■邱淑敏 陳 濤 李龍飛 劉美玲 漢麗梅

（沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)，遼寧沈陽 110866）

中藥是歷史悠久資源豐富的純天然有機物質(zhì)，隨著飼料工業(yè)的發(fā)展，中藥添加劑也隨之進入了快速發(fā)展階段。由于中藥內(nèi)既含有豐富的營養(yǎng)成分，又含有多種生物活性物質(zhì)，因此，其在為動物補充營養(yǎng)的同時，還具有防治疾病和促進動物健康生長的作用[1]。中藥作為飼料添加劑，具有營養(yǎng)性和藥物性的雙重作用[2]，即可有效抑菌殺菌，有助于改善機體腸道菌群的平衡[3]，對免疫器官的發(fā)育、白細胞及單核-巨嗜細胞系統(tǒng)、細胞免疫、體液免疫、細胞因子的產(chǎn)生等方面均有促進作用，并因此提高機體的非特異性免疫能力[4]。有些中藥還可以通過有效調(diào)節(jié)機體生理功能、調(diào)節(jié)緩和激原、防止免疫器官萎縮等，而起到抗應(yīng)激的作用[5]。此外，有些中草藥還能起到某種維生素的功能作用，如小茴香具有維生素A樣作用；川芎、當(dāng)歸等具有維生素E樣作用；黃芪、陳皮、蕎麥秸等具有維生素P樣作用。

研究發(fā)現(xiàn)，結(jié)合中草藥本身的特性，根據(jù)中草藥配伍原則，在中獸醫(yī)理論的指導(dǎo)下，將中草藥有目的配伍起來進行應(yīng)用，使其具有藥效互補、協(xié)同作用、療效增強、減少不良作用等優(yōu)點，因此中藥復(fù)方的研制方面近年來備受重視。有研究表明中藥復(fù)方制劑可以通過促進腸道有益菌生長和抑制有害菌繁殖，而有效提高腸道健康，促進機體生長，起到提高機體免疫力、抗病毒、抗應(yīng)激等作用效果[6-11]。本研究應(yīng)用建立雞MD腫瘤模型，分別飼喂添加以茯苓、白術(shù)等中藥為主的不同中藥復(fù)方制劑，統(tǒng)計不同處理組蛋雛雞的發(fā)病率及死亡率，并觀察雛雞血清中抗氧化指標(biāo)及各種細胞因子的變化，從而探討中藥復(fù)方對雛雞抗病毒能力及免疫性能的影響，以期為中藥復(fù)方制劑在動物養(yǎng)殖生產(chǎn)中的應(yīng)用，生產(chǎn)無毒副作用、無藥物殘留的動物性食品，避免抗生素濫用帶來的嚴(yán)重環(huán)境污染等提供方案。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗動物1日齡海蘭褐蛋雛雞由本校試驗場提供，MD-京1株血毒（本研究保存）；白術(shù)、茯苓等中藥均購自各藥房；玉米-豆粕型無抗基礎(chǔ)日糧來自禾豐牧業(yè)有限公司；總超氧化物歧化酶（T-SOD）測定試劑盒、丙二醛（MDA）測定試劑盒：南京建成試劑公司產(chǎn)品；雞白細胞介素2（IL-2）酶聯(lián)免疫分析測試盒、雞腫瘤壞死因子α（TNF-α）酶聯(lián)免疫分析測試盒、雞干擾素γ（IFN-γ）酶聯(lián)免疫分析測試盒，IBL分裝產(chǎn)品。

1.2 方法

1.2.1 試驗動物分組

選1日齡健康雛雞240只公母各半，在1日齡腹腔注射MD血毒0.5 ml/只。隨機分為4組，每組3個重復(fù)，其中Ⅰ組為攻毒對照組，飼喂基礎(chǔ)日糧，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組為試驗組，分別飼喂1%添加的中藥復(fù)方制劑一、中藥復(fù)方制劑二和中藥復(fù)方制劑三的基礎(chǔ)日糧。

1.2.2 樣品的采集

在雛雞21日齡、35日齡和42日齡，每組隨機選擇20只雛雞，取血分離血清，-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3 測定方法

血清總超氧化物歧化酶（T-SOD）的測定，采用黃嘌呤氧化酶法測定SOD活力，波長550 nm，結(jié)果以每毫升反應(yīng)液中SOD抑制率達50%時所對應(yīng)的SOD量為一個SOD活力單位（U）。血清丙二醛（MDA）的測定，采用硫代巴比妥（TBA）光電比色法，波長532 nm檢測。血清中白細胞介素-2（IL-2）、干擾素γ（IFN-γ）、腫瘤壞死因子α（TNF-α）等水平的測定，采用雙抗體夾心ELISA法，標(biāo)準(zhǔn)曲線法計算樣品中IL-2、IFN-γ、TNF-α濃度。

1.2.4 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0統(tǒng)計處理軟件的One-Way ANOVA法進行方差分析，用DUNCANS法進行多重比較分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 中藥復(fù)方制劑對雛雞發(fā)病率和死亡率的影響（見表1）

表1 人工感染MDV雛雞的發(fā)病率與死亡率統(tǒng)計

由表1可知，檢測結(jié)果表明攻毒對照組雛雞發(fā)病率高達87.9%，死亡率為21.2%。飼料中添加了中藥復(fù)方制劑，各組雛雞的發(fā)病率和死亡率均比對照組降低了，其中中藥復(fù)方制劑Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組的發(fā)病率分別比對照組降低了17.29%、41.41%和55.17%，死亡率分別降低了42.92%、57.07%和71.22%，其中以中藥復(fù)方制劑三效果最佳。

2.2血清中T-SOD、MDA的檢測結(jié)果與分析

2.2.1 T-SOD活性的檢測結(jié)果與分析（見表2）

表2 雛雞血清中T-SOD活力的測定結(jié)果與分析(U/ml)

由表2可知，在21、35、42日齡，各試驗組雞血清T-SOD活力顯著（P＜0.05）或極顯著高于對照組（P＜0.01）；試驗Ⅲ組和Ⅳ組雛雞血清T-SOD活力顯著高于試驗Ⅱ組（P＜0.05），而試驗Ⅲ組和Ⅳ組間差異不顯著（P＞0.05）。研究結(jié)果表明中藥復(fù)方制劑能夠通過提高血清中T-SOD的活力，而增強對氧自由基清除能力，保護細胞免受損傷。且中藥復(fù)方制劑二和三效果顯著優(yōu)于復(fù)方制劑一。

2.2.2 MDA指標(biāo)（見表3）

表3 雛雞血清中MDA含量測定與分析結(jié)果(nmol/ml)

由表3可知，在21、35、42日齡的各試驗組雛雞血清MDA含量均顯著（P＜0.05）或極顯著（P＜0.01）低于對照組，其中各日齡時期試驗Ⅳ組雛雞血清MDA含量顯著低于試驗Ⅱ組（P＜0.05），而試驗Ⅲ組和Ⅳ組間差異不顯著（P＞0.05）。添加中藥復(fù)方各組MDA含量降低，機體內(nèi)脂質(zhì)過氧化物的產(chǎn)生量明顯降低，說明中藥復(fù)方制劑不僅促進機體對自由基的清除能力，同時通過減少機體內(nèi)自由基的產(chǎn)生，發(fā)揮良好的抗氧化效應(yīng)。

2.3 IFN-γ檢測結(jié)果與分析（見表4）

由表4可知，與對照組相比，各日齡試驗組雛雞血清中IFN-γ含量顯著（P＜0.05）或極顯著高于對照組（P＜0.01），各日齡的試驗Ⅳ組雛雞血清中IFN-γ含量顯著高于其它試驗組（P＜0.05）。說明日糧中添加中藥復(fù)方制劑，可以提高雛雞血清中IFN-γ含量，從而提高了免疫細胞的活性和抗腫瘤能力，增強了機體免疫功能，且中藥復(fù)方制劑三作用效果最佳。

表4 雛雞血清中IFN-γ含量測定結(jié)果(pg/ml)

2.4 IL-2檢測結(jié)果與分析（見表5）

表5 雛雞血清中IL-2含量測定結(jié)果與分析(ng/ml)

由表5可知，各日齡的試驗Ⅲ組和Ⅳ組雛雞血清中IL-2含量顯著（P＜0.05）或及極顯著高于對照組（P＜0.01），結(jié)果表明中藥復(fù)方制劑在雛雞育雛階段能提高雛雞血清中IL-2含量，增強機體抗病毒感染的細胞免疫功能。且復(fù)方中藥制劑三組雛雞血清中IL-2含量隨著日齡的增加而逐漸增加，作用效果最優(yōu)。

2.5 TNF-α檢測結(jié)果與分析（見表6）

由表6可知，各日齡的試驗Ⅲ組及Ⅳ組雛雞血清中TNF-α含量與對照組相比差異顯著（P＜0.05）或極顯著（P＜0.01）。研究結(jié)果表明日糧中添加中藥復(fù)方制劑二和三均可提高雛雞血清中TNF-α含量，調(diào)節(jié)體液免疫與細胞免疫，且在整個實驗階段均具有顯著作用效果。

表6 雛雞血清中TNF-α含量測定結(jié)果(ng/ml)

總之，通過日糧中添加中藥復(fù)方制劑，可通過增強機體的抗氧化功能和調(diào)節(jié)機體的體液免疫與細胞免疫功能，增強機體的抗病毒感染能力，在一定程度上保護機體組織細胞免受損傷，提高了雛雞的成活率，且中藥復(fù)方制劑三作用效果優(yōu)于其他制劑。

3 討論

3.1 中藥復(fù)方制劑對雛雞抗氧化能力的影響

血清中T-SOD活性代表了機體抗氧化水平，能清除氧自由基等，對組織細胞損傷有一定的保護作用。檢測蛋雛雞血清中MDA含量和T-SOD活性可以反映機體的氧化和抗氧化水平。有研究發(fā)現(xiàn)茯苓皮三萜對小鼠肝脂質(zhì)過氧化產(chǎn)生的丙二醛有較好的清除效果[12]。本試驗中藥復(fù)方制劑中具有茯苓等成分，可提高雛雞血清中T-SOD活性，降低血清中MDA含量，對提高雛雞抗氧化水平、保護機體免受損傷具有很好的作用效果。

3.2 中藥復(fù)方制劑對雛雞細胞因子水平的影響及其意義

IL-2是白細胞介素家族中的重要成員之一，在體內(nèi)主要由Th1細胞分泌，是T細胞在體外長期生長所必需的因子，參與炎癥反應(yīng)、抗腫瘤效應(yīng)和移植排斥反應(yīng)，是衡量機體免疫功能，尤其是細胞免疫水平的一個重要指標(biāo)。本試驗中飼喂添加中藥復(fù)方的各組雛雞血清中IL-2均比單獨飼喂基礎(chǔ)日糧組的高，提高了機體免疫功能，這與其他人研究結(jié)果吻合[13]。

IFN-γ主要由Th1CD4+細胞和吞噬細胞產(chǎn)生，在體內(nèi)具有一系列的生物學(xué)效應(yīng)，包括抗病毒、抗腫瘤、激活巨噬細胞使其殺傷腫瘤細胞，增強NK細胞活性、誘導(dǎo)B細胞分泌免疫球蛋白并促進B細胞成熟和增殖等，具有重要的免疫學(xué)作用[14-15]。TNF-α是由T、B淋巴細胞分泌的具有多種生物活性的多肽細胞因子，具有強大的抗腫瘤作用，并且可以調(diào)節(jié)機體免疫功能。余建國等[16]研究發(fā)現(xiàn)銀杏葉多糖促進雛雞腫瘤壞死因子α和干擾素γ產(chǎn)生，這與本研究結(jié)果相一致。

4 結(jié)語

綜上所述，本研究結(jié)果表明在蛋雛雞日糧中添加以茯苓、白術(shù)等中藥為主的復(fù)方制劑一、復(fù)方二和復(fù)方三均可以提高機體的抗氧化水平，調(diào)節(jié)機體免疫機能，提高育雛階段雛雞的健康水平，且中藥復(fù)方二和中藥復(fù)方三比中藥復(fù)方一更為有效，以中藥復(fù)方制劑三作用效果最優(yōu)。中草藥復(fù)方作為一類新型功能性飼料添加劑，具有替代或部分飼用抗生素的使用的潛能，其可通過對畜禽生長性能、機體免疫力的提升及對腸道菌群的改善調(diào)控作用而備受關(guān)注。同時中藥作為飼料添加劑使用，取之自然還以自然，具有無毒、無抗性產(chǎn)生、自然環(huán)保和提高動物性食品的安全性等優(yōu)點，值得深入研究和開發(fā)。然而中藥的成分復(fù)雜，作用機制多樣，要想有效合理利用在養(yǎng)殖業(yè)中，還需要進一步深入的研究。