朱潔 王辛 馬茜 王愛紅

急性腦缺血大鼠外周血T淋巴細胞亞群變化及其與腦梗死體積的相關性

朱潔 王辛 馬茜 王愛紅

腦缺血；T淋巴細胞亞群；腦梗死體積；外周免疫抑制

腦組織長期缺血缺氧會導致腦組織損傷。腦卒中不僅影響中樞神經系統(tǒng)，亦會對外周免疫系統(tǒng)產生影響。腦卒中誘導的外周免疫抑制綜合征(stroke-induced immunodeficiency syndrome，SIDS)主要表現(xiàn)為外周血T淋巴細胞免疫功能下降[1]。腦缺血后外周血T淋巴細胞亞群水平與腦組織損傷程度是否具有相關性目前研究尚少。本研究擬測定腦缺血大鼠腦梗死面積百分比、神經功能評分、外周血T淋巴細胞亞群水平，并對其相關性進行初步探討。

1 材料和方法

1.1 材料 雄性SD大鼠23只，體質量280～320 g，由南京中醫(yī)藥大學實驗動物中心提供〔合格證編號：SCXK(浙)2008-0033〕，自由飲水和進食。 2，3，5-三苯基氯化四氮唑(2, 3,5-triphenyltetrazolium chloride，TTC；美國Sigma公司)；Anti-rat CD3(APC；美國eBioscience)，Anti-rat CD4/CD8(FITC/PE；美國Biolegend)；流式細胞儀(FC500MPL，美國Beckman)。

1.2 方法 大鼠隨機分為假手術組和模型組，每組10只。模型組參照Longa等[2]線栓法制作右側大腦中動脈阻塞模型，假手術組只分離血管，不插線栓，其余步驟同模型組。模型組術后清醒時評分為0分和4分的大鼠為造模不成功，予以剔除，剔除后用相同方法造模補足，確保造模成功大鼠10只入組。分別于術后清醒時、術后24 h、72 h采用Bederson等[3]的5級4分法評定大鼠神經功能缺損情況；分別于術后24 h、72 h， 經大鼠眼眶采血，采用流式細胞儀檢測外周血T淋巴細胞亞群CD3+、CD4+、CD8+水平變化情況；于術后72 h，將大鼠斷頭取腦，采用TTC染色觀察腦梗死灶大小，并用腦梗死面積百分比表示，腦梗死面積百分比=(梗死面積/對側半腦面積)×100%。對模型組腦梗死面積百分比與T淋巴細胞亞群的相關性，神經功能評分與腦梗死面積百分比以及神經功能評分與T淋巴細胞亞群的相關性進行分析。

1.3 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 16.0軟件進行分析。腦梗死面積百分比、外周血CD3+、CD4+、CD8+水平及CD4+/CD8+比值采用均數(shù)±標準差表示，組間比較采用兩組獨立樣本t檢驗；神經功能評分以中位數(shù)(上、下四分位數(shù))表示，組間比較采用Mann-WhitneyU檢驗。神經功能評分與T淋巴細胞亞群的相關性及神經功能評分與腦梗死面積百分比的相關性分析采用Spearman相關分析；腦梗死面積百分比與T淋巴細胞亞群的相關性分析采用Pearson相關分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 腦梗死面積百分比、神經功能評分及外周血T淋巴細胞亞群變化 假手術組無梗死灶和神經功能缺損表現(xiàn)。模型組術后出現(xiàn)了梗死灶和神經功能缺損表現(xiàn)，術后72 h，模型組腦梗死面積百分比為(18.19±8.10)%；模型組神經功能評分術后24 h為2(2，2)，術后72 h為2(1，2)。

術后24 h模型組外周血CD4+水平和CD4+/CD8+比值較假手術組明顯下降(分別P<0.05，P<0.01)；CD3+水平減低，CD8+水平升高，但差異無統(tǒng)計學意義(均P>0.05)；術后72 h模型組外周血CD3+、CD4+水平和CD4+/CD8+比值較假手術組明顯下降，CD8+水平明顯上升(均P<0.01)(表1)。

2.2 模型組外周血T淋巴細胞亞群、神經功能評分及腦梗死面積百分比的相關性 術后72 h，神經功能評分與CD8+水平呈明顯正相關(r=0.646，P=0.044)，與CD3+、CD4+水平及CD4+/CD8+比值無明顯相關性(r=0.114，P=0.754；r=-0.610，P=0.061；r=-0.553，P=0.112)；神經功能評分與腦梗死面積百分比呈明顯正相關(r=0.646，P=0.044)； 腦梗死面積百分比與CD8+水平呈明顯正相關(r=0.934，P=0.000)，與CD4+水平及CD4+/CD8+比值呈明顯負相關(分別r=-0.974、r=-0.959，均P=0.000)，與CD3+水平無明顯相關性(r=0.216，P=0.549)。

3 討論

既往研究顯示，SIDS可能是機體保護中樞神經系統(tǒng)的策略[4]，但SIDS卻增加了感染的發(fā)生率，而感染是導致腦卒中患者死亡的主要并發(fā)癥[5]。SIDS主要表現(xiàn)為外周血T淋巴細胞免疫功能下降[1]。CD4+和CD8+T細胞是T淋巴細胞中功能相異的兩個亞群，CD4+T細胞具有誘導和輔助細胞免疫和體液免疫的作用；CD8+T細胞則抑制細胞免疫和體液免疫。CD4+/CD8+比值能初步評估機體免疫狀態(tài)，比值降低提示免疫功能受損，是機體病變程度和預后不良的重要標志之一。本研究顯示腦缺血后24 h、72 h外周血CD3+、CD4+水平及CD4+/CD8+比值下降，CD8+水平上升，這與既往研究一致[1]，提示腦缺血后T細胞免疫功能下降，外周免疫抑制明顯。

目前，腦缺血后腦損傷程度與外周血T淋巴細胞亞群的關系尚不明確，本研究旨在通過分析腦缺血大鼠神經功能評分、腦梗死面積百分比與外周血CD3+、CD4+、CD8+水平、CD4+/CD8+比值的相關性來探索腦缺血后腦損傷程度與外周血T淋巴細胞亞群的關系。結果顯示，模型組大鼠神經功能評分與CD8+水平及腦梗死面積百分比均呈正相關，腦梗死面積百分比與CD8+水平呈正相關，與CD4+水平及CD4+/CD8+比值呈負相關；這與Hug 等[6]的研究一致。這提示外周血T淋巴細胞亞群、神經功能缺損程度及腦梗死灶大小之間存在一定相關性，可能為臨床協(xié)助評估缺血性腦卒中病情、預測患者預后提供一定幫助。

[1]Gu LJ, Xiong XX, Wei D, et al. T cells contribute to stroke-induced lymphopenia in rats[J]. PLoS One, 2013, 8(3): e59602.

[2]Longa EZ, Weinstein PR, Carlson S, et al. Reversible middle cerebral artery occlusionwithout craniotomy in rats[J].Stroke,1989,20(1):84-91.

[3]Bederson JB, Pitts LH, Tsuji M, et al. Rat middle cerebral artery occlusion: evaluation of the model and development of a neurologic examination[J].Stroke, 1986, 17(3):472-476.

[4]張雷,陸正齊.腦梗死的免疫學研究進展[J].中國神經免疫學和神經病學雜志，2013，20(5)：356-359.

[5]Joseph K, Ruth MP,Dorit K, et al. Impact of stroke-associated infection on long-termsurvival: a cohort study[J]. J Neurol Neurosurg Psychiatry，2013， 84:297-304.

[6]Hug A, Dalpke A, Wieczorek N, et al. Infarct volume is a major determiner of post-stroke susceptibility to infection[J]. Stroke, 2009, 40(10): 3226-3232.

(本文編輯：鄒晨雙)

10.3969/j.issn.1006-2963.2015.04.017

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