姜在清 陳明生

（山東省諸城市畜牧獸醫(yī)管理局，山東諸城 262200）

畜產(chǎn)品中瘦肉精、氯霉素等殘留的膠體金檢測技術(shù)

姜在清 陳明生

（山東省諸城市畜牧獸醫(yī)管理局，山東諸城 262200）

諸城市畜牧局堅持以人為本的理念，始終把畜禽產(chǎn)品質(zhì)量安全工作放在全局工作的首要任務(wù)。嚴(yán)格貫徹執(zhí)行《食品安全法》《動物防疫法》《農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全法》《國務(wù)院關(guān)于加強(qiáng)食品及產(chǎn)品監(jiān)督管理特別規(guī)定》《動物性食品中獸藥最高殘留限量》等法律法規(guī)及有關(guān)配套規(guī)定，加強(qiáng)畜禽產(chǎn)業(yè)行業(yè)管理，強(qiáng)化官方獸醫(yī)監(jiān)管職責(zé)，定期不定期到畜禽產(chǎn)業(yè)各環(huán)節(jié)進(jìn)行監(jiān)管，發(fā)現(xiàn)問題依法處理，同時充分發(fā)揮動物疫病預(yù)防控制中心的技術(shù)優(yōu)勢，積極開展對動物疫病、獸藥飼料、畜禽產(chǎn)品藥物殘留進(jìn)行監(jiān)測和技術(shù)指導(dǎo)，發(fā)現(xiàn)問題由動物衛(wèi)生監(jiān)督機(jī)構(gòu)依法處理。由于諸城市對畜禽產(chǎn)品質(zhì)量安全的高度重視，加強(qiáng)畜禽產(chǎn)業(yè)各環(huán)節(jié)的監(jiān)管、獸藥殘留的檢測（監(jiān)測），按照國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)及省、市有關(guān)獸藥殘留抽樣檢測計劃的規(guī)定和操作規(guī)程和技術(shù)要求進(jìn)行獸藥殘留的監(jiān)測，至今無畜禽及畜禽產(chǎn)品質(zhì)量安全事故發(fā)生。

2002年3月農(nóng)牧發(fā)〔2002〕1號文件《食品動物禁用的獸藥及其化合物清單》、2002年4月農(nóng)牧發(fā)〔2002〕235號文件《動物性食品中獸藥最高殘留限量》中“瘦肉精”（鹽酸克倫特羅及其鹽、酯）、氯霉素及其鹽、酯是首要禁止使用的藥物，在動物性食品中不得檢出。鹽酸克倫特羅在人的臨床上用于治療哮喘病，對心臟副作用大，屬于—腎上腺類激素，據(jù)資料報道人醫(yī)用量0.02～0.5μg/kg中毒一般含量肝臟100～500μg/kg，一般肝臟的殘留是肌肉的200倍，一餐食用含“瘦肉精”的豬肝0.25kg以上者，約15min至6h可出現(xiàn)中毒癥狀，長期食用含有—受體激動劑殘留的食品，將對人體健康產(chǎn)生極大的危害，可誘發(fā)和加重心律失常病人的病情，引起心室期前收縮，四肢、臉、頸部骨骼肌震顫，常見惡心、頭暈、四肢無力、手顫等中毒癥狀，另外還能引起代謝紊亂，對糖尿病人可發(fā)生酸中毒或酮中毒。

隨著人民生活水平不斷提高，人們對動物性食品的要求從數(shù)量型已轉(zhuǎn)變成質(zhì)量型，近年來中國的畜牧業(yè)迅速發(fā)展，已成為世界上畜禽產(chǎn)品生產(chǎn)大國，也是消費(fèi)大國，同時出現(xiàn)了不科學(xué)應(yīng)用動物疾病的防治及促生長藥物，甚至受到利益的驅(qū)動，沖破道德的底線，使用或添加國家明令禁止的獸藥及有害物質(zhì)，目前諸城市畜牧局及動物屠宰企業(yè)積極開展獸藥殘留的檢測工作，認(rèn)真執(zhí)行《動物性食品中獸藥最高殘留限量》規(guī)定，確保人民“舌尖上的安全”，讓人民吃上“放心肉”，凈化畜產(chǎn)品市場。

面對大量的畜禽及其畜禽產(chǎn)品，探討研究快速、簡單、準(zhǔn)確的檢測技術(shù)—膠體金快速檢測法篩查，在實際工作中是最現(xiàn)實、最方便、最具有操作性的方法。膠體金快速檢測卡是最快速、最簡單的一種方法，判斷依據(jù)為農(nóng)業(yè)部《食品動物禁用的獸藥及其化合物清單》、農(nóng)業(yè)部《禁止在飼料和飲水中使用的藥物品種目錄》、農(nóng)部《農(nóng)業(yè)部關(guān)于投入品使用的有關(guān)規(guī)定》；判斷標(biāo)準(zhǔn)以確證方法定量限為判斷值，超過定量限即判定為不合格。層析法免疫膠體金檢測試劑實際上是免疫金標(biāo)技術(shù)和抗原抗體反應(yīng)相結(jié)合而形成的一種應(yīng)用形式，服從于抗原抗體反應(yīng)的特性，從抗原抗體反應(yīng)的原理上可把層析法免疫膠體金檢測試劑分為以下幾類，一是雙抗體夾心法金標(biāo)。二是雙抗原夾心法。三是捕獲法檢測特異性的人IgG和IgM；四是競爭抑制法檢測小分子物質(zhì)。現(xiàn)在諸城市場上采用的 “瘦肉精”快速檢測卡應(yīng)用了競爭抑制免疫層析的原理，樣品中的“瘦肉精”在流動過程中與膠體金標(biāo)記的特異性單克隆抗體結(jié)合，抑制了抗體和NC膜檢測線上“瘦肉精”—蛋白偶聯(lián)物的結(jié)合。如樣品尿液中“瘦肉精”含量大于3ppb，肉類中“瘦肉精”含量大于1ppb，檢測線不顯色，結(jié)果為陽性；反之為陰性。

“瘦肉精”膠體金快速檢測卡檢測方法：（1）最簡單的方法只需要取一些豬肉、肝臟、肺臟、腎臟、瘦肉樣品（約10g），將樣品剪碎裝入1.5 ml離心管中，蓋緊管蓋，在水浴中煮5～10 min，使汁液浸出，取出離心管放至室溫，將煮出的汁液加同樣體積的配套緩沖液混勻，用吸管吸入樣本液垂滴加1～2滴于加樣孔內(nèi)，用于檢測即可，幾個ppb的瘦肉精就能被測出，全程只需十幾分鐘。注意脂肪會造成假陽性，取樣時請棄去肉眼可見的脂肪。（2）樣品豬肉組織，稱取5.0±0.05g新鮮豬肉（或肝）樣品，放于500ml帶蓋離心管中加5g無水硫酸鈉，再加5ml乙氰振蕩3min，4000r/min離心10min，取4ml上清液于另一試管中56度空氣后氮氣吹干，0.3ml三蒸水復(fù)溶，振蕩3min取液體檢測；（3）樣品飼料，稱取均質(zhì)的飼料樣品1.0±0.05g加入10ml甲醇，再加入5g無水硫酸鈉振蕩3min，室溫4 000 r/min以上離心10 min，吸出離心后的上清液1ml，于56度氮氣吹干，用1ml三蒸水復(fù)溶，再加1ml正己烷混合30s室溫4 000 r/min以上離心，取下層液體檢測。檢測，在檢測卡的加樣孔內(nèi)加入2滴（80μl）待檢樣品溶液，在室溫下靜置5～8 min內(nèi)判定結(jié)果，超過30 min的結(jié)果只能做參考，當(dāng)樣品溶液中的瘦肉精含量大于檢測限時，檢測線不顯色結(jié)果為陽性，當(dāng)樣品溶液中瘦肉精含量小于檢測限時，檢測線顯紫紅色，結(jié)果為陰性。肉類檢測限為1ppb、飼料5～10 ppb。

膠體金快速檢測卡對生豬尿液中“瘦肉精”的檢測（適合于官方獸醫(yī)搞產(chǎn)地檢疫檢測和屠宰檢疫及屠宰廠檢驗檢測時）。具體操作與注意事項：取出檢測卡，根據(jù)檢測樣品的數(shù)量確定需要檢測卡的數(shù)量；檢測卡放置在平坦的臺面上；檢測卡標(biāo)記上尿樣的編號應(yīng)于豬的耳標(biāo)編碼一致；然后用滴管吸取尿樣，垂直滴加2滴尿樣于加樣孔中。結(jié)果的判定：（1）陽性：僅質(zhì)控區(qū)（C）出現(xiàn)一條紫紅色帶，在測試區(qū)（T）內(nèi)無紫紅色條帶出現(xiàn)，表明尿液中的克倫特羅殘留物大于3ppb。（2）陰性：兩條紫紅色條出現(xiàn)。一條位于測試區(qū)（T）內(nèi)，另一條位于質(zhì)控區(qū)（C）內(nèi)，表明尿液中不含克倫特羅殘留物或小于3ppb。（3）無效：質(zhì)控區(qū)（C）未出現(xiàn)紫紅色條帶，表明不正確的操作過程或檢測卡已損壞，應(yīng)再次測試。注意操作過程在室溫下；用干燥、潔凈適當(dāng)?shù)娜萜鞑杉?0ml左右尿液，尿液在2℃～8℃保藏；尿樣澄清時可直接用于檢測，較為混濁尿樣應(yīng)離心或過濾后用于檢測。