朱瑞敏 鐘華

三種方法聯(lián)合檢測對新生兒梅毒診斷的應(yīng)用

朱瑞敏 鐘華

梅毒是由梅毒螺旋體(TP, 又稱蒼白密螺旋體)引起的一種慢性、系統(tǒng)性的性傳播疾病, 可通過孕婦胎盤進(jìn)入胎兒血液引起死胎、流產(chǎn)或新生兒感染, 即先天性梅毒又稱胎傳梅毒。近年來, 胎傳梅毒的發(fā)病率有增高趨勢, 為更好的輔助臨床診療,本實(shí)驗(yàn)室用梅毒螺旋體酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(TPELISA)、甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)(TRUST)兩種方法對2080例患兒進(jìn)行血清學(xué)篩查, 陽性標(biāo)本再用梅毒螺旋體明膠凝集試驗(yàn)(TPPA)法復(fù)核, 當(dāng)結(jié)果可疑時, 做發(fā)光法TPPA再結(jié)合臨床癥狀, 總結(jié)出一套可行的對胎傳梅毒診斷的實(shí)驗(yàn)室方案。

梅毒螺旋體；胎傳梅毒；梅毒螺旋體明膠凝集試驗(yàn)；甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)；梅毒螺旋體酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)

梅毒(syphilis)的病原體為蒼白密螺旋體(treponema pallidum, TP)蒼白亞種, 又稱梅毒螺旋體, 有螺旋8～20個,體長6～20 μm, 寬0.15～0.25 μm, 運(yùn)動特征為彎曲移動, 繞軸運(yùn)動和前后伸縮運(yùn)動, 屬厭氧菌, 體外不易生存, 高溫、干燥,常用消毒劑均能將其致死, 但對潮濕和寒冷的耐受性很強(qiáng)。人體受感染后, 梅毒螺旋體很快播散到全身, 幾乎可侵犯全身各組織與器官, 臨床表現(xiàn)多種多樣, 且時顯時隱, 早期主要侵犯皮膚及黏膜, 晚期除侵犯皮膚和黏膜外, 還可侵犯心臟、血管及中樞神經(jīng)系統(tǒng)。

先天性梅毒即胎傳梅毒(congenital syphilis, CS)是指孕婦體內(nèi)梅毒螺旋體由胎盤垂直傳播給胎兒所致的一種感染。梅毒孕婦在妊娠內(nèi)梅毒螺旋體可通過胎盤及臍靜脈進(jìn)入胎兒體內(nèi), 引起胎兒在宮內(nèi)感染, 宮內(nèi)感染最早可發(fā)生在妊娠后7周, 但一般發(fā)生在4個月以后, 可引起流產(chǎn)、早產(chǎn)、死胎或分娩胎傳梅毒兒。此外, 病期2年以上的梅毒婦女妊娠后仍可傳染胎兒, 但傳染性比早期梅毒低。本文旨在針對幾種梅毒的實(shí)驗(yàn)室檢查方法, 研究出一套適合基層醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室的確診胎傳梅毒的方案, 為臨床提供更加及時有力的診斷依據(jù)?，F(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源 采集2013年1月～2014年6月鶴崗市人民醫(yī)院兒科及其他小兒外科0～6歲住院患兒的2080份血清標(biāo)本。

1.2 儀器與試劑 TRUST試劑購自上海榮盛生物公司, TP-ELISA試劑購自北京萬泰生物公司, TPPA試劑購自日本富士株式會社, 發(fā)光法TP用美國雅培公司試劑, 酶標(biāo)儀為安圖2010酶標(biāo)檢測系統(tǒng), 發(fā)光法TP檢測儀器為雅培IS2000SR免疫分析儀, 水平旋轉(zhuǎn)儀。

1.3 具體方法 所有患兒入院后采血先用TRUST、TPELISA法進(jìn)行篩查, TRUST為定性試驗(yàn), 嚴(yán)格按說明書操作, 在水平旋轉(zhuǎn)儀上振蕩8 min后判讀結(jié)果。TP-ELISA法用TPN15、TPN17、TPN47三種梅毒螺旋體重組抗原包原微幾板條, 同時包被抗人IgG和IgM免疫球蛋白, 標(biāo)本吸光度值＜臨界值(即cutoff值)為陰性, 而≥cutoff值判為陽性［1］。以上兩種方法有一種呈陽性反應(yīng)再用TPPA法復(fù)核, 當(dāng)TPPA判讀結(jié)果不好報告時用發(fā)光法測TP。

1.4 TPPA試驗(yàn) 按說明書操作, 每次做陰陽對照, 顆粒成紐扣狀聚集為陽性, 顆粒散在成片狀分布于板底為陰性。

1.5 觀察方法 以TPPA法結(jié)合臨床資料確診病例為金標(biāo)準(zhǔn), 計(jì)算TRUST、TP-ELISA、TPPA的敏感度和特異度, 以得出本室對胎傳梅毒患兒的檢測方案。

2 具體操作及結(jié)果

2080份標(biāo)本TP-ELISA法陽性標(biāo)本38份,38份標(biāo)本做TPPA試驗(yàn)35份陽性3份陰性,3份陰性標(biāo)本用發(fā)生法測TP陰性, 做WB試驗(yàn)也陰性故排除。35份陽性標(biāo)本做TRUST試驗(yàn), 同時囑其母親做TRUST試驗(yàn), 結(jié)果分類：①其中10例患兒TRUST滴度≥母親4倍, 可確認(rèn)為胎傳梅毒。②9例患兒TRUST (-), 囑其每3個月采血一次, 連續(xù)2次陰性者排除胎傳梅毒。③6例患兒TRUST (+)≤母親4倍, 且有癥狀,囑其規(guī)范性治療,18個月后做TPPA試驗(yàn)陽性(4例)確診,陰性(2例)排除。④3例患兒TRUST (+)≤母親4倍, 無癥狀,以后每三個月復(fù)查一次, 任何一次滴度不降而升, 可診斷胎傳梅毒。⑤3例患兒TRUST (+)≤母親4倍, 無癥狀, 每3個月復(fù)查一次TPPA試驗(yàn)到18個月齡, TPPA(+), 診斷胎傳梅毒。⑥4例患兒TRUST(+)≤母親4倍, 無癥狀, 每3個月復(fù)查TPPA試驗(yàn)到18個月, 任何一次TPPA(-), 可排除胎傳梅毒。即：2080份樣本, 跟蹤至18個月齡, 確認(rèn)胎傳梅毒17份,18份可疑病例經(jīng)預(yù)防性或規(guī)范治療后排除。胎傳梅毒患兒的發(fā)病率為0.8％, 孕婦梅毒感染率為1.8％。

3 討論

通過以上步驟對疑似胎傳梅毒患兒及其母親做相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)室檢查, 診斷方法簡單, 成本低, 易于開展, 總結(jié)歸納出以下三個方案。

3.1 方案一 胎兒父母親無梅毒病史, 患兒入院常規(guī)檢查TPPA試驗(yàn), 陰性可排除。

3.2 方案二 胎兒父母有一方有梅毒病史時, 有下列情況之一者可診斷為胎傳梅毒：①TRUST定量檢測滴度高于或等于母親滴度的4倍, 無論有無臨床癥狀都可診斷。②TRUST定量檢測低于母親的4倍, 每3個月進(jìn)行TRUST血清定量檢測, 任何一次滴度不下降反而上升, 即可診斷。③患兒第一次TRUST結(jié)果為陽性, 以后每3個月做TRUST試驗(yàn), 結(jié)果由陰轉(zhuǎn)陽時即可診斷。④患兒TPPA試驗(yàn)出生(+), 隨訪至18個月齡時仍為陽性, 無論有無癥狀, 無論TRUST陰陽都可診斷。

3.3 方案三 患兒父母有病史, 有下列情況之一時可排除胎傳梅毒。①TRUST定量檢測滴度低于母親滴度的4倍, 有臨床癥狀,18個月齡后TPPA陰性者可排除。②TRUST定量檢測低于母親4倍, 每3個月做TPPA任何一次轉(zhuǎn)陰即可排除。③TRUST陰性, 以后每3個月復(fù)檢TRUST試驗(yàn), 連續(xù)2次陰性, 排除診斷。

胎傳梅毒如能及時診斷和治療對胎兒有極大的保護(hù)作用, 目前免疫印跡法已成為梅毒血清學(xué)診斷的確診試驗(yàn)［1］,但由于一些基層醫(yī)院尚未開展, 作者研制的幾種方法聯(lián)合檢測對臨床也有極大的指導(dǎo)作用。

綜上所述, TP-ELISA實(shí)驗(yàn)適合大批樣品的初篩, 初篩陽性后做TPPA試驗(yàn), 要想確診是否是胎傳梅毒, 應(yīng)動態(tài)檢測TRUST和TPPA試驗(yàn), 結(jié)合臨床, 以便確診, 當(dāng)不能排除時,做相應(yīng)的預(yù)防性用藥, 以便觀察, 確診要及時規(guī)范用藥以便盡早治愈, 而且監(jiān)測時間至少到患兒月齡18個月。

［1］史偉峰, 王玉月, 鄭為平.免疫印跡法對中老年住院患者梅毒試驗(yàn)診斷的評價. 中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2009(5):571-573.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2015.05.029

2014-11-12］

154101 黑龍江省鶴崗市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科(朱瑞敏)；哈爾濱市人口和計(jì)劃生育技術(shù)服務(wù)中心(鐘華)