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        不同產(chǎn)地桑葚中總黃酮含量的測定

        2015-01-20 12:03:43周慶頌孫若飛宴麗芳
        湖北農(nóng)業(yè)科學(xué) 2014年22期
        關(guān)鍵詞:總黃酮桑葚蘆丁

        周慶頌 孫若飛 宴麗芳 等

        摘要:為控制桑葚制劑質(zhì)量的穩(wěn)定性,采用分光光度法對不同產(chǎn)地桑葚藥材中總黃酮含量進行分析比較。以蘆丁為對照品,亞硝酸鈉-硝酸鋁-氫氧化鈉為顯色劑,測定波長為501 nm,蘆丁濃度在0.008 18~0.049 06 mg/mL范圍內(nèi)吸收值與濃度具有良好的線性關(guān)系(r=0.999 7),平均加樣回收率分別為103.30%、104.03%和105.83%,RSD值為2.65%、2.86%和2.27%(n=9)。該分析方法簡單快速、準確可靠,可用于桑葚中總黃酮成分含量的測定。分別測定了8個不同產(chǎn)地藥材中的總黃酮含量,含量范圍為0.653~2.074 mg/g。結(jié)果表明,不同產(chǎn)地桑葚中總黃酮含量差異較大,說明環(huán)境綜合機制對桑葚中總黃酮含量有明顯影響。

        關(guān)鍵詞:桑葚;蘆??;總黃酮;產(chǎn)地

        中圖分類號:R917 文獻標識碼:A 文章編號:0439-8114(2014)22-5526-02

        桑葚是蕁麻目??浦参锷洌∕orus alba L.)的成熟果穗,含有豐富的營養(yǎng)物質(zhì),既具有食用價值又可作為藥材使用,為衛(wèi)生部首批藥食兩用的農(nóng)產(chǎn)品之一,具有良好的開發(fā)和應(yīng)用前景[1-4]。中國桑葚資源豐富,共有15個種4個變種3 000多個種質(zhì)資源,在全國各省市均有桑葚的分布[5]。

        總黃酮為桑葚及其相關(guān)制劑的主要藥效成分,在桑葚藥品的開發(fā)過程中,總黃酮為其制劑的主要質(zhì)量控制標準。但另一方面,在制劑生產(chǎn)過程中,研究人員發(fā)現(xiàn)不同產(chǎn)地的桑葚中總黃酮差異較大,導(dǎo)致其制劑質(zhì)量不穩(wěn)定。為控制藥品質(zhì)量,通過分析比較不同產(chǎn)地桑葚中的總黃酮含量,可為開發(fā)其相關(guān)產(chǎn)品提供參考。

        1 材料與方法

        1.1 材料與試劑

        桑葚干果(分別購自山東樂陵、安徽合肥、新疆吐魯番、江西樟樹、四川南充、廣東揭陽、河北安國、陜西洋縣),經(jīng)鑒定為??浦参锷]爻墒旃麑?,留樣憑證存放于本校藥學(xué)院中藥鑒定實驗室。

        蘆丁對照品(中國藥品生物制品檢定所,批號:100 080-200 707,以UV法測定含量為92.5%);水為去離子水;其余試劑均為分析純試劑。

        1.2 儀器

        UV-2550型紫外可見分光光度計(日本島津制作所),XS205型電子分析天平(梅特勒-托利多國際股份有限公司);KQ300-DE型雙頻數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);JC101型電熱鼓風干燥箱(南通嘉程儀器有限公司)。

        1.3 方法

        1.3.1 樣品溶液的制備 取蘆丁對照品22.10 mg于100 mL容量瓶中,加70%(V/V,下同)乙醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,得0.221 0 mg/mL對照品溶液;將桑葚樣品干燥至恒重,取約5g干燥樣品于具塞三角瓶中,加入70%乙醇100 mL,超聲1 h,過濾,重復(fù)2次,合并濾液即得樣品溶液。

        1.3.2 測定波長的選擇 經(jīng)紫外-可見光區(qū)掃描,蘆丁對照品溶液的最大吸收波長為501 nm,故本研究選擇501 nm為測定波長。

        1.3.3 標準曲線的制作 分別量取2.0~12.0 mL不同體積的對照品溶液于50 mL容量瓶中,加水至12 mL,加5%亞硝酸鈉溶液2 mL,混勻,放置6 min。加10%(m/V)硝酸鋁溶液2 mL,搖勻,放置6 min,加氫氧化鈉試液20 mL。再加水至刻度,搖勻,放置15 min;以相應(yīng)試劑為空白參比,按照紫外-可見光分光光度法[6],測定501 nm處吸光度。以吸收度為縱坐標,濃度為橫坐標,繪制標準曲線。

        2 結(jié)果與分析

        2.1 標準曲線回歸方程

        按照“1.3.3”得回歸方程為A=11.584 0C-0.006 3,r=0.999 7,線性范圍0.008 18~0.049 06 mg/mL。

        2.2 方法學(xué)考察結(jié)果

        取同一份對照品溶液,每隔一定時間測定501 nm處吸光值。結(jié)果表明在顯色后30 min內(nèi)溶液吸收值保持穩(wěn)定;取同一供試品溶液(產(chǎn)地:山東樂陵),連續(xù)測定6次,其吸收值的RSD為0.55%,說明精密度良好;取同一桑葚樣品(產(chǎn)地:山東樂陵),平行制備6份供試品溶液,并按測定項下方法測定,其吸收值RSD為1.92%,表明方法重復(fù)性良好。

        采用加樣回收法,取已知含量的桑葚樣品(產(chǎn)地:山東樂陵),共9份,按80%,100%,120%分別加入蘆丁對照品,各3份,按上述方法測定3種濃度的平均回收率及RSD值,如表1所示。

        2.3 樣品測定

        精密量取供試品溶液12.0 mL,定容至50 mL(同時設(shè)去離子水為空白對照),同上法測定吸收度,根據(jù)標準曲線計算各樣品中總黃酮(以蘆丁計)的含量,結(jié)果見表2。

        3 討論

        總黃酮是評價桑葚藥材質(zhì)量的重要指標,以蘆丁為對照品的比色法是測定總黃酮含量的經(jīng)典方法[7]。本文建立了桑葚藥材中總黃酮含量測定的方法,方法簡便、準確、穩(wěn)定性好,該方法可用于桑葚及其相關(guān)制劑中總黃酮含量的分析測定。根據(jù)文獻方法[8,9],比較了60%、70%、80%、90%乙醇等不同提取溶劑,結(jié)果表明,以70%乙醇提取黃酮總含量較高,干擾雜質(zhì)少,故確定用70%乙醇作為提取溶劑。中藥材中有效成分的含量受地質(zhì)、環(huán)境、氣候的影響。本試驗結(jié)果表明,產(chǎn)地不同的桑葚中總黃酮具有較大差異,即在桑葚制劑的制備過程中,有必要對所不同產(chǎn)地、不同批次、不同采收季節(jié)的桑葚原藥材中總黃酮的含量進行監(jiān)測,防止因藥材中總黃酮含量的變化導(dǎo)致桑葚制劑中總黃酮含量的大幅波動,以保證制劑質(zhì)量的穩(wěn)定性。

        參考文獻:

        [1] 李冬香,陳清西.桑葚功能成份及其開發(fā)利用研究進展[J].中國農(nóng)學(xué)通報,2009,25(24):293-297.

        [2] 吳祖芳,翁佩芳.桑椹的營養(yǎng)組分與功能特性分析[J].中國食品學(xué)報,2005,5(3):102-106.

        [3] 劉學(xué)銘,肖更生,陳衛(wèi)東.桑椹的研究與開發(fā)進展[J].中草藥, 2001,32(6):569-571.

        [4] 孫潔民.丹參、桑椹子、四物湯對小鼠免疫功能影響的實驗研究[J].中醫(yī)藥研究,1991(3):50-51.

        [5] 潘一樂.桑種質(zhì)資源和桑樹育種的研究現(xiàn)狀與展望[J].蠶業(yè)科學(xué),2000,26(Z1):1-8.

        [6] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010.

        [7] 馬陶陶,張群林,李 俊.中藥總黃酮的含量測定方法[J].安徽醫(yī)藥,2007,11(11):1030-1032.

        [8] 陳江梅,李利軍,馬 齊.桑葚汁、茱萸汁和沙棘汁中的總黃酮含量測定分析[J].中國釀造,2009,208(7):153-155.

        [9] 張 帆,劉宏炳,田樹革,等.藥桑中黃酮和多糖的超聲提取與含量測定[J].西北藥學(xué)雜志,2008,23(5):282-283.

        (責任編輯 周有祥)

        摘要:為控制桑葚制劑質(zhì)量的穩(wěn)定性,采用分光光度法對不同產(chǎn)地桑葚藥材中總黃酮含量進行分析比較。以蘆丁為對照品,亞硝酸鈉-硝酸鋁-氫氧化鈉為顯色劑,測定波長為501 nm,蘆丁濃度在0.008 18~0.049 06 mg/mL范圍內(nèi)吸收值與濃度具有良好的線性關(guān)系(r=0.999 7),平均加樣回收率分別為103.30%、104.03%和105.83%,RSD值為2.65%、2.86%和2.27%(n=9)。該分析方法簡單快速、準確可靠,可用于桑葚中總黃酮成分含量的測定。分別測定了8個不同產(chǎn)地藥材中的總黃酮含量,含量范圍為0.653~2.074 mg/g。結(jié)果表明,不同產(chǎn)地桑葚中總黃酮含量差異較大,說明環(huán)境綜合機制對桑葚中總黃酮含量有明顯影響。

        關(guān)鍵詞:桑葚;蘆??;總黃酮;產(chǎn)地

        中圖分類號:R917 文獻標識碼:A 文章編號:0439-8114(2014)22-5526-02

        桑葚是蕁麻目??浦参锷洌∕orus alba L.)的成熟果穗,含有豐富的營養(yǎng)物質(zhì),既具有食用價值又可作為藥材使用,為衛(wèi)生部首批藥食兩用的農(nóng)產(chǎn)品之一,具有良好的開發(fā)和應(yīng)用前景[1-4]。中國桑葚資源豐富,共有15個種4個變種3 000多個種質(zhì)資源,在全國各省市均有桑葚的分布[5]。

        總黃酮為桑葚及其相關(guān)制劑的主要藥效成分,在桑葚藥品的開發(fā)過程中,總黃酮為其制劑的主要質(zhì)量控制標準。但另一方面,在制劑生產(chǎn)過程中,研究人員發(fā)現(xiàn)不同產(chǎn)地的桑葚中總黃酮差異較大,導(dǎo)致其制劑質(zhì)量不穩(wěn)定。為控制藥品質(zhì)量,通過分析比較不同產(chǎn)地桑葚中的總黃酮含量,可為開發(fā)其相關(guān)產(chǎn)品提供參考。

        1 材料與方法

        1.1 材料與試劑

        桑葚干果(分別購自山東樂陵、安徽合肥、新疆吐魯番、江西樟樹、四川南充、廣東揭陽、河北安國、陜西洋縣),經(jīng)鑒定為??浦参锷]爻墒旃麑?,留樣憑證存放于本校藥學(xué)院中藥鑒定實驗室。

        蘆丁對照品(中國藥品生物制品檢定所,批號:100 080-200 707,以UV法測定含量為92.5%);水為去離子水;其余試劑均為分析純試劑。

        1.2 儀器

        UV-2550型紫外可見分光光度計(日本島津制作所),XS205型電子分析天平(梅特勒-托利多國際股份有限公司);KQ300-DE型雙頻數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);JC101型電熱鼓風干燥箱(南通嘉程儀器有限公司)。

        1.3 方法

        1.3.1 樣品溶液的制備 取蘆丁對照品22.10 mg于100 mL容量瓶中,加70%(V/V,下同)乙醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,得0.221 0 mg/mL對照品溶液;將桑葚樣品干燥至恒重,取約5g干燥樣品于具塞三角瓶中,加入70%乙醇100 mL,超聲1 h,過濾,重復(fù)2次,合并濾液即得樣品溶液。

        1.3.2 測定波長的選擇 經(jīng)紫外-可見光區(qū)掃描,蘆丁對照品溶液的最大吸收波長為501 nm,故本研究選擇501 nm為測定波長。

        1.3.3 標準曲線的制作 分別量取2.0~12.0 mL不同體積的對照品溶液于50 mL容量瓶中,加水至12 mL,加5%亞硝酸鈉溶液2 mL,混勻,放置6 min。加10%(m/V)硝酸鋁溶液2 mL,搖勻,放置6 min,加氫氧化鈉試液20 mL。再加水至刻度,搖勻,放置15 min;以相應(yīng)試劑為空白參比,按照紫外-可見光分光光度法[6],測定501 nm處吸光度。以吸收度為縱坐標,濃度為橫坐標,繪制標準曲線。

        2 結(jié)果與分析

        2.1 標準曲線回歸方程

        按照“1.3.3”得回歸方程為A=11.584 0C-0.006 3,r=0.999 7,線性范圍0.008 18~0.049 06 mg/mL。

        2.2 方法學(xué)考察結(jié)果

        取同一份對照品溶液,每隔一定時間測定501 nm處吸光值。結(jié)果表明在顯色后30 min內(nèi)溶液吸收值保持穩(wěn)定;取同一供試品溶液(產(chǎn)地:山東樂陵),連續(xù)測定6次,其吸收值的RSD為0.55%,說明精密度良好;取同一桑葚樣品(產(chǎn)地:山東樂陵),平行制備6份供試品溶液,并按測定項下方法測定,其吸收值RSD為1.92%,表明方法重復(fù)性良好。

        采用加樣回收法,取已知含量的桑葚樣品(產(chǎn)地:山東樂陵),共9份,按80%,100%,120%分別加入蘆丁對照品,各3份,按上述方法測定3種濃度的平均回收率及RSD值,如表1所示。

        2.3 樣品測定

        精密量取供試品溶液12.0 mL,定容至50 mL(同時設(shè)去離子水為空白對照),同上法測定吸收度,根據(jù)標準曲線計算各樣品中總黃酮(以蘆丁計)的含量,結(jié)果見表2。

        3 討論

        總黃酮是評價桑葚藥材質(zhì)量的重要指標,以蘆丁為對照品的比色法是測定總黃酮含量的經(jīng)典方法[7]。本文建立了桑葚藥材中總黃酮含量測定的方法,方法簡便、準確、穩(wěn)定性好,該方法可用于桑葚及其相關(guān)制劑中總黃酮含量的分析測定。根據(jù)文獻方法[8,9],比較了60%、70%、80%、90%乙醇等不同提取溶劑,結(jié)果表明,以70%乙醇提取黃酮總含量較高,干擾雜質(zhì)少,故確定用70%乙醇作為提取溶劑。中藥材中有效成分的含量受地質(zhì)、環(huán)境、氣候的影響。本試驗結(jié)果表明,產(chǎn)地不同的桑葚中總黃酮具有較大差異,即在桑葚制劑的制備過程中,有必要對所不同產(chǎn)地、不同批次、不同采收季節(jié)的桑葚原藥材中總黃酮的含量進行監(jiān)測,防止因藥材中總黃酮含量的變化導(dǎo)致桑葚制劑中總黃酮含量的大幅波動,以保證制劑質(zhì)量的穩(wěn)定性。

        參考文獻:

        [1] 李冬香,陳清西.桑葚功能成份及其開發(fā)利用研究進展[J].中國農(nóng)學(xué)通報,2009,25(24):293-297.

        [2] 吳祖芳,翁佩芳.桑椹的營養(yǎng)組分與功能特性分析[J].中國食品學(xué)報,2005,5(3):102-106.

        [3] 劉學(xué)銘,肖更生,陳衛(wèi)東.桑椹的研究與開發(fā)進展[J].中草藥, 2001,32(6):569-571.

        [4] 孫潔民.丹參、桑椹子、四物湯對小鼠免疫功能影響的實驗研究[J].中醫(yī)藥研究,1991(3):50-51.

        [5] 潘一樂.桑種質(zhì)資源和桑樹育種的研究現(xiàn)狀與展望[J].蠶業(yè)科學(xué),2000,26(Z1):1-8.

        [6] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010.

        [7] 馬陶陶,張群林,李 俊.中藥總黃酮的含量測定方法[J].安徽醫(yī)藥,2007,11(11):1030-1032.

        [8] 陳江梅,李利軍,馬 齊.桑葚汁、茱萸汁和沙棘汁中的總黃酮含量測定分析[J].中國釀造,2009,208(7):153-155.

        [9] 張 帆,劉宏炳,田樹革,等.藥桑中黃酮和多糖的超聲提取與含量測定[J].西北藥學(xué)雜志,2008,23(5):282-283.

        (責任編輯 周有祥)

        摘要:為控制桑葚制劑質(zhì)量的穩(wěn)定性,采用分光光度法對不同產(chǎn)地桑葚藥材中總黃酮含量進行分析比較。以蘆丁為對照品,亞硝酸鈉-硝酸鋁-氫氧化鈉為顯色劑,測定波長為501 nm,蘆丁濃度在0.008 18~0.049 06 mg/mL范圍內(nèi)吸收值與濃度具有良好的線性關(guān)系(r=0.999 7),平均加樣回收率分別為103.30%、104.03%和105.83%,RSD值為2.65%、2.86%和2.27%(n=9)。該分析方法簡單快速、準確可靠,可用于桑葚中總黃酮成分含量的測定。分別測定了8個不同產(chǎn)地藥材中的總黃酮含量,含量范圍為0.653~2.074 mg/g。結(jié)果表明,不同產(chǎn)地桑葚中總黃酮含量差異較大,說明環(huán)境綜合機制對桑葚中總黃酮含量有明顯影響。

        關(guān)鍵詞:桑葚;蘆??;總黃酮;產(chǎn)地

        中圖分類號:R917 文獻標識碼:A 文章編號:0439-8114(2014)22-5526-02

        桑葚是蕁麻目??浦参锷洌∕orus alba L.)的成熟果穗,含有豐富的營養(yǎng)物質(zhì),既具有食用價值又可作為藥材使用,為衛(wèi)生部首批藥食兩用的農(nóng)產(chǎn)品之一,具有良好的開發(fā)和應(yīng)用前景[1-4]。中國桑葚資源豐富,共有15個種4個變種3 000多個種質(zhì)資源,在全國各省市均有桑葚的分布[5]。

        總黃酮為桑葚及其相關(guān)制劑的主要藥效成分,在桑葚藥品的開發(fā)過程中,總黃酮為其制劑的主要質(zhì)量控制標準。但另一方面,在制劑生產(chǎn)過程中,研究人員發(fā)現(xiàn)不同產(chǎn)地的桑葚中總黃酮差異較大,導(dǎo)致其制劑質(zhì)量不穩(wěn)定。為控制藥品質(zhì)量,通過分析比較不同產(chǎn)地桑葚中的總黃酮含量,可為開發(fā)其相關(guān)產(chǎn)品提供參考。

        1 材料與方法

        1.1 材料與試劑

        桑葚干果(分別購自山東樂陵、安徽合肥、新疆吐魯番、江西樟樹、四川南充、廣東揭陽、河北安國、陜西洋縣),經(jīng)鑒定為??浦参锷]爻墒旃麑崳魳討{證存放于本校藥學(xué)院中藥鑒定實驗室。

        蘆丁對照品(中國藥品生物制品檢定所,批號:100 080-200 707,以UV法測定含量為92.5%);水為去離子水;其余試劑均為分析純試劑。

        1.2 儀器

        UV-2550型紫外可見分光光度計(日本島津制作所),XS205型電子分析天平(梅特勒-托利多國際股份有限公司);KQ300-DE型雙頻數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);JC101型電熱鼓風干燥箱(南通嘉程儀器有限公司)。

        1.3 方法

        1.3.1 樣品溶液的制備 取蘆丁對照品22.10 mg于100 mL容量瓶中,加70%(V/V,下同)乙醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,得0.221 0 mg/mL對照品溶液;將桑葚樣品干燥至恒重,取約5g干燥樣品于具塞三角瓶中,加入70%乙醇100 mL,超聲1 h,過濾,重復(fù)2次,合并濾液即得樣品溶液。

        1.3.2 測定波長的選擇 經(jīng)紫外-可見光區(qū)掃描,蘆丁對照品溶液的最大吸收波長為501 nm,故本研究選擇501 nm為測定波長。

        1.3.3 標準曲線的制作 分別量取2.0~12.0 mL不同體積的對照品溶液于50 mL容量瓶中,加水至12 mL,加5%亞硝酸鈉溶液2 mL,混勻,放置6 min。加10%(m/V)硝酸鋁溶液2 mL,搖勻,放置6 min,加氫氧化鈉試液20 mL。再加水至刻度,搖勻,放置15 min;以相應(yīng)試劑為空白參比,按照紫外-可見光分光光度法[6],測定501 nm處吸光度。以吸收度為縱坐標,濃度為橫坐標,繪制標準曲線。

        2 結(jié)果與分析

        2.1 標準曲線回歸方程

        按照“1.3.3”得回歸方程為A=11.584 0C-0.006 3,r=0.999 7,線性范圍0.008 18~0.049 06 mg/mL。

        2.2 方法學(xué)考察結(jié)果

        取同一份對照品溶液,每隔一定時間測定501 nm處吸光值。結(jié)果表明在顯色后30 min內(nèi)溶液吸收值保持穩(wěn)定;取同一供試品溶液(產(chǎn)地:山東樂陵),連續(xù)測定6次,其吸收值的RSD為0.55%,說明精密度良好;取同一桑葚樣品(產(chǎn)地:山東樂陵),平行制備6份供試品溶液,并按測定項下方法測定,其吸收值RSD為1.92%,表明方法重復(fù)性良好。

        采用加樣回收法,取已知含量的桑葚樣品(產(chǎn)地:山東樂陵),共9份,按80%,100%,120%分別加入蘆丁對照品,各3份,按上述方法測定3種濃度的平均回收率及RSD值,如表1所示。

        2.3 樣品測定

        精密量取供試品溶液12.0 mL,定容至50 mL(同時設(shè)去離子水為空白對照),同上法測定吸收度,根據(jù)標準曲線計算各樣品中總黃酮(以蘆丁計)的含量,結(jié)果見表2。

        3 討論

        總黃酮是評價桑葚藥材質(zhì)量的重要指標,以蘆丁為對照品的比色法是測定總黃酮含量的經(jīng)典方法[7]。本文建立了桑葚藥材中總黃酮含量測定的方法,方法簡便、準確、穩(wěn)定性好,該方法可用于桑葚及其相關(guān)制劑中總黃酮含量的分析測定。根據(jù)文獻方法[8,9],比較了60%、70%、80%、90%乙醇等不同提取溶劑,結(jié)果表明,以70%乙醇提取黃酮總含量較高,干擾雜質(zhì)少,故確定用70%乙醇作為提取溶劑。中藥材中有效成分的含量受地質(zhì)、環(huán)境、氣候的影響。本試驗結(jié)果表明,產(chǎn)地不同的桑葚中總黃酮具有較大差異,即在桑葚制劑的制備過程中,有必要對所不同產(chǎn)地、不同批次、不同采收季節(jié)的桑葚原藥材中總黃酮的含量進行監(jiān)測,防止因藥材中總黃酮含量的變化導(dǎo)致桑葚制劑中總黃酮含量的大幅波動,以保證制劑質(zhì)量的穩(wěn)定性。

        參考文獻:

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        (責任編輯 周有祥)

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