彭瑋+蔡軍

[摘要] 目的 研究芪冬頤心口服液對腦梗死大鼠的神經(jīng)保護(hù)作用。 方法 50只雄性SD大鼠隨機分為假手術(shù)、模型組、芪冬頤心口服液高、中、低劑量組，于腦梗死模型建立后2h給藥干預(yù)，連續(xù)給藥14d，觀察芪冬頤心口服液對腦梗死大鼠神經(jīng)功能、腦組織SOD（超氧化物歧化酶）、MDA（丙二醛）及神經(jīng)凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2表達(dá)的影響。 結(jié)果 與模型組比較，芪冬頤心口服液高、中、低劑量組能顯著改善神經(jīng)功能情況、提高腦組織中SOD含量，降低MDA含量，并抑制Bcl-2蛋白的表達(dá)（P<0.05，P<0.01）。 結(jié)論 芪冬頤心口服液對腦梗死大鼠具有一定的神經(jīng)保護(hù)作用。

[關(guān)鍵詞]芪冬頤心口服液；腦梗死；Bcl-2

[中圖分類號] R743.3 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 2095-0616（2014）23-37-03

芪冬頤心口服液主要由黃芪、麥冬、生曬參等成分組成，活血化瘀的作用顯著，適用于胸痹、心悸氣陰兩虛癥。芪冬頤心口服液在臨床上主要用于冠心病、動脈硬化等病的治療。芪冬頤心口服液能否用于腦梗死的治療，目前還沒有相關(guān)研究。因此，本研究將采用腦梗死大鼠模型來觀察芪冬頤心口服液對急性腦梗死的療效情況。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 50只SPF級雄性SD大鼠，體重（250±20）g，購自重慶醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心。

1.1.2 試劑 芪冬頤心口服液（白山藥業(yè)有限責(zé)任公司，20140112）。SOD、MDA試劑盒購自南京建成生物工程研究所，Bcl-2 Elisa試劑盒，購自美國R&D公司。

1.2 方法

1.2.1 動物分組 50只大鼠按照配對設(shè)計的方法隨機分為5組：假手術(shù)組（n=10）、模型組（n=10）、芪冬頤心口服液高劑量組（n=10）、芪冬頤心口服液中劑量組（n=10）、芪冬頤心口服液低劑量組（n=10）。除假手術(shù)組外，其余各組均用線栓法經(jīng)左側(cè)頸外動脈-頸內(nèi)動脈插線制造急性腦梗死模型，假手術(shù)組除不插線栓以外，其余操作步驟與其他組相同。術(shù)后2h出現(xiàn)左側(cè)Horner征，提尾時右前肢內(nèi)收屈曲、爬行時向右側(cè)劃圈者為成功模型，腦梗死后2h，開始灌胃，假手術(shù)組和模型組灌胃生理鹽水，1mL/d，高劑量組灌胃芪冬頤心口服液，2mL/d，中劑量組灌胃芪冬頤心口服液，1mL/d，低劑量組灌胃芪冬頤心口服液0.5mL/d，連續(xù)14d。

1.2.2 腦梗死模型的制作用 10%的水合氯醛按照1mL/kg的劑量麻醉大鼠，分離右側(cè)頸總動脈，結(jié)扎頸外動脈，血管夾夾住頸總動脈近心端，再于頸總動脈上剪一小口，將尼龍線從小口插入，向頸內(nèi)動脈推進(jìn)1.8～2.0cm，此時大腦中動脈的血供被阻斷[1]。假手術(shù)組除了不插線栓外，其余步驟操作相同。

1.2.3 神經(jīng)功能障礙評分 腦梗死后2h，采用Zealonga的方法[2]，對大鼠進(jìn)行神經(jīng)功能評分。無神經(jīng)癥狀，0分；不能完全伸展對側(cè)前爪，1分；爬行時向?qū)?cè)旋轉(zhuǎn)，2分；行走時傾倒，3分；喪失意識，4分；死亡，5分。選擇1～3分大鼠進(jìn)行實驗。14 d后再對大鼠進(jìn)行神經(jīng)功能評分。

1.2.4 SOD、MDA含量檢測 在給藥第14d，最后一次給藥后2h，迅速斷頭取腦，冰浴中去除腦膜和殘血，加入4oCPBS制成10%腦勻漿液，嚴(yán)格按照試劑盒說明書測定SOD和MDA含量。

1.2.5 Bcl-2含量檢測 嚴(yán)格按照Bcl-2 Elisa試劑盒對得到的腦組織勻漿中的Bcl-2含量進(jìn)行檢測。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS20.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，數(shù)據(jù)均以（）表示，組間比較采用t檢驗，P<0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 神經(jīng)功能評分

與假手術(shù)組比較，其余各組神經(jīng)功能評分發(fā)生顯著性增加。與模型組相比較，芪冬頤心口服液高、中、低劑量組神經(jīng)功能明顯改善，具有顯著性差異（P<0.01或P<0.05）。見表1。

2.2 腦組織SOD、MDA含量結(jié)果

與假手術(shù)組比較，其余各組中SOD含量顯著降低，MDA含量顯著升高。與模型組相比較，芪冬頤心口服液高、中、低劑量組能顯著增加SOD含量，降低MDA含量。（P<0.05或P<0.01），見表2。

2.3 腦組織Bcl-2表達(dá)的影響

與假手術(shù)組比較，其余各組腦組織中Bcl-2表達(dá)增加。與模型組相比較，芪冬頤心口服液高、中、低劑量組顯著提高腦組織中Bcl-2的表達(dá)（P<0.05或P<0.01）。見表3。

3 討論

腦梗死是嚴(yán)重威脅人類生命健康的三大殺手之一，我國腦梗死發(fā)病率較高[3]，大部分腦梗死患者都會留下后遺癥甚至喪失勞動力和自理能力[4]。

研究已經(jīng)證實在腦梗死的發(fā)生和發(fā)展過程中，自由基的水平對疾病的預(yù)后有很大的影響[5]。主要在線粒體產(chǎn)生的高度化學(xué)活性的自由基是人體生命活動中各種生化反應(yīng)的中間代謝產(chǎn)物，參與細(xì)胞分裂、分化等重要生理功能。但過多的自由基導(dǎo)致細(xì)胞膜上的脂質(zhì)過氧化，破壞蛋白質(zhì)和核酸，損害細(xì)胞膜的雙分子層結(jié)構(gòu)，致細(xì)胞水腫和凋亡；導(dǎo)致DNA的堿基和脫氧核糖發(fā)生化學(xué)變化，引起堿基改變、破壞或脫落，DNA核苷酸鏈的單鏈和雙鏈斷裂等；還可引起蛋白質(zhì)分子發(fā)生交聯(lián)、聚合、肽鏈斷裂。發(fā)生腦梗死時由于腦組織局部供血動脈血流的突然減少或停止，造成該血管區(qū)的腦組織缺血，缺血區(qū)內(nèi)腦組織氧和葡萄糖供應(yīng)發(fā)生障礙，大量自由基產(chǎn)生，組織清除自由基能力下降，自由基大量堆積，導(dǎo)致細(xì)胞及細(xì)胞器膜系統(tǒng)損害，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡而導(dǎo)致繼發(fā)性腦損傷，從而使缺血伴暗帶損傷，加重病情[6]。

腦梗死目前仍無特效的治療方法，雖然靜脈使用溶栓治療有效，但基層醫(yī)院開展困難。近年臨床清除自由基藥物依達(dá)拉奉注射液的應(yīng)用已經(jīng)顯示具有一定的療效[7]，提示具有清除自由基功能的藥物在腦梗死患者中可能具有一定應(yīng)用前景。在腦梗死的治療中，由于中成藥價格較低，歷史悠久，其對腦梗死的治療發(fā)揮了重要的作用。中成藥芪冬頤心口服液具有顯著的活血化瘀作用，對各種損傷后的血流不暢有著積極的效果，這種活血化瘀作用正好能應(yīng)用于血栓性疾病的治療中。但其能否治療腦梗死，是否通過清除自由基或者抑制自由基引起的細(xì)胞凋亡起治療作用尚不清楚。endprint

MDA是脂質(zhì)過氧化的產(chǎn)物[8]，其含量能反應(yīng)體內(nèi)脂質(zhì)過氧化的程度，間接反應(yīng)了細(xì)胞受損的程度[9]。SOD是體內(nèi)一種抗氧化酶，能歧化氧自由基，阻斷羥自由基的產(chǎn)生，從而減輕氧化損傷[10]。Bcl-2是一種受自由基影響的細(xì)胞凋亡調(diào)控因子，其在神經(jīng)元損傷后的凋亡過程中起著重要的調(diào)控作用[11]。有研究發(fā)現(xiàn)，在局灶性腦缺血模型中Bcl-2在缺血半暗帶區(qū)存活的神經(jīng)細(xì)胞中有明顯表達(dá)，Bcl-2表達(dá)越高，神經(jīng)細(xì)胞凋亡情況越低，因此Bcl-2具有抑制細(xì)胞凋亡、延長細(xì)胞生存期作用[12]。氧化/抗氧化失衡與腦梗死過程中細(xì)胞凋亡密切相關(guān)。SOD具有抗凋亡的作用，通過阻止Bcl-2下調(diào)來實現(xiàn)，同時細(xì)胞內(nèi)Bcl-2表達(dá)增加，也可阻斷活性氧相關(guān)的細(xì)胞凋亡[13]。因此本研究選擇MDA、SOD和Bcl-2作為觀察指標(biāo)來研究芪冬頤心口服液對腦梗死大鼠的保護(hù)作用。

從本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與模型組相比芪冬頤心口服液能顯著提高腦梗死大鼠腦組織中SOD活力，降低MDA的含量，提示芪冬頤心口服液具有一定的抗氧化損傷作用，從而減輕細(xì)胞受損情況。在本實驗中，與模型組大鼠相比，芪冬頤心口服液各劑量組能顯著提高腦梗死大鼠中Bcl-2的表達(dá)，說明其具有一定的抑制神經(jīng)元凋亡的作用，這對腦梗死病情的發(fā)展及預(yù)后都有重要的意義。

綜上所述，芪冬頤心口服液對腦梗死大鼠具有一定的保護(hù)作用，機制與提高SOD活性，抑制MDA表達(dá)，增加Bcl-2表達(dá)有關(guān)。

[參考文獻(xiàn)]

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（收稿日期：2014-09-09）endprint

MDA是脂質(zhì)過氧化的產(chǎn)物[8]，其含量能反應(yīng)體內(nèi)脂質(zhì)過氧化的程度，間接反應(yīng)了細(xì)胞受損的程度[9]。SOD是體內(nèi)一種抗氧化酶，能歧化氧自由基，阻斷羥自由基的產(chǎn)生，從而減輕氧化損傷[10]。Bcl-2是一種受自由基影響的細(xì)胞凋亡調(diào)控因子，其在神經(jīng)元損傷后的凋亡過程中起著重要的調(diào)控作用[11]。有研究發(fā)現(xiàn)，在局灶性腦缺血模型中Bcl-2在缺血半暗帶區(qū)存活的神經(jīng)細(xì)胞中有明顯表達(dá)，Bcl-2表達(dá)越高，神經(jīng)細(xì)胞凋亡情況越低，因此Bcl-2具有抑制細(xì)胞凋亡、延長細(xì)胞生存期作用[12]。氧化/抗氧化失衡與腦梗死過程中細(xì)胞凋亡密切相關(guān)。SOD具有抗凋亡的作用，通過阻止Bcl-2下調(diào)來實現(xiàn)，同時細(xì)胞內(nèi)Bcl-2表達(dá)增加，也可阻斷活性氧相關(guān)的細(xì)胞凋亡[13]。因此本研究選擇MDA、SOD和Bcl-2作為觀察指標(biāo)來研究芪冬頤心口服液對腦梗死大鼠的保護(hù)作用。

從本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與模型組相比芪冬頤心口服液能顯著提高腦梗死大鼠腦組織中SOD活力，降低MDA的含量，提示芪冬頤心口服液具有一定的抗氧化損傷作用，從而減輕細(xì)胞受損情況。在本實驗中，與模型組大鼠相比，芪冬頤心口服液各劑量組能顯著提高腦梗死大鼠中Bcl-2的表達(dá)，說明其具有一定的抑制神經(jīng)元凋亡的作用，這對腦梗死病情的發(fā)展及預(yù)后都有重要的意義。

綜上所述，芪冬頤心口服液對腦梗死大鼠具有一定的保護(hù)作用，機制與提高SOD活性，抑制MDA表達(dá)，增加Bcl-2表達(dá)有關(guān)。

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MDA是脂質(zhì)過氧化的產(chǎn)物[8]，其含量能反應(yīng)體內(nèi)脂質(zhì)過氧化的程度，間接反應(yīng)了細(xì)胞受損的程度[9]。SOD是體內(nèi)一種抗氧化酶，能歧化氧自由基，阻斷羥自由基的產(chǎn)生，從而減輕氧化損傷[10]。Bcl-2是一種受自由基影響的細(xì)胞凋亡調(diào)控因子，其在神經(jīng)元損傷后的凋亡過程中起著重要的調(diào)控作用[11]。有研究發(fā)現(xiàn)，在局灶性腦缺血模型中Bcl-2在缺血半暗帶區(qū)存活的神經(jīng)細(xì)胞中有明顯表達(dá)，Bcl-2表達(dá)越高，神經(jīng)細(xì)胞凋亡情況越低，因此Bcl-2具有抑制細(xì)胞凋亡、延長細(xì)胞生存期作用[12]。氧化/抗氧化失衡與腦梗死過程中細(xì)胞凋亡密切相關(guān)。SOD具有抗凋亡的作用，通過阻止Bcl-2下調(diào)來實現(xiàn)，同時細(xì)胞內(nèi)Bcl-2表達(dá)增加，也可阻斷活性氧相關(guān)的細(xì)胞凋亡[13]。因此本研究選擇MDA、SOD和Bcl-2作為觀察指標(biāo)來研究芪冬頤心口服液對腦梗死大鼠的保護(hù)作用。

從本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與模型組相比芪冬頤心口服液能顯著提高腦梗死大鼠腦組織中SOD活力，降低MDA的含量，提示芪冬頤心口服液具有一定的抗氧化損傷作用，從而減輕細(xì)胞受損情況。在本實驗中，與模型組大鼠相比，芪冬頤心口服液各劑量組能顯著提高腦梗死大鼠中Bcl-2的表達(dá)，說明其具有一定的抑制神經(jīng)元凋亡的作用，這對腦梗死病情的發(fā)展及預(yù)后都有重要的意義。

綜上所述，芪冬頤心口服液對腦梗死大鼠具有一定的保護(hù)作用，機制與提高SOD活性，抑制MDA表達(dá)，增加Bcl-2表達(dá)有關(guān)。

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