薩礎(chǔ)拉

(內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)蒙醫(yī)藥學(xué)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010110)

蒙醫(yī)藥學(xué)是祖國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)藥學(xué)中的組成部分之一。它吸納并借鑒了印度醫(yī)學(xué)、藏醫(yī)學(xué)、中醫(yī)學(xué)理論的精髓，經(jīng)蒙古族人民的長(zhǎng)期醫(yī)療實(shí)踐，而逐步形成的具有民族特色、地域特性、獨(dú)特理論體系及臨床特點(diǎn)的民族醫(yī)學(xué)［1］。其中蒙藥學(xué)研究具有悠久的歷史，據(jù)記載蒙藥學(xué)已有2800 多年的發(fā)展史［2］。

蒙藥復(fù)方為蒙醫(yī)治療疾病的主要臨床應(yīng)用形式，它的組方較中藥復(fù)方固定，且同樣按照君、臣、佐、使的組方原則，它是蒙醫(yī)辨證論治理論的具體體現(xiàn)。近年來(lái)，諸多學(xué)者從不同角度對(duì)蒙藥復(fù)方進(jìn)行了研究，主要集中在化學(xué)成分分離、成分的質(zhì)控、工藝、藥效及機(jī)制、臨床觀察研究等方面，而有關(guān)蒙藥復(fù)方有效物質(zhì)基礎(chǔ)研究則較少。毋庸置疑，蒙藥復(fù)方中，起到藥效作用的有效物質(zhì)無(wú)非是諸多化學(xué)成分。通過(guò)研究，探求蒙藥復(fù)方中有效物質(zhì)(有效組分、有效成分)，可揭示蒙藥復(fù)方配伍規(guī)律及作用機(jī)制，優(yōu)化制劑工藝，制定復(fù)方質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)而研發(fā)物質(zhì)、藥效及毒理、機(jī)制明確的創(chuàng)新藥物。因此，本文簡(jiǎn)要回顧了蒙藥復(fù)方有效物質(zhì)基礎(chǔ)研究的意義及概況，論述了蒙藥復(fù)方有效物質(zhì)基礎(chǔ)研究的新思路。為蒙藥現(xiàn)代化與國(guó)際化趨勢(shì)，本文提出蒙藥復(fù)方有效物質(zhì)基礎(chǔ)研究與創(chuàng)新藥物研究結(jié)合的觀點(diǎn)。

1 蒙藥復(fù)方有效物質(zhì)基礎(chǔ)研究的意義

蒙藥復(fù)方是由多種單味藥組成的藥物組合體。蒙藥復(fù)方的藥效作用是通過(guò)該特定的組合體里化學(xué)成分群作用于機(jī)體所產(chǎn)生的，即這些化學(xué)成分群是復(fù)方發(fā)揮藥效作用的物質(zhì)基礎(chǔ)。明確復(fù)方中有效物質(zhì)基礎(chǔ)，就可解釋蒙藥復(fù)方中到底哪個(gè)成分在起到藥效作用，化學(xué)成分間是怎么相互協(xié)同而作用于人體的。探求蒙藥復(fù)方中有效物質(zhì)(有效組分、有效成分)，才能對(duì)蒙藥進(jìn)行有效的提取、純化、優(yōu)化制劑工藝、制定復(fù)方質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，可揭示蒙藥復(fù)方配伍規(guī)律及作用機(jī)制，進(jìn)而研發(fā)物質(zhì)、藥效及毒理、機(jī)制明確的創(chuàng)新藥物。因此蒙藥復(fù)方物質(zhì)基礎(chǔ)研究是蒙藥現(xiàn)代化研究的重要前提和基礎(chǔ)。

2 蒙藥復(fù)方有效物質(zhì)基礎(chǔ)研究的現(xiàn)狀分析

目前蒙藥復(fù)方有效物質(zhì)基礎(chǔ)的研究，多集中在以復(fù)方中某個(gè)成分或某些單味藥的有效成分為指標(biāo)性成分，于體外水平上，對(duì)其進(jìn)行提取分離、定性及定量分析，或?qū)?duì)其進(jìn)行藥效跟蹤，證明其蒙藥復(fù)方有效。而將其蒙藥復(fù)方作為一個(gè)整體，以藥效/藥動(dòng)(PK/PD)為指標(biāo)，于體內(nèi)，對(duì)其進(jìn)行全面分析及藥效的追蹤，從而確定復(fù)方有效物質(zhì)的研究還未見(jiàn)報(bào)道。

2.1 以蒙藥復(fù)方中有效成分為指標(biāo)性成分進(jìn)行分析研究：該研究是以蒙藥復(fù)方中某一成分為指標(biāo)性成分，其中該指標(biāo)性成分均是在組方單味藥成分的已有研究工作的基礎(chǔ)上，確定分析的指標(biāo)性成分，采用多種分離及分析技術(shù)對(duì)其進(jìn)行研究工作。如：馬強(qiáng)等人［3］采用反相色譜法，建立同時(shí)測(cè)定蒙藥復(fù)方述達(dá)格-4 中高良姜素、山奈素的含量測(cè)定方法，所建立的方法準(zhǔn)確、可行、簡(jiǎn)便，具有良好的重復(fù)性，可為蒙藥復(fù)方述達(dá)格-4 質(zhì)量控制提供依據(jù)。楊婷等人［4］采用紫外可見(jiàn)分光光度法，建立了蒙藥復(fù)方協(xié)日嘎-4 中總酚酸的含量測(cè)定方法。結(jié)果所建立的方法簡(jiǎn)便、靈敏、準(zhǔn)確，可用于復(fù)方協(xié)日嘎-4 中總酚酸的含量測(cè)定。

另外，還有部分學(xué)者，考察蒙藥復(fù)方不同配伍后，于體外，對(duì)指標(biāo)性成分含量的變化影響。巴根那等人［5］以蒙藥順氣湯主藥大黃總蒽醌為指標(biāo)，設(shè)計(jì)4 種不同配伍組，采用分光光度法測(cè)定其水煎煮液中溶出的總蒽醌含量。結(jié)果顯示，全方下的總蒽醌含量要高出其他配伍組。董玉等人［6］采用液相色譜法和紫外分光光度法測(cè)定蒙藥森登-4 復(fù)方不同配伍中總黃酮和楊梅素的含量，通過(guò)對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，研究森登-4 不同藥味組合與總黃酮和楊梅素含量之間的關(guān)系。結(jié)果表明，全方組中總黃酮和楊梅素的提取量較高，而梔訶組中兩者的提取量較低。森登-4 不同藥味配伍的總黃酮和楊梅素溶出具有顯著性差異。

2.2 在病理模型下，以藥效為指標(biāo)，追蹤蒙藥復(fù)方有效物質(zhì)基礎(chǔ)。本研究即根據(jù)臨床療效，建立合理的病理模型，確定一種或多種藥效作用的觀測(cè)與評(píng)判指標(biāo)，然后對(duì)復(fù)方及各有效組分(有效成分)進(jìn)行活性追蹤。如：宋葆華等人［7］采用D-半乳糖所致衰老模型大鼠，灌服德都紅花-7 味散42 天，測(cè)定大鼠肝線粒體內(nèi)丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、過(guò)氧化氫酶(CAT)、還原型谷胱甘肽(GSH)、一氧化氮(NO)含量。結(jié)果顯示：德都紅花-7 味散能抑制肝線粒體內(nèi)MDA 的生成，恢復(fù)SOD 的活力。德都紅花-7味散能提高衰老模型大鼠肝線粒體抗氧化能力，改善線粒體能量代謝，具有抗衰老作用。趙多明等人［8］將健康成年大鼠隨機(jī)分為3 組：假手術(shù)組、缺血再灌注模型組、白脈散組。術(shù)前灌胃給藥7d，末次給藥30min 后，采用改良的線栓法制作大鼠大腦中動(dòng)脈閉塞再灌注(MCAO)模型。蘇醒后對(duì)其神經(jīng)功能進(jìn)行評(píng)分，缺血2h 再灌注24h 后觀察病灶處病理學(xué)變化，測(cè)定腦勻漿上清超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、還原型谷胱甘肽含量、一氧化氮合酶(NOS)活性等。結(jié)果與模型組比較，蒙藥復(fù)方白脈散組病灶處皮層神經(jīng)元腫脹壞死有所減輕，腦勻漿上清SOD 活性和GSH 含量明顯升高，MDA 含量顯著降低，T-NOS、iNOS、cNOS 活性均明顯降低，蒙藥復(fù)方白脈散對(duì)大鼠局灶性腦缺血有明顯的保護(hù)作用，其機(jī)制可能是通過(guò)有效的拮抗自由基損傷，提高腦組織抗氧化能力來(lái)實(shí)現(xiàn)的。如上研究只是證明了蒙藥復(fù)方的有效性，但是并沒(méi)有探究復(fù)方中發(fā)揮藥效的物質(zhì)基礎(chǔ)。

3 關(guān)于蒙藥復(fù)方有效物質(zhì)基礎(chǔ)研究的新思路

3.1 建立蒙藥復(fù)方血中各移行成分血清指紋圖譜，分析其“類藥成分”。1989年，日本學(xué)者田代真一提出了“血清藥物化學(xué)”的概念［9］。在此基礎(chǔ)上，1994年日本學(xué)者鹿野美弘和我國(guó)王喜軍、王莎莎等人發(fā)表了有關(guān)茵陳蒿的血中移行成分及藥代動(dòng)力學(xué)研究、口服遠(yuǎn)志提取物后血清及膽汁中活性成分分析的研究論文，使血清藥物化學(xué)的工作被真正付諸實(shí)踐。而蒙藥復(fù)方血清藥物化學(xué)研究仍停留在起步階段。

依據(jù)“血清藥物化學(xué)”的理念，我們可以建立蒙藥復(fù)方血中各移行成分血清指紋圖譜，在全面分析蒙藥復(fù)方入血成分、分析其“類藥成分”(類藥成分即有效物質(zhì)的前體，疑似有效物質(zhì))。應(yīng)用血清藥物化學(xué)進(jìn)行研究時(shí)，現(xiàn)在多是對(duì)復(fù)方整體和各個(gè)單味藥的體內(nèi)外成分進(jìn)行對(duì)比分析研究，找出了移行成分、來(lái)源生藥及其代謝產(chǎn)物，這能為復(fù)方有效物質(zhì)基礎(chǔ)的研究奠定基礎(chǔ)［10］。

3.2 在特定病理模型下，分析蒙藥復(fù)方各成分體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)過(guò)程(PK)，考察復(fù)方中各成分間的協(xié)同作用及機(jī)制。在中藥復(fù)方化學(xué)研究(有效物質(zhì)基礎(chǔ)研究)中，由于研究角度不同，國(guó)內(nèi)外學(xué)者，都有很多種不同的思路和方法。其中，付建華、劉建勛［11］等認(rèn)為中藥復(fù)方有效物質(zhì)基礎(chǔ)是中醫(yī)“證”與病相結(jié)合的有效成分，其研究思路是在中醫(yī)藥理論與現(xiàn)代藥理論共同指導(dǎo)下，以臨床療效為基礎(chǔ)，建立動(dòng)物、器官和細(xì)胞模型深入研究，最終闡明中藥復(fù)方有效物質(zhì)基礎(chǔ)。筆者在已發(fā)表論文中也已強(qiáng)調(diào)：在研究復(fù)方有效物質(zhì)基礎(chǔ)時(shí)，病理模型的重要性［12］。因此，蒙藥復(fù)方有效物質(zhì)基礎(chǔ)研究也同樣在合理的病理模型下進(jìn)行各項(xiàng)研究。

藥動(dòng)學(xué)(Pharmacokinetics，PK)是借助動(dòng)力學(xué)原理，研究血中成分的體內(nèi)吸收、分布、代謝和排泄的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律及其體內(nèi)時(shí)量、時(shí)效關(guān)系的學(xué)科。此前，在分析血清中蒙藥復(fù)方的“類藥成分”的基礎(chǔ)上，對(duì)其進(jìn)行藥動(dòng)學(xué)研究，分析蒙藥復(fù)方各成分體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)過(guò)程。通過(guò)分析藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，評(píng)價(jià)復(fù)方中各成分間的協(xié)同效應(yīng)，找到復(fù)方中各成分間的關(guān)系，從而繼續(xù)深入研究成分間的協(xié)同效應(yīng)機(jī)制，如：以細(xì)胞膜上的各種藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體或代謝酶系為切入點(diǎn)，研究揭示成分間的協(xié)同效應(yīng)機(jī)制［13-16］。但是在研究復(fù)方體內(nèi)過(guò)程中，也受諸多因素的制約，多可檢測(cè)的有效成分在復(fù)方中的含量低，其血、尿和組織中的濃度更低，以至于難以檢測(cè)，要求檢測(cè)方法有足夠的靈敏度;與被檢測(cè)物在化學(xué)結(jié)構(gòu)相似的類似物多樣，多種藥味的配伍影響，生物樣品中的內(nèi)源性雜質(zhì)、降解產(chǎn)物、被吸收入血的其它成分等，均可能干擾被測(cè)成分的分離，也增加了生物樣品測(cè)定的方法學(xué)難度。

3.3 在特定病理模型下，根據(jù)藥動(dòng)學(xué)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行藥效學(xué)追蹤(PD)，考察復(fù)方中各成分間的協(xié)同作用及機(jī)制采用特定的病理模型，根據(jù)藥代曲線結(jié)果，選擇不同藥效時(shí)間點(diǎn)，分別應(yīng)用藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)，對(duì)其復(fù)方進(jìn)行藥效學(xué)追蹤，為PK/PD關(guān)聯(lián)性分析提供PD 數(shù)據(jù)。本研究成功的關(guān)鍵在于活性指標(biāo)的選擇。因此，應(yīng)密切結(jié)合整體、組織器官、細(xì)胞和分子生物學(xué)等多個(gè)水平建立藥效篩選體系，根據(jù)藥動(dòng)學(xué)時(shí)間點(diǎn)對(duì)復(fù)方進(jìn)行藥效學(xué)追蹤。

3.4 建立藥動(dòng)/藥效(PK/PD)模型，對(duì)其進(jìn)行關(guān)聯(lián)性分析，確定蒙藥復(fù)方中有效物質(zhì)。藥動(dòng)學(xué)(Pharmacokinetics，PK)和藥效學(xué)(Pharmacodynamics，PD)是按時(shí)間同步進(jìn)行的兩個(gè)密切相關(guān)的動(dòng)力學(xué)過(guò)程，前者著重闡明機(jī)體對(duì)藥物的作用，后者描述藥物對(duì)機(jī)體的作用。二者結(jié)合有助于闡明藥物濃度-效應(yīng)-時(shí)間的關(guān)系，定量的反映藥物濃度與效應(yīng)的關(guān)系。PK/PD 模型自1979年建立以來(lái)被廣泛應(yīng)用于化學(xué)藥物理論研究和臨床應(yīng)用領(lǐng)域，還為發(fā)現(xiàn)其真正的有效物質(zhì)基礎(chǔ)，新藥創(chuàng)制奠定了基礎(chǔ)。PK/PD 模型的一般研究步驟為：①選取合適的藥動(dòng)學(xué)指標(biāo)進(jìn)行藥動(dòng)學(xué)研究，闡明體內(nèi)藥物濃度隨時(shí)間的變化規(guī)律;②選取合適的藥效學(xué)指標(biāo)，判斷藥效作用產(chǎn)生的部位和方式，并獲得相應(yīng)的效應(yīng)隨時(shí)間變化的規(guī)律;③了解效應(yīng)室中藥物濃度與效應(yīng)之間的定量轉(zhuǎn)換關(guān)系，獲得定量轉(zhuǎn)換公式;④將轉(zhuǎn)換公式與原藥動(dòng)學(xué)模型的效應(yīng)室聯(lián)系起來(lái)，構(gòu)成統(tǒng)一的PK/PD 模型。求得動(dòng)學(xué)與藥效學(xué)參數(shù)，進(jìn)行血藥濃度與藥效間定量關(guān)系的預(yù)測(cè)。對(duì)于蒙藥復(fù)方，多成分多靶點(diǎn)PK/PD 模型的建立，復(fù)方多成分多靶點(diǎn)的PK/PD 數(shù)據(jù)量龐大，數(shù)據(jù)間關(guān)系復(fù)雜，如何整合這些繁雜的數(shù)據(jù)得到復(fù)方的藥動(dòng)學(xué)特征，并建立模型，與效應(yīng)指標(biāo)形成關(guān)聯(lián)成為研究的難點(diǎn)。今年來(lái)研究人員將人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)應(yīng)用于PK/PD 模型的建立為解決這一問(wèn)題而開(kāi)辟了新的道路。

4 蒙藥復(fù)方有效物質(zhì)基礎(chǔ)研究與創(chuàng)新藥物研究的結(jié)合

蒙醫(yī)治療疾病的優(yōu)勢(shì)與特色主要是通過(guò)蒙藥復(fù)方來(lái)體現(xiàn)的。目前蒙藥復(fù)方還滯留在原始制劑，粗提制劑的水平上，研發(fā)出有效物質(zhì)明確、藥效毒理及機(jī)制明確、安全可控的蒙藥復(fù)方是蒙藥現(xiàn)代化及創(chuàng)新的必要途徑。因此，本文提出蒙藥復(fù)方有效物質(zhì)基礎(chǔ)的研究與創(chuàng)新藥物研究結(jié)合的觀點(diǎn)。

蒙藥復(fù)方原始制劑及粗提制劑治療某一病癥時(shí)，是諸多化學(xué)成分群協(xié)同效應(yīng)的結(jié)果，但并非全部化學(xué)成分都在起到藥效作用。如果按照本文研究蒙藥復(fù)方有效物質(zhì)基礎(chǔ)研究的新思路，探明復(fù)方中治療病癥的某一有效組分或有效成分，研制出創(chuàng)新藥物，既不違背蒙醫(yī)基礎(chǔ)理論，又能剔除復(fù)方中雜質(zhì)或無(wú)用成分，從而優(yōu)化，簡(jiǎn)化復(fù)方中的有效物質(zhì)，使藥效作用更加突出明確。得到明確的復(fù)方有效物質(zhì)，可對(duì)其進(jìn)行工藝優(yōu)化、新劑型的研發(fā)、建立科學(xué)的安全性及質(zhì)量控制評(píng)價(jià)體系。以上每個(gè)環(huán)節(jié)，對(duì)于蒙藥復(fù)方均是一種創(chuàng)新，只有這樣的創(chuàng)新藥物才可與其他民族藥物一同進(jìn)入現(xiàn)代化及國(guó)際化進(jìn)程。

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