方 文，陳 鳳，王尚位，劉宏坤，李云萍

人體大片形吸蟲蟲卵孵育特點

方 文，陳 鳳，王尚位，劉宏坤，李云萍

目的 了解人體大片形吸蟲蟲卵的孵育特點。方法 收取患者服藥前1～4 d的全量糞便，采用尼龍袋集卵法收集蟲卵。按不同的保存溫度和保存時間將蟲卵分組孵育: A組，新鮮糞便；B組，4℃下保存10 d、20 d和88 d；C組，室溫20～21 ℃下保存10 d。蟲卵置于28 ℃恒溫水浴箱中孵化。結(jié)果 共收取3位患者的10份糞便。各組蟲卵在孵育后第11～16 d孵出毛蚴。結(jié)論 無論含蟲卵的糞便是新鮮，還是保存于4 ℃下，或是室溫下，均不影響其孵化；但蟲卵必須在有水的環(huán)境及適宜的溫度下才能順利發(fā)育并最終孵化出毛蚴。

大片形吸蟲；蟲卵；孵育特點

大片形吸蟲蟲卵孵化特點已有報道[1-3]，但其蟲卵均來自于牛源大片形吸蟲的成蟲，而人體糞便中大片形吸蟲蟲卵的孵化特點尚未見報道。大理賓川縣于2011年11月至2012年2月爆發(fā)26例人體大片形吸蟲感染[4]，我們收集其中3例患者的糞便，進行蟲卵孵化實驗觀察，結(jié)果如下。

1 材料和方法

1.1 糞便收集 收取大片形吸蟲病患者服藥前1～4 d的全量糞便，采用尼龍袋集卵法[5]收集蟲卵。

1.2 蟲卵孵化 按尼龍袋集卵法收集蟲卵，然后將含蟲卵的沉渣分次倒入培養(yǎng)皿中，在體視顯微鏡下吸出蟲卵。將蟲卵放入小燒杯中，加入去氯水，置恒溫水浴箱中孵化，溫度定為28 ℃。自孵化第2 d開始，每天定時吸出蟲卵觀察發(fā)育情況。

1.3 分組 按照糞便及蟲卵保存的方法和時間不同分為3個組：A組為新鮮糞便收取后，當日淘洗、吸出蟲卵并孵化；B組為糞便收取后，先保存于4 ℃下7 d，然后淘洗，留取糞渣，再置4 ℃下保存10 d、20 d和88 d后孵育；C組為糞便收取后，放置于室溫下10 d，然后淘洗、吸出蟲卵、孵育。

2 結(jié) 果

收取3例患者共10份糞便，其中1號患者2份，2、3號患者各4份。每日隨糞便排出的蟲卵數(shù)量不一，多的約500個，少的約40個，平均為153個。

3例患者蟲卵大小分別為：1號患者(152～161.5) μm×(76～95) μm，平均157.94 μm×86.69 μm；2號患者(152～161.6) μm×(61.75～85.5) μm，平均159.13 μm×72.44 μm； 3號患者(157～172)μm×(66～86)μm，平均163 μm×76 μm。

A組蟲卵，收取3號患者當天排出的糞便，共2份大便，經(jīng)淘洗、吸取蟲卵后，當日置于28 ℃水浴箱中孵化。孵育第3 d可見明顯的卵細胞分裂現(xiàn)象，第4 d已具毛蚴雛形，第9 d形成毛蚴，卵內(nèi)毛蚴的乳突、纖毛、眼點等清晰可見，其眼點呈黑色圓點或x形，活動明顯但緩慢。孵育后第12 d，取出孵化瓶置陽光下3 min，毛蚴孵出。

B組蟲卵，為1、2號患者的，共6份大便，分8次孵育。孵育前將蟲卵吸出置顯微鏡下觀察，均未發(fā)現(xiàn)蟲卵有發(fā)育的跡象。存于4℃下10 d的蟲卵為1號患者的1份糞便，孵育第14 d，從水浴箱中取出，見光即有毛蚴孵出；存于4 ℃下20 d的蟲卵有4份，分別是：1號患者1份，2號患者3份，2號患者其中的1份蟲卵分兩次孵育，間隔2 d。結(jié)果1號患者蟲卵于第12 d孵化出毛蚴(見光即出)。2號患者的2份各在第11 d和13 d毛蚴孵出；2號患者的同一份、分2次孵育的蟲卵則于第14 d和16 d見光后3～6 min毛蚴孵出。置4℃下保存88 d的是2號患者的兩份蟲卵，其中1份與保存于4 ℃下20 d的蟲卵(于第13 d孵出毛蚴)為同一份，兩份蟲卵均于第15 d孵出毛蚴：從水浴箱中取出置陽光下6 min毛蚴孵出，28 min后孵出量逐漸增多，至38 min達高峰，再過40 min后逐漸減少直至不再孵出。

C組蟲卵，3號患者的兩份大便，先在室溫(20～21℃)下放置10 d，然后淘洗，吸出蟲卵，鏡下未觀察到蟲卵有發(fā)育跡象，遂將蟲卵置水浴箱中孵育，第13 d取出放在陽光下4～6 min，即有毛蚴孵出。

3 討 論

本實驗觀察了在恒溫孵育的條件下不同保存環(huán)境和不同保存時間，人體大片形吸蟲卵的發(fā)育情況。結(jié)果顯示，蟲卵保存于4 ℃下10 d、20 d和3個月，均能正常孵化出毛蚴；不管含蟲卵的糞便是新鮮，還是保存于4 ℃下，或是室溫下，均不影響其孵化。文獻報道[1,3]，牛源大片形吸蟲蟲卵在25～28 ℃需15～17 d孵化出毛蚴，在25～35 ℃需10～14 d。本實驗只做了在恒溫28 ℃下人體大片形吸蟲蟲卵的發(fā)育情況觀察，即恒溫28 ℃下，孵出毛蚴的時間為11～16 d，而相對集中則是第12 d和第13 d。表明人體和牛體大片形吸蟲蟲卵孵育所需的溫度和時間條件是相似的。

大片形吸蟲蟲卵在28 ℃恒溫水浴箱中孵育，當卵內(nèi)毛蚴發(fā)育成熟，從水浴箱中取出見光0～6 min，即有毛蚴孵出，因此，我們認為大片形吸蟲毛蚴有較強的趨光性。另外，毛蚴成熟后，如果不將孵化瓶從水浴箱中取出見光，即毛蚴成熟后仍放在水浴箱中避光，則毛蚴不會孵化而出。這兩點均與王冬英[2]觀察的結(jié)果有異。

本實驗結(jié)果表明，蟲卵在低溫下可長時間保存而不失活性；蟲卵在糞便中無論以何種方式保存都不能發(fā)育，蟲卵必須在有水的環(huán)境及適宜的溫度下才能順利發(fā)育并最終孵化出毛蚴。

[1]Lin YG, Sun YL, Chen CR, et al. Studies on the development ofFasciolaGiganticacobbold in its snail host and the epidemiology of Fascioliasis of cattle in Tsinchiang region, Fukien[J]. Acta Zoologica Sinica, 1974, 20(4): 378-390. (in Chinese) 林宇光，孫毓蘭，陳存瑞，等. 大片形吸蟲的發(fā)育史和二種片形吸蟲的流行學研究[J].動物學報，1974，20(4)：378-390.

[2]Wan DY. The epidemiology of Guangxi, life cycle in intermediate host and taxonomy ofFasciolaspp[D]. Nanning: Guangxi University, 2006. (in Chinese) 王冬英. 廣西片形吸蟲流行情況，在中間宿主體內(nèi)的發(fā)育與分類學的初步研究[D].廣西大學,2006.

[3]Ma L. Research on the cultivation ofFasciolametacercariae and kinetics of specific antibodies in rabbits experimentally infected withFasciola[D].Nanning: Guangxi University, 2002. (in Chinese) 馬麗. 片形吸蟲囊蚴培養(yǎng)及感染家兔后特異性抗體的動力學研究[D].廣西大學,2002.

[4]Chen MX, Ai L, Xu XN, et al. Twenty six cases of humanFasciolagiganacainfection in Dali, Yunnan province[J]. Chin J Endemiol, 2012, 31(6): 595-598. (in Chinese) 陳木新，艾琳，許學年，等. 云南省大理州大片形吸蟲群體感染26例分析[J].中國地方病學雜志，2012，31(6)：595-598.

[5]Chen PH, Kong DF, Li HZ, et al. Experimental technology of human parasitology[M].Beijing: Science Press, 1988: 119-120. (in Chinese) 陳佩惠，孔德芳，李慧珠,等. 人體寄生蟲學實驗技術(shù)[M]. 北京：科學出版社，1988, 119-120.

10.3969/cjz.j.issn.1002-2694.2015.04.021

大理州血吸蟲病防治研究所，大理 671000; Email:fangwenee@126.com

R383.2

C

1002-2694(2015)04-0389-02

2014-07-30；

2014-11-03