王健健 陳麗霞 張薈雪 李杰 王麗華

多發(fā)性硬化（multiple sclerosis，MS）是以中樞神經(jīng)系統(tǒng)白質(zhì)炎性脫髓鞘病變?yōu)橹饕攸c(diǎn)的自身免疫疾病。MS的發(fā)病與免疫、遺傳和環(huán)境等多種因素有關(guān)。越來(lái)越多的證據(jù)顯示基因的多態(tài)性在MS發(fā)病機(jī)制中占了重要地位。細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4（cytotoxic T－lymphocyte－associated antigen－4，CTLA－4）主要表達(dá)于激活的 T細(xì)胞，通過(guò)與B7分子結(jié)合產(chǎn)生抑制性信號(hào)，下調(diào)或終止T細(xì)胞活化［1］。CTLA－4基因是自身免疫疾病重要的候選基因，目前已有大量關(guān)于CTLA－4＋49A／G多態(tài)性與 MS相關(guān)的研究，但結(jié)果并不一致。因此本研究采用meta分析方法，對(duì)目前國(guó)內(nèi)外可檢索到的CTLA－4＋49A／G多態(tài)與MS相關(guān)的數(shù)據(jù)進(jìn)行合并分析，探討CTLA－4＋49A／G多態(tài)與MS的相關(guān)性。

1 材料和方法

1.1 文獻(xiàn)檢索 使用“multiple sclerosis”、“cytotoxic T lymphocyte－associated antigen 4”、“CTLA－4”、“CTLA4”等4個(gè)關(guān)鍵詞在 PubMed檢索CTLA－4＋49A／G與MS的相關(guān)性研究。文獻(xiàn)檢索時(shí)間從建庫(kù)至2013－09期間。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn) 文獻(xiàn)納入標(biāo)準(zhǔn):（1）CTLA－4＋49A／G多態(tài)與MS相關(guān)的病例－對(duì)照研究；（2）MS的診斷符合目前國(guó)內(nèi)外公認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn)（1983年P(guān)oser診斷標(biāo)準(zhǔn)或2001年McDonald診斷標(biāo)準(zhǔn)）；（3）研究對(duì)象為人群，種族不限；（4）文獻(xiàn)中能提取病例組和對(duì)照組基因型和（或）等位基因頻數(shù)。（5）納入文獻(xiàn)語(yǔ)種和人群不限。當(dāng)一篇文獻(xiàn)報(bào)道不同人群時(shí)，則分別作為單獨(dú)的研究。排除標(biāo)準(zhǔn):（1）重復(fù)研究；（2）對(duì)照組不符合 HW遺傳平衡；（3）以家庭成員為對(duì)照，主要研究傳遞不平衡。（4）不能提取病例組和對(duì)照組基因型及等位基因頻數(shù)。

1.3 文獻(xiàn)質(zhì)量評(píng)價(jià) 由兩名研究者獨(dú)立篩選文獻(xiàn)及提取數(shù)據(jù)，隨后交叉核對(duì)，如有爭(zhēng)議協(xié)商后再?zèng)Q定。提取數(shù)據(jù)包括:文獻(xiàn)的第一作者、發(fā)表時(shí)間、研究對(duì)象的國(guó)家及種族、研究例數(shù)、等位基因及基因型頻數(shù)、基因分型方法。文獻(xiàn)質(zhì)量評(píng)估主要包括以下幾方面:（1）研究是否存在偏倚及是否對(duì)偏倚進(jìn)行討論；（2）研究設(shè)計(jì)是否嚴(yán)謹(jǐn)科學(xué)；（3）統(tǒng)計(jì)方法是否正確；（4）研究對(duì)象的篩選是否嚴(yán)格；（5）實(shí)驗(yàn)方法是否可靠。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 （1）對(duì)納入研究的基因型分布采用H－W遺傳平衡檢驗(yàn)；（2）發(fā)表偏倚采用漏斗圖評(píng)價(jià)，應(yīng)用Stata11.0進(jìn)行Begg’s檢驗(yàn)評(píng)估漏斗圖的對(duì)稱(chēng)性。（3）采用RevMan4.2統(tǒng)計(jì)軟件計(jì)算各個(gè)研究的CTLA－4基因G／A、GG＋GA／AA、GG／GA＋AA的OR值及95%CI。（4）Cochran’s Q檢驗(yàn)評(píng)估研究間的異質(zhì)性，若各研究間無(wú)異質(zhì)性（I2≤50%，P≥0.1），則采用固定效應(yīng)模型分析；若研究間有異質(zhì)性（I2＞50%，P＜0.1），則采用隨機(jī)效應(yīng)模型分析。

2 結(jié)果

2.1 納入文獻(xiàn) 根據(jù)納入與排除標(biāo)準(zhǔn)，共有23篇文獻(xiàn)納入meta分析，包括25個(gè)MS病例－對(duì)照研究，其中20個(gè)研究人群是高加索人，5個(gè)研究人群是亞洲人［2－24］。Stuart等（2007）［2］的研究人群種族不明確，故排除。Meta分析中納入研究的CTLA－4＋49A／G多態(tài)性檢測(cè)方法包括:限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)－聚合酶鏈反應(yīng)（PCR－RFLP）、序列特異性引物－聚合酶鏈反應(yīng)（PCR－SSP）、變性毛細(xì)管電泳（DCE）、單鏈構(gòu)象多態(tài)性（SSCP）。納入文獻(xiàn)的一般情況、基因型及等位基因頻數(shù)見(jiàn)表1。

2.2 文獻(xiàn)質(zhì)量評(píng)估及基因多態(tài)性分析 結(jié)果見(jiàn)表2。Begg’s檢驗(yàn)結(jié)果提示不存在發(fā)表偏倚（P＝0.847）。25個(gè)研究的異質(zhì)性檢驗(yàn)顯示CTLA4＋49各研究基因型結(jié)果無(wú)異質(zhì)性〔G／A（I2＝26.60%，P＝0.11）、GG＋GA／AA（I2＝25.80%，P＝0.12）和 GG／GA＋AA（I2＝0.00%，P＝0.47）〕。根據(jù)研究人群構(gòu)成，分為高加索和亞洲人群兩個(gè)亞組。Meta分析顯示各亞組間均無(wú)異質(zhì)性（I2＜50%，P＞0.1），25個(gè)研究及亞組中各基因型的比較均采用固定效應(yīng)模型進(jìn)行數(shù)據(jù)合并。

25個(gè)研究合并后，G／A、GG＋GA／AA、GG／GA＋AA合并的OR值分別為1.00（95%CI為0.96～1.06，P＝0.91）、1.01（95%CI為0.93～1.10，P＝0.73）、0.99（95%CI 為0.88～1.10，P＝0.81）。亞組分析中，高加索人群的研究合并后，G／A、GG＋GA／AA、GG／GA＋AA合并的OR值分別為1.00（95%CI為0.94～1.06，P＝0.99）、0.99（95%CI 為 0.91～1.08，P＝0.85）、1.01（95%CI為0.90～1.14，P＝0.83）。亞洲人群的研究合并后，G／A、GG＋GA／AA、GG／GA＋AA合并的 OR 值分別為1.03（95%CI 為0.87～1.22，P＝0.73）、1.22（95%CI 為0.95～1.57，P＝0.12）、0.83（95%CI為0.61～1.12，P＝0.22）（表2）。

表1 納入文獻(xiàn)的一般情況、基因型及等位基因頻數(shù)

表2 CTLA－4＋49A／G與MS相關(guān)性的meta分析結(jié)果

3 討論

目前普遍認(rèn)為MS主要是T細(xì)胞介導(dǎo)的以中樞神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘為特點(diǎn)的自身免疫性疾病，遺傳易感性和環(huán)境因素共同參與疾病。MS的一級(jí)親屬的受累風(fēng)險(xiǎn)增加20～40倍。這表明遺傳易感性在MS的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮重要的作用。CTLA－4基因是自身免疫疾病重要的候選基因，其編碼的蛋白CTLA－4主要在T細(xì)胞表面表達(dá)，通過(guò)結(jié)合APC表面的B7分子抑制T細(xì)胞的激活，并且參與T細(xì)胞的外周耐受性。

當(dāng)前CTLA－4基因的熱點(diǎn)多態(tài)＋49A／G多態(tài)為外顯子1第49位A突變?yōu)镚，＋49A／G多態(tài)導(dǎo)致前導(dǎo)肽第17個(gè)密碼子處丙氨酸替代蘇氨酸。最近的meta分析顯示CTLA－4＋49A／G與類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、1型糖尿病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等自身免疫病相關(guān)［25］。2000年 Kouki等［26］研究發(fā)現(xiàn) CTLA－4＋49G與Graves病患者T細(xì)胞表面的CTLA－4低表達(dá)相關(guān)，因此推測(cè)潛在的致病機(jī)制可能是CTLA－4＋49位A突變?yōu)镚后，T細(xì)胞表面的CTLA－4表達(dá)降低，導(dǎo)致其對(duì)T細(xì)胞的抑制作用減弱，大量激活的T細(xì)胞直接攻擊中樞髓鞘而導(dǎo)致MS發(fā)病 。本研究通過(guò)合并25個(gè)CTLA－4＋49A／G與 MS相關(guān)研究的數(shù)據(jù)，meta分析發(fā)現(xiàn)CTLA－4＋49A／G與MS無(wú)相關(guān)性，但這不能排除其在MS遺傳易感性中發(fā)揮的作用。目前dbSNP數(shù)據(jù)庫(kù)收錄的人的CTLA－4基因的SNP共有218個(gè)，不能排除這些SNP與CTLA－4＋49A／G連鎖不平衡，這些復(fù)雜的連鎖不平衡關(guān)系可能與MS的發(fā)病機(jī)制相關(guān)，這一推測(cè)需要進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。

值得注意的是，Mkhikian等［27］發(fā)現(xiàn)調(diào)控糖基化蛋白上N－聚糖鏈長(zhǎng)度的 MGAT1基因變異（rs7726005、rs2070924、rs2070925）與 MS相關(guān)，攜帶MGAT1基因變異的MS患者細(xì)胞表面CTLA－4的N－糖基化程度下降，CTLA－4低糖基化對(duì)T的抑制作用減弱。通過(guò)抑制MGAT1基因變異來(lái)增強(qiáng)CTLA－4的N－糖基化可緩解MS患者的癥狀。因此，MGAT1和CTLA－4基因變異的連鎖不平衡可能在MS發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮重要的作用，這一假設(shè)為今后的實(shí)驗(yàn)證實(shí)提供了理論基礎(chǔ)。

由于基因多態(tài)性具有種族差異，進(jìn)一步分析將納入的人群分為高加索和亞洲兩個(gè)亞組，結(jié)果顯示CTLA－4＋49A／G與高加索和亞洲人均無(wú)相關(guān)性。由于本研究中亞洲人群的研究數(shù)量相對(duì)較少，使其meta分析結(jié)果可信度降低。因此，CTLA－4＋49A／G多態(tài)性與MS的遺傳關(guān)聯(lián)性仍需更大樣本量、更加合理全面的多個(gè)人群研究來(lái)證實(shí)。

本研究通過(guò)meta分析發(fā)現(xiàn)CTLA－4＋49A／G與MS無(wú)相關(guān)性，與GWAS的結(jié)果是一致的［1］。但這不能排除CTLA－4＋49A／G在MS發(fā)病機(jī)制中的作用，進(jìn)一步研究需探討CTLA－4＋49A／G與其他遺傳變異的連鎖不平衡機(jī)制，CTLA－4＋49A／G與其他基因的遺傳變異的連鎖不平衡也可能在MS的發(fā)病機(jī)制相關(guān)中發(fā)揮重要的作用。

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