供數(shù)值性的檢測結(jié)果；ELISA方法以靈敏、特異、簡單、快速、穩(wěn)定、高通量、易于操作等優(yōu)點(diǎn)，在豬病的免疫豬群抗體水平監(jiān)測、豬病的快速診斷與流行病學(xué)調(diào)查中得到了廣泛應(yīng)用，已顯示出了良好的應(yīng)用前景。常見豬病的各種抗體檢測方法均具有各自的優(yōu)點(diǎn)與缺點(diǎn)，但對(duì)于大規(guī)模的流行病學(xué)調(diào)查、大批量樣品的抗體監(jiān)測，目前ELISA方法具有其他方法無法比擬的優(yōu)勢。

3 抗體檢測的意義

3.1 疫病診斷

血清學(xué)抗體檢測雖然很難區(qū)分母源抗體、疫苗免疫產(chǎn)生的抗體和野毒感染產(chǎn)生的抗體，但可結(jié)合豬只日齡、疫苗的免疫史、病原的流行病學(xué)、病豬的臨床癥狀和病理變化等臨床情況進(jìn)行綜合診斷，且對(duì)于部分常見豬病還可以利用病毒缺失基因產(chǎn)生的抗體或病毒非結(jié)構(gòu)性蛋白產(chǎn)生的抗體區(qū)分野毒感染抗體和疫苗免疫抗體。例如，目前我國廣泛使用的豬偽狂犬病病毒gE基因缺失弱毒疫苗，該疫苗不產(chǎn)生針對(duì)gE蛋白的抗體，雷有玲等[2]利用原核表達(dá)技術(shù)表達(dá)了豬偽狂犬病病毒gE蛋白，以純化的重組gE蛋白為包被抗原建立了檢測豬偽狂犬病病毒野毒抗體的間接ELISA方法，通過檢測gE抗體即可實(shí)現(xiàn)對(duì)豬偽狂犬病病毒野毒感染的鑒別診斷。目前我國普遍使用豬細(xì)小病毒病滅活疫苗，由于滅活疫苗免疫豬群后只刺激機(jī)體產(chǎn)生結(jié)構(gòu)蛋白抗體而不產(chǎn)生非結(jié)構(gòu)蛋白抗體，但是野毒感染豬卻可產(chǎn)生大量非結(jié)構(gòu)蛋白抗體，分別檢測NS1非結(jié)構(gòu)蛋白抗體VP2結(jié)構(gòu)蛋白抗體可對(duì)豬細(xì)小病毒滅活疫苗免疫豬和豬細(xì)小病毒野毒感染豬進(jìn)行區(qū)分。劉建等[3]分別采用豬細(xì)小病毒NS1和VP2蛋白作為包被抗原，建立了檢測豬細(xì)小病毒野毒抗體和疫苗免疫抗體的間接ELISA方法，2種方法可聯(lián)合應(yīng)于豬細(xì)小病毒（PPV）野毒感染的快速診斷，豬群免疫疫苗后抗體水平檢測，逐步實(shí)現(xiàn)豬群豬細(xì)小病毒病的凈化。

3.2 流行病學(xué)調(diào)查

通過血清流行病學(xué)調(diào)查方法可以迅速掌握某一地區(qū)、某一時(shí)間豬群中致病原的感染與流行情況，為了制定合理的防控措施提供參考依據(jù)。李嬌等[4]采用ELISA方法對(duì)2013年山東、河南、江蘇、廣東等地送檢的血清樣品進(jìn)行了豬瘟、豬繁殖與呼吸綜合征、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病4種常見豬病的抗體檢測，4種豬病的自然感染率分別為4.54 %、8.20 %、11.24 %、41.44 %，4種豬病的自然感染現(xiàn)象較普遍，建議加強(qiáng)對(duì)常見豬病的疫苗免疫，做好相應(yīng)的疾病防控工作。吳程華等[5]為了解云南省楚雄地區(qū)散養(yǎng)戶豬偽狂犬病病毒（PRV）野毒的感染情況，應(yīng)用間接ELISA方法對(duì)從楚雄地區(qū)9個(gè)散養(yǎng)戶隨機(jī)采集的154份血清樣本進(jìn)行野毒抗體檢測，野毒抗體的陽性率為25.32 %，表明楚雄地區(qū)散養(yǎng)戶PRV野毒感染率偏高，為防控和凈化楚雄地區(qū)豬偽狂犬病提供了理論依據(jù)。

3.3 評(píng)價(jià)疫苗的質(zhì)量，評(píng)估疫苗免疫效果

疫苗質(zhì)量的高低直接決定了疫苗免疫整體效果的優(yōu)劣，各疫苗生產(chǎn)廠家的生產(chǎn)工藝、毒株、疫苗的安全性、穩(wěn)定性和可控性都各不相同，疫苗的質(zhì)量彼此間差別很大。疫苗在保存、運(yùn)輸、使用等諸多環(huán)節(jié)過程中有可能受外界環(huán)境尤其是高溫、日曬的影響，都將導(dǎo)致疫苗質(zhì)量嚴(yán)重下降。豬群受到豬圓環(huán)病毒病等免疫抑制疫病的影響，以及受到飼喂霉變飼料等日常不良飼養(yǎng)管理的影響，均可造成疫苗免疫效果下降，疫苗免疫失敗。通過免疫豬群的抗體檢測，可以了解疫苗免疫注射后豬群是否產(chǎn)生了抗體，以及抗體水平的高低是否可以抵抗病原的感染，故依據(jù)抗體水平檢測的結(jié)果在很大程度上可對(duì)疫苗質(zhì)量進(jìn)行評(píng)價(jià)，對(duì)疫苗免疫效果進(jìn)行評(píng)估。殷方芝等[6]為評(píng)價(jià)豬瘟脾淋苗和細(xì)胞苗的免疫效果，隨機(jī)選取了45頭和20頭斷奶仔豬，分別用豬瘟脾淋苗和細(xì)胞苗免疫豬群，定期進(jìn)行免疫抗體檢測，結(jié)果顯示脾淋苗二免后抗體陽性率總體維持在30%～40%左右，細(xì)胞苗二免后抗體陽性率達(dá)到87%，且離散度較低，群體免疫抗體水平比較均勻。與豬瘟脾淋苗相比，細(xì)胞苗免疫效果更加理想。

3.4 制定和修改免疫程序

豬只每年都要進(jìn)行豬瘟、豬繁殖與呼吸綜合征、口蹄疫、豬細(xì)小病毒病、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病、豬流行性腹瀉、豬支原體、副豬嗜血桿菌病等多種疾病的疫苗免疫，每種疾病對(duì)豬的易感日齡各不相同，且多種疫苗同時(shí)免疫還會(huì)產(chǎn)生相互干擾作用，降低疫苗免疫效果。故養(yǎng)殖場（戶）對(duì)豬不同時(shí)間進(jìn)行何種疫苗免疫需制定一個(gè)合理的免疫程序。而免疫程序的制定除受到各種疫苗相互干擾外，還與母源抗體水平、疫苗種類與免疫次數(shù)、免疫接種時(shí)間與方法、當(dāng)?shù)夭煌竟?jié)豬病流行情況等因素密切相關(guān)。疫苗良好免疫效果的獲得依賴于初免和二免時(shí)機(jī)是否合適，母源抗體水平?jīng)Q定首次免疫的時(shí)間，殘留抗體水平?jīng)Q定二次免疫的時(shí)間。當(dāng)豬體內(nèi)母源抗體或殘留抗體水平過高時(shí)，過早注射疫苗會(huì)使抗體中和注射的疫苗，導(dǎo)致疫苗免疫失??；而當(dāng)豬體內(nèi)母源抗體或殘留抗體水平過低時(shí)，若注射疫苗較晚，豬體內(nèi)無抗體存在，將造成免疫空白期，導(dǎo)致病原感染。通過抗體檢測可以及時(shí)監(jiān)測豬體內(nèi)抗體的消長狀況，選擇恰當(dāng)?shù)拿庖邥r(shí)機(jī)，制定科學(xué)合理的免疫程序。且免疫程序不是一成不變的，不能機(jī)械地效仿別的豬場或本豬場以往的免疫程序，要對(duì)豬群進(jìn)行定期跟蹤抗體檢測，以檢測的實(shí)際抗體水平為依據(jù)，隨時(shí)調(diào)整與修訂免疫程序，制訂出適合本場的免疫程序，使疫苗免疫接種效果達(dá)到最佳水平。呼顯生等[7]為了篩選出適合生產(chǎn)實(shí)際和防疫要求的免疫程序，選擇豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體陰性、豬偽狂犬病抗體陰性、豬瘟抗原陰性的20頭仔豬，隨機(jī)分成4組，分別設(shè)計(jì)4個(gè)免疫程序進(jìn)行試驗(yàn)。試驗(yàn)結(jié)果表明：只有試驗(yàn)I組的免疫程序可行，即21日齡進(jìn)行豬瘟疫苗首免，60日齡加強(qiáng)免疫1次；母豬分娩前第10天進(jìn)行豬偽狂犬病疫苗首免，35日齡加強(qiáng)免疫1次；35日齡進(jìn)行豬繁殖與呼吸綜合征疫苗首免，60日齡加強(qiáng)免疫1次。

4 抗體檢測的結(jié)果分析

對(duì)豬不同時(shí)期進(jìn)行抗體檢測，可能會(huì)出現(xiàn)多種不同的檢測結(jié)果，以下我們對(duì)常見幾種可能出現(xiàn)的抗體檢測結(jié)果進(jìn)行分析。

4.1 沒有接種疫苗卻檢測出抗體

豬群近期接觸并感染了病原但尚未發(fā)病，應(yīng)及時(shí)對(duì)豬群進(jìn)行疫苗緊急免疫接種。當(dāng)然此種情況對(duì)于仔豬來講，有可能檢測到的是母源抗體，也有可能野毒感染抗體，1個(gè)星期后可再次采集血清，進(jìn)行抗體檢測，如抗體滴度下降則為母源抗體；如抗體滴度未下降甚至持續(xù)升高則表明為野毒感染。

4.2 疫苗免疫后抗體水平高，整齊度高

表明接種疫苗的時(shí)機(jī)最佳，疫苗免疫效果確實(shí)，豬體健康狀況良好，抗病能力較強(qiáng)，發(fā)生野毒感染的概率較小，無需修訂免疫程序，但仍需定期進(jìn)行抗體檢測，確保豬群具有較高抗體水平和整齊度。

4.3 疫苗免疫后抗體水平低，整齊度低

表明疫苗免疫接種的效果不理想，已造成免疫失敗。原因可能為，確定的免疫時(shí)間不對(duì)，免疫程序不合理，疫苗保存、運(yùn)輸不當(dāng)造成疫苗失效，接種人員的操作不規(guī)范，疫苗免疫的劑量不足。應(yīng)及時(shí)進(jìn)行補(bǔ)充免疫，若補(bǔ)免后抗體水平依舊無法提高，表明該豬群或存在免疫抑制性疾病，或存在飼養(yǎng)管理漏洞，預(yù)示將要發(fā)生疫病，應(yīng)排查一切可能原因，果斷采取有效的預(yù)防控制手段。

4.4 疫苗免疫后抗體水平高，整齊度低

抗體水平高表明疫苗免疫接種的時(shí)間是比較合理的，但整齊度低與疫苗質(zhì)量、豬只個(gè)體差異、應(yīng)激、免疫劑量、注射方法與注射部位等均密切相關(guān)。此時(shí)，應(yīng)重點(diǎn)排查是否存在免疫抑制性疾病病原體的感染、飼料中的霉菌毒素等多種免疫抑制性因素，是否使用同一批次疫苗，疫苗使用中是否存在長時(shí)間的高溫、日曬，免疫劑量是否確實(shí)，是否存在少注、漏注，注射方法與注射部位是否準(zhǔn)確，免疫注射和保定操作對(duì)豬只是否造成應(yīng)激等，務(wù)必根據(jù)具體情況找出免疫效果不理想的具體原因，及時(shí)加強(qiáng)飼養(yǎng)管理及修訂免疫操作方法。

4.5 疫苗免疫后抗體水平低，整齊度高

表明免疫程序不合理，就其原因可能為：免疫時(shí)間選擇得不對(duì)，或受到了母源抗體的干擾，或豬群中存在免疫抑制性因素，或免疫過于頻繁，2種疫苗免疫間隔過短，先接種疫苗誘導(dǎo)產(chǎn)生干擾素抑制了后接種疫苗的增殖，疫苗之間產(chǎn)生了相互干擾。應(yīng)根據(jù)抗體檢測結(jié)果，確定合適的免疫時(shí)機(jī)進(jìn)行補(bǔ)免。

5 結(jié)語

綜上所述，抗體檢測是豬病臨床診斷的重要手段之一，也是免疫豬群免疫水平監(jiān)測的重點(diǎn)之一，對(duì)豬病流行狀態(tài)的監(jiān)測、疫苗免疫效果的評(píng)價(jià)及免疫程序的修訂等均具有重要的指導(dǎo)意義。隨著我國養(yǎng)豬產(chǎn)業(yè)新技術(shù)和新模式的不斷應(yīng)用，依靠經(jīng)驗(yàn)主義的免疫程序和免疫方法已不能滿足現(xiàn)代化規(guī)模養(yǎng)殖的需求，定期開展抗體檢測工作，制定科學(xué)合理的免疫程序，已成為豬病綜合防控中不可缺少的一項(xiàng)重要措施。相信隨著人們對(duì)抗體檢測工作的日益重視，以及各種豬病抗體檢測方法的不斷發(fā)展，抗體檢測在豬病的綜合防控中將是不可或缺的重要一環(huán)，從而保障我國養(yǎng)豬業(yè)快速、健康發(fā)展。

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2015-07-07）

山東省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系生豬產(chǎn)業(yè)創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目（SDAIT-06-022-15）

祖立闖（1981年5月-），男，漢族，黑龍江賓縣人，助理研究員，碩士，主要從事獸醫(yī)免疫學(xué)診斷技術(shù)研究工作。E-mail：zulichuang2008@126.com