程亮

摘要：真菌GD-2和HZ-31是2株分離于雜草中的具有生防潛力的生防菌株，為進(jìn)一步研究2株菌株的發(fā)酵培養(yǎng)及田間應(yīng)用技術(shù)，進(jìn)行了生防菌株生長(zhǎng)特性研究。通過(guò)室內(nèi)PAS培養(yǎng)基培養(yǎng)，裝液量為100 mL/250 mL，培養(yǎng)溫度（25±1） ℃，培養(yǎng)10 d，觀察測(cè)定培養(yǎng)過(guò)程中發(fā)酵液顏色、菌絲干重變化、OD650 nm和pH，并利用聚類(lèi)分析方法劃分生防菌株生長(zhǎng)階段。結(jié)果表明，在培養(yǎng)過(guò)程中，生防菌株發(fā)酵液的顏色、菌絲干重、OD650 nm 和pH 都會(huì)隨著培養(yǎng)時(shí)間而變化。在相同的培養(yǎng)條件下，來(lái)源于不同寄主的生防菌菌株之間在顏色、菌絲干重變化、OD650 nm和pH 變化表現(xiàn)出差異。2株生防菌菌株的生長(zhǎng)分為3 個(gè)階段，1～2 d 為適應(yīng)階段，3～5 d 為對(duì)數(shù)生長(zhǎng)階段，6～10 d為穩(wěn)定階段。生防菌株在培養(yǎng)過(guò)程的發(fā)酵液色素變化和OD650 nm的變化可作為生防菌株培養(yǎng)的表征性特征。

關(guān)鍵詞：生防菌株；生長(zhǎng)特性；分析；GD-2；HZ-31

中圖分類(lèi)號(hào)：S476+.1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2014）22-5408-03

真菌在生長(zhǎng)、產(chǎn)孢、萌發(fā)時(shí)對(duì)營(yíng)養(yǎng)和環(huán)境條件都有其基本的和特殊的需求，了解真菌生長(zhǎng)、產(chǎn)孢和萌發(fā)的具體特性和要求，對(duì)植物真菌病害的研究具有重要意義。不同真菌在不同地區(qū)的分布又有所不同，這種差異反映了生防菌對(duì)生長(zhǎng)環(huán)境的選擇，表現(xiàn)在其對(duì)不同環(huán)境利用的生長(zhǎng)特性上。在特定的培養(yǎng)條件下，真菌發(fā)酵液的顏色、菌絲干重、發(fā)酵液吸光度和pH等的變化，都能反映真菌的生長(zhǎng)特性。針對(duì)篩選出的具有良好生防潛力的2株真菌，研究生長(zhǎng)特性，了解適宜培養(yǎng)條件，對(duì)進(jìn)一步研究該菌株的生物防治應(yīng)用具有重要意義。菌株GD-2和HZ-31是青海省農(nóng)業(yè)有害生物綜合治理重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室篩選出的對(duì)野燕麥具有防除效果的生防菌株[1，2]，本研究對(duì)該生防菌株的生長(zhǎng)特性進(jìn)行了研究，有助于了解其培養(yǎng)特性的差異，尋找培養(yǎng)過(guò)程的異質(zhì)性指標(biāo)，為進(jìn)一步的生物學(xué)研究發(fā)酵生產(chǎn)、制劑研制及田間應(yīng)用等奠定基礎(chǔ)。

1 材料及方法

1.1 試驗(yàn)材料

菌株：供試菌株及來(lái)源見(jiàn)表1。

培養(yǎng)基：固體培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基（馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，瓊脂20 g，水1 000 mL）； 液體培養(yǎng)基為PSA培養(yǎng)基 （馬鈴薯200 g，蔗糖20 g，水1 000 mL）。

1.2 試驗(yàn)方法

生防菌株培養(yǎng)：將生防菌在 PDA 平板上培養(yǎng)7 d，打取 3 個(gè) 6 mm 的菌片，置于盛有 100 mL PSA 液體培養(yǎng)基的250 mL 三角瓶中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為（25±1） ℃，搖床轉(zhuǎn)速為 110 r/min，每天取 3 瓶，過(guò)濾菌絲，收集發(fā)酵液。

觀察測(cè)定：①觀察生防菌株生長(zhǎng)過(guò)程發(fā)酵液顏色的變化。②測(cè)定生防菌株生長(zhǎng)過(guò)程菌絲干重的變化。收集發(fā)酵液在5 000 r/min離心15 min， 倒掉上清液后菌體用去離子水洗滌，離心，反復(fù)3次后放到50 ℃的烘箱中烘至恒重，在分析天平上準(zhǔn)確稱(chēng)重。③測(cè)定生防菌株生長(zhǎng)過(guò)程O(píng)D650 nm的變化。將發(fā)酵液5 000 r/min離心，取上清液，用UV751GD型分光光度計(jì)（上海精科）測(cè)定OD650 nm。④測(cè)定生防菌株生長(zhǎng)過(guò)程中pH的變化，分析生防菌株的生長(zhǎng)特性。

分析生防菌株的生長(zhǎng)階段，以生防菌株培養(yǎng)時(shí)間為分類(lèi)，以菌株GD-2和HZ-31的菌絲干重、OD650 nm、pH為指標(biāo)，構(gòu)建矩陣。以歐氏距離為相關(guān)尺度，用類(lèi)平均法進(jìn)行聚類(lèi)分析。

1.3 統(tǒng)計(jì)分析

采用Eecel軟件作圖，DPS軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 生防菌株生長(zhǎng)過(guò)程發(fā)酵液顏色的變化

2株生防菌株在培養(yǎng)過(guò)程顏色變化不同。發(fā)酵液顏色會(huì)發(fā)生階段性變化，在發(fā)酵初期（1～3 d），生防菌菌株GD-2和HZ-31的發(fā)酵液顏色與培養(yǎng)基配制時(shí)的顏色相同，沒(méi)有明顯的變化。在發(fā)酵中期（4～6 d），2株菌株發(fā)酵液的顏色發(fā)生明顯變化，菌株GD-2 發(fā)酵液在4 d 時(shí)變?yōu)槟厅S色，在6 d 時(shí)顏色加深，轉(zhuǎn)變?yōu)辄S褐色；而菌株HZ-31 發(fā)酵液在4 d 時(shí)則變?yōu)榈S色，在6 d 時(shí)顏色加深轉(zhuǎn)變?yōu)樯铧S色。在發(fā)酵后期（7 d以后），2株生防菌發(fā)酵液保持發(fā)酵6 d 時(shí)的顏色，沒(méi)有明顯變化。

2.2 生防菌株生長(zhǎng)過(guò)程中菌絲干重的變化

菌株GD-2和菌株HZ-31培養(yǎng)過(guò)程中菌絲干重的變化趨勢(shì)相差較大，2株菌株的菌絲干重增加量情況存在較大差異（圖1）。菌株GD-2菌絲干重增加量最大的時(shí)間為5～8 d，8 d 時(shí)的菌絲干重達(dá)到最大值（499.8 mg/100 mL），隨后的變化趨于平緩。而菌株HZ-31增加量最大的時(shí)間為1～4 d；4 d 時(shí)的菌絲干重達(dá)到最大值，為834.4 mg/100 mL，隨后菌絲干重急劇下降。在培養(yǎng)初期菌株HZ-31的生長(zhǎng)速度快于GD-2菌株，到培養(yǎng)后期HZ-31菌絲干重明顯低于GD-2菌株菌絲干重，2株菌株的菌絲干重的變化出現(xiàn)明顯差異，這可能與菌株的生物學(xué)特性和對(duì)培養(yǎng)基的適應(yīng)性有關(guān)。

2.3 生防菌株生長(zhǎng)過(guò)程中OD650 nm的變化

由吸光度得到的生長(zhǎng)曲線可以認(rèn)為是微生物生長(zhǎng)狀況的宏觀表現(xiàn)。通過(guò)測(cè)定不同培養(yǎng)時(shí)間的OD650 nm，可大體劃分微生物生長(zhǎng)的不同生長(zhǎng)時(shí)期，為批量生產(chǎn)提供依據(jù)。菌株GD-2和菌株HZ-31發(fā)酵過(guò)程中發(fā)酵液離心上清液的OD650 nm變化如圖2。2株菌株發(fā)酵過(guò)程中變化趨勢(shì)基本類(lèi)似，隨著發(fā)酵進(jìn)程O(píng)D650 nm逐漸增高，在發(fā)酵中期出現(xiàn)最高峰值，但是不同的菌株出現(xiàn)峰值的時(shí)間不同。GD-2菌株出現(xiàn)2個(gè)峰值，在3 d和5 d分別為0.103和0.114，之后OD650 nm變化幅度較大，8 d時(shí)達(dá)到最低峰（0.027）；而HZ-31變化較緩慢，7 d時(shí)達(dá)到最低峰（0.027）。

2.4 生防菌株生長(zhǎng)過(guò)程中pH的變化

菌株GD-2和菌株HZ-31發(fā)酵過(guò)程中pH 的變化趨勢(shì)相差較大（圖3）。菌株GD-2培養(yǎng)初期（1～3 d），pH為6.50～6.19，培養(yǎng)中期（4～6 d），pH為5.78～5.87，此時(shí)pH上升很快，培養(yǎng)后期（7～10 d），pH為6.02～8.34，變化最快，在培養(yǎng)的2～5 d，pH有所下降。菌株HZ-31從培養(yǎng)初期的6.23逐漸升高為培養(yǎng)后期的9.08～9.04，在4 d時(shí)略有波動(dòng)，從5 d開(kāi)始，pH的變化趨于平緩。結(jié)果表明，2株菌株發(fā)酵液的pH從最初的6.2左右逐漸升高8.34和9.04，培養(yǎng)過(guò)程中2株菌株pH變化過(guò)程差異較大。

2.5 生防菌株生長(zhǎng)階段聚類(lèi)分析

用聚類(lèi)分析方法對(duì)培養(yǎng)時(shí)間進(jìn)行歸類(lèi)。以培養(yǎng)時(shí)間為分類(lèi)，以菌株GD-2和HZ-31的菌絲干重、OD650 nm、pH為指標(biāo)，構(gòu)建矩陣，用歐氏距離為相關(guān)尺度，以類(lèi)平均法進(jìn)行系統(tǒng)聚類(lèi)，聚類(lèi)過(guò)程見(jiàn)表2。培養(yǎng)時(shí)間對(duì)菌絲干重、OD650 nm、pH影響見(jiàn)圖4。分析結(jié)果表明，當(dāng)λ=81.5時(shí)，可將生防菌菌株的生長(zhǎng)分為3個(gè)階段，第一個(gè)階段為適應(yīng)期，培養(yǎng)時(shí)間為1～2 d，菌株的菌絲干重、OD650 nm、pH變化較小，菌株生長(zhǎng)處于適應(yīng)階段。第二階段為對(duì)數(shù)期，培養(yǎng)時(shí)間為3～5 d，菌株的菌絲干重、OD650 nm、pH變化較大，菌株處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)階段。第三階段為穩(wěn)定期，培養(yǎng)時(shí)間為6～10 d，菌株的菌絲干重、OD650 nm、pH變化平緩，菌株生長(zhǎng)處于穩(wěn)定階段。

3 小結(jié)與討論

2株生防菌株在培養(yǎng)過(guò)程中，發(fā)酵液的顏色、菌絲干重、OD650 nm和pH都會(huì)隨著培養(yǎng)時(shí)間而變化。在相同的培養(yǎng)條件下，來(lái)源于不同寄主的2株生防菌株在培養(yǎng)過(guò)程中培養(yǎng)液顏色不同，同一菌株生長(zhǎng)過(guò)程中發(fā)酵液顏色會(huì)發(fā)生階段性變化，與其生理特性有關(guān)，也是菌株培養(yǎng)特征之一。2株菌株培養(yǎng)過(guò)程中OD650 nm隨培養(yǎng)進(jìn)程的變化而變化，在發(fā)酵期間出現(xiàn)峰值，而且峰值出現(xiàn)的時(shí)間不同。OD650 nm為生防菌株生長(zhǎng)過(guò)程中的生理變化特征之一。生防菌株在培養(yǎng)過(guò)程中色素變化和OD650 nm的變化可作為生防菌株培養(yǎng)的表征性特征。這些性狀的變化與生防菌的萌發(fā)、侵染以及傳播等生物學(xué)特性的關(guān)系有待于進(jìn)一步的研究。

2株生防菌株培養(yǎng)過(guò)程中pH增高，從最初6左右升高到后期的8.34和9.04，2株生防菌株培養(yǎng)程中pH變化差異較大。2株生防菌株在培養(yǎng)過(guò)程中，菌絲干重隨時(shí)間變化而變化，菌絲干重增加量最大的時(shí)間分別為2～4 d和5～8 d，而且菌絲干重增加的量存在較大差異。

在培養(yǎng)溫度（25±1） ℃條件下，HZ-31菌株在培養(yǎng)時(shí)間4 d時(shí)，菌絲干重最大，為834.4 mg/100 mL，pH為7.71；GD-2菌株在培養(yǎng)到8 d時(shí)菌絲干重達(dá)到最大值，為499.8 mg/100 mL， pH為7.38，說(shuō)明2株生防菌株對(duì)pH有一定的選擇性，表現(xiàn)為均偏好偏堿性的生長(zhǎng)條件。

采用PSA液體培養(yǎng)基在（25±1） ℃的條件下，來(lái)自野燕麥的GD-2菌株的生長(zhǎng)分為3個(gè)階段：1～2 d為適應(yīng)階段，菌株的菌絲干重、OD650 nm、pH變化較??；3～5 d為對(duì)數(shù)生長(zhǎng)階段，菌株的菌絲干重、OD650 nm、pH變化大；6～10 d為穩(wěn)定階段，菌株的菌絲干重、OD650 nm、pH變化平緩。而菌株HZ-31的前期生長(zhǎng)速度高于GD-2菌株，對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期提前到來(lái)，這可能與菌株的生物學(xué)特性和對(duì)培養(yǎng)基的適應(yīng)性有關(guān)，這與前人研究結(jié)果基本一致[3-6]，因此，在進(jìn)行生防菌的發(fā)酵培養(yǎng)過(guò)程中，需注意在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)階段的營(yíng)養(yǎng)供給和培養(yǎng)條件的控制。

研究2株生防菌株的生長(zhǎng)特性，對(duì)生防菌株的發(fā)酵培養(yǎng)具有較好的指導(dǎo)作用，在實(shí)際的發(fā)酵培養(yǎng)基配方及田間應(yīng)用方面，還存在著復(fù)雜的影響因素，需要進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)：

[1] 程 亮，朱海霞，郭青云.野燕麥生防菌株HZ-31的分離及致病性研究[J].西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2012，21（6）：167-173.

[2] 朱海霞，程 亮，郭青云. 3株鐮刀菌的鑒定、對(duì)野燕麥的致病力及其對(duì)5種作物的影響[J].中國(guó)生物防治，2010，26（S1）：84-89.

[3] 朱育菁，車(chē)建美，肖榮鳳，等.尖孢鐮刀菌（Fusarium oxysporum Schl.）的生長(zhǎng)特性[J].中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2007，23（8）：373-376.

[4] 藍(lán)江林，劉 波，肖榮鳳，等.溫度對(duì)幾種作物尖孢鐮刀菌菌株生長(zhǎng)的影響[J].廈門(mén)大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2004，43（S1）：67-70.

[5] 肖榮鳳，朱育菁，藍(lán)江林，等.黃瓜尖孢鐮刀菌的營(yíng)養(yǎng)特性[J].中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2008，24（5）：299-303.

[6] 鄒鳳蓮，汪志平，盧 鋼.番紅花鏈格孢菌的分離及其生物學(xué)特性研究[J].浙江大學(xué)學(xué)報(bào)（農(nóng)業(yè)與生命科學(xué)版），2006，32（2）：162-167.

（責(zé)任編輯 陳 焰）

2.4 生防菌株生長(zhǎng)過(guò)程中pH的變化

菌株GD-2和菌株HZ-31發(fā)酵過(guò)程中pH 的變化趨勢(shì)相差較大（圖3）。菌株GD-2培養(yǎng)初期（1～3 d），pH為6.50～6.19，培養(yǎng)中期（4～6 d），pH為5.78～5.87，此時(shí)pH上升很快，培養(yǎng)后期（7～10 d），pH為6.02～8.34，變化最快，在培養(yǎng)的2～5 d，pH有所下降。菌株HZ-31從培養(yǎng)初期的6.23逐漸升高為培養(yǎng)后期的9.08～9.04，在4 d時(shí)略有波動(dòng)，從5 d開(kāi)始，pH的變化趨于平緩。結(jié)果表明，2株菌株發(fā)酵液的pH從最初的6.2左右逐漸升高8.34和9.04，培養(yǎng)過(guò)程中2株菌株pH變化過(guò)程差異較大。

2.5 生防菌株生長(zhǎng)階段聚類(lèi)分析

用聚類(lèi)分析方法對(duì)培養(yǎng)時(shí)間進(jìn)行歸類(lèi)。以培養(yǎng)時(shí)間為分類(lèi)，以菌株GD-2和HZ-31的菌絲干重、OD650 nm、pH為指標(biāo)，構(gòu)建矩陣，用歐氏距離為相關(guān)尺度，以類(lèi)平均法進(jìn)行系統(tǒng)聚類(lèi)，聚類(lèi)過(guò)程見(jiàn)表2。培養(yǎng)時(shí)間對(duì)菌絲干重、OD650 nm、pH影響見(jiàn)圖4。分析結(jié)果表明，當(dāng)λ=81.5時(shí)，可將生防菌菌株的生長(zhǎng)分為3個(gè)階段，第一個(gè)階段為適應(yīng)期，培養(yǎng)時(shí)間為1～2 d，菌株的菌絲干重、OD650 nm、pH變化較小，菌株生長(zhǎng)處于適應(yīng)階段。第二階段為對(duì)數(shù)期，培養(yǎng)時(shí)間為3～5 d，菌株的菌絲干重、OD650 nm、pH變化較大，菌株處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)階段。第三階段為穩(wěn)定期，培養(yǎng)時(shí)間為6～10 d，菌株的菌絲干重、OD650 nm、pH變化平緩，菌株生長(zhǎng)處于穩(wěn)定階段。

3 小結(jié)與討論

2株生防菌株在培養(yǎng)過(guò)程中，發(fā)酵液的顏色、菌絲干重、OD650 nm和pH都會(huì)隨著培養(yǎng)時(shí)間而變化。在相同的培養(yǎng)條件下，來(lái)源于不同寄主的2株生防菌株在培養(yǎng)過(guò)程中培養(yǎng)液顏色不同，同一菌株生長(zhǎng)過(guò)程中發(fā)酵液顏色會(huì)發(fā)生階段性變化，與其生理特性有關(guān)，也是菌株培養(yǎng)特征之一。2株菌株培養(yǎng)過(guò)程中OD650 nm隨培養(yǎng)進(jìn)程的變化而變化，在發(fā)酵期間出現(xiàn)峰值，而且峰值出現(xiàn)的時(shí)間不同。OD650 nm為生防菌株生長(zhǎng)過(guò)程中的生理變化特征之一。生防菌株在培養(yǎng)過(guò)程中色素變化和OD650 nm的變化可作為生防菌株培養(yǎng)的表征性特征。這些性狀的變化與生防菌的萌發(fā)、侵染以及傳播等生物學(xué)特性的關(guān)系有待于進(jìn)一步的研究。

2株生防菌株培養(yǎng)過(guò)程中pH增高，從最初6左右升高到后期的8.34和9.04，2株生防菌株培養(yǎng)程中pH變化差異較大。2株生防菌株在培養(yǎng)過(guò)程中，菌絲干重隨時(shí)間變化而變化，菌絲干重增加量最大的時(shí)間分別為2～4 d和5～8 d，而且菌絲干重增加的量存在較大差異。

在培養(yǎng)溫度（25±1） ℃條件下，HZ-31菌株在培養(yǎng)時(shí)間4 d時(shí)，菌絲干重最大，為834.4 mg/100 mL，pH為7.71；GD-2菌株在培養(yǎng)到8 d時(shí)菌絲干重達(dá)到最大值，為499.8 mg/100 mL， pH為7.38，說(shuō)明2株生防菌株對(duì)pH有一定的選擇性，表現(xiàn)為均偏好偏堿性的生長(zhǎng)條件。

采用PSA液體培養(yǎng)基在（25±1） ℃的條件下，來(lái)自野燕麥的GD-2菌株的生長(zhǎng)分為3個(gè)階段：1～2 d為適應(yīng)階段，菌株的菌絲干重、OD650 nm、pH變化較??；3～5 d為對(duì)數(shù)生長(zhǎng)階段，菌株的菌絲干重、OD650 nm、pH變化大；6～10 d為穩(wěn)定階段，菌株的菌絲干重、OD650 nm、pH變化平緩。而菌株HZ-31的前期生長(zhǎng)速度高于GD-2菌株，對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期提前到來(lái)，這可能與菌株的生物學(xué)特性和對(duì)培養(yǎng)基的適應(yīng)性有關(guān)，這與前人研究結(jié)果基本一致[3-6]，因此，在進(jìn)行生防菌的發(fā)酵培養(yǎng)過(guò)程中，需注意在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)階段的營(yíng)養(yǎng)供給和培養(yǎng)條件的控制。

研究2株生防菌株的生長(zhǎng)特性，對(duì)生防菌株的發(fā)酵培養(yǎng)具有較好的指導(dǎo)作用，在實(shí)際的發(fā)酵培養(yǎng)基配方及田間應(yīng)用方面，還存在著復(fù)雜的影響因素，需要進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)：

[1] 程 亮，朱海霞，郭青云.野燕麥生防菌株HZ-31的分離及致病性研究[J].西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2012，21（6）：167-173.

[2] 朱海霞，程 亮，郭青云. 3株鐮刀菌的鑒定、對(duì)野燕麥的致病力及其對(duì)5種作物的影響[J].中國(guó)生物防治，2010，26（S1）：84-89.

[3] 朱育菁，車(chē)建美，肖榮鳳，等.尖孢鐮刀菌（Fusarium oxysporum Schl.）的生長(zhǎng)特性[J].中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2007，23（8）：373-376.

[4] 藍(lán)江林，劉 波，肖榮鳳，等.溫度對(duì)幾種作物尖孢鐮刀菌菌株生長(zhǎng)的影響[J].廈門(mén)大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2004，43（S1）：67-70.

[5] 肖榮鳳，朱育菁，藍(lán)江林，等.黃瓜尖孢鐮刀菌的營(yíng)養(yǎng)特性[J].中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2008，24（5）：299-303.

[6] 鄒鳳蓮，汪志平，盧 鋼.番紅花鏈格孢菌的分離及其生物學(xué)特性研究[J].浙江大學(xué)學(xué)報(bào)（農(nóng)業(yè)與生命科學(xué)版），2006，32（2）：162-167.

（責(zé)任編輯 陳 焰）

2.4 生防菌株生長(zhǎng)過(guò)程中pH的變化

菌株GD-2和菌株HZ-31發(fā)酵過(guò)程中pH 的變化趨勢(shì)相差較大（圖3）。菌株GD-2培養(yǎng)初期（1～3 d），pH為6.50～6.19，培養(yǎng)中期（4～6 d），pH為5.78～5.87，此時(shí)pH上升很快，培養(yǎng)后期（7～10 d），pH為6.02～8.34，變化最快，在培養(yǎng)的2～5 d，pH有所下降。菌株HZ-31從培養(yǎng)初期的6.23逐漸升高為培養(yǎng)后期的9.08～9.04，在4 d時(shí)略有波動(dòng)，從5 d開(kāi)始，pH的變化趨于平緩。結(jié)果表明，2株菌株發(fā)酵液的pH從最初的6.2左右逐漸升高8.34和9.04，培養(yǎng)過(guò)程中2株菌株pH變化過(guò)程差異較大。

2.5 生防菌株生長(zhǎng)階段聚類(lèi)分析

用聚類(lèi)分析方法對(duì)培養(yǎng)時(shí)間進(jìn)行歸類(lèi)。以培養(yǎng)時(shí)間為分類(lèi)，以菌株GD-2和HZ-31的菌絲干重、OD650 nm、pH為指標(biāo)，構(gòu)建矩陣，用歐氏距離為相關(guān)尺度，以類(lèi)平均法進(jìn)行系統(tǒng)聚類(lèi)，聚類(lèi)過(guò)程見(jiàn)表2。培養(yǎng)時(shí)間對(duì)菌絲干重、OD650 nm、pH影響見(jiàn)圖4。分析結(jié)果表明，當(dāng)λ=81.5時(shí)，可將生防菌菌株的生長(zhǎng)分為3個(gè)階段，第一個(gè)階段為適應(yīng)期，培養(yǎng)時(shí)間為1～2 d，菌株的菌絲干重、OD650 nm、pH變化較小，菌株生長(zhǎng)處于適應(yīng)階段。第二階段為對(duì)數(shù)期，培養(yǎng)時(shí)間為3～5 d，菌株的菌絲干重、OD650 nm、pH變化較大，菌株處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)階段。第三階段為穩(wěn)定期，培養(yǎng)時(shí)間為6～10 d，菌株的菌絲干重、OD650 nm、pH變化平緩，菌株生長(zhǎng)處于穩(wěn)定階段。

3 小結(jié)與討論

2株生防菌株在培養(yǎng)過(guò)程中，發(fā)酵液的顏色、菌絲干重、OD650 nm和pH都會(huì)隨著培養(yǎng)時(shí)間而變化。在相同的培養(yǎng)條件下，來(lái)源于不同寄主的2株生防菌株在培養(yǎng)過(guò)程中培養(yǎng)液顏色不同，同一菌株生長(zhǎng)過(guò)程中發(fā)酵液顏色會(huì)發(fā)生階段性變化，與其生理特性有關(guān)，也是菌株培養(yǎng)特征之一。2株菌株培養(yǎng)過(guò)程中OD650 nm隨培養(yǎng)進(jìn)程的變化而變化，在發(fā)酵期間出現(xiàn)峰值，而且峰值出現(xiàn)的時(shí)間不同。OD650 nm為生防菌株生長(zhǎng)過(guò)程中的生理變化特征之一。生防菌株在培養(yǎng)過(guò)程中色素變化和OD650 nm的變化可作為生防菌株培養(yǎng)的表征性特征。這些性狀的變化與生防菌的萌發(fā)、侵染以及傳播等生物學(xué)特性的關(guān)系有待于進(jìn)一步的研究。

2株生防菌株培養(yǎng)過(guò)程中pH增高，從最初6左右升高到后期的8.34和9.04，2株生防菌株培養(yǎng)程中pH變化差異較大。2株生防菌株在培養(yǎng)過(guò)程中，菌絲干重隨時(shí)間變化而變化，菌絲干重增加量最大的時(shí)間分別為2～4 d和5～8 d，而且菌絲干重增加的量存在較大差異。

在培養(yǎng)溫度（25±1） ℃條件下，HZ-31菌株在培養(yǎng)時(shí)間4 d時(shí)，菌絲干重最大，為834.4 mg/100 mL，pH為7.71；GD-2菌株在培養(yǎng)到8 d時(shí)菌絲干重達(dá)到最大值，為499.8 mg/100 mL， pH為7.38，說(shuō)明2株生防菌株對(duì)pH有一定的選擇性，表現(xiàn)為均偏好偏堿性的生長(zhǎng)條件。

采用PSA液體培養(yǎng)基在（25±1） ℃的條件下，來(lái)自野燕麥的GD-2菌株的生長(zhǎng)分為3個(gè)階段：1～2 d為適應(yīng)階段，菌株的菌絲干重、OD650 nm、pH變化較小；3～5 d為對(duì)數(shù)生長(zhǎng)階段，菌株的菌絲干重、OD650 nm、pH變化大；6～10 d為穩(wěn)定階段，菌株的菌絲干重、OD650 nm、pH變化平緩。而菌株HZ-31的前期生長(zhǎng)速度高于GD-2菌株，對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期提前到來(lái)，這可能與菌株的生物學(xué)特性和對(duì)培養(yǎng)基的適應(yīng)性有關(guān)，這與前人研究結(jié)果基本一致[3-6]，因此，在進(jìn)行生防菌的發(fā)酵培養(yǎng)過(guò)程中，需注意在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)階段的營(yíng)養(yǎng)供給和培養(yǎng)條件的控制。

研究2株生防菌株的生長(zhǎng)特性，對(duì)生防菌株的發(fā)酵培養(yǎng)具有較好的指導(dǎo)作用，在實(shí)際的發(fā)酵培養(yǎng)基配方及田間應(yīng)用方面，還存在著復(fù)雜的影響因素，需要進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)：

[1] 程 亮，朱海霞，郭青云.野燕麥生防菌株HZ-31的分離及致病性研究[J].西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2012，21（6）：167-173.

[2] 朱海霞，程 亮，郭青云. 3株鐮刀菌的鑒定、對(duì)野燕麥的致病力及其對(duì)5種作物的影響[J].中國(guó)生物防治，2010，26（S1）：84-89.

[3] 朱育菁，車(chē)建美，肖榮鳳，等.尖孢鐮刀菌（Fusarium oxysporum Schl.）的生長(zhǎng)特性[J].中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2007，23（8）：373-376.

[4] 藍(lán)江林，劉 波，肖榮鳳，等.溫度對(duì)幾種作物尖孢鐮刀菌菌株生長(zhǎng)的影響[J].廈門(mén)大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2004，43（S1）：67-70.

[5] 肖榮鳳，朱育菁，藍(lán)江林，等.黃瓜尖孢鐮刀菌的營(yíng)養(yǎng)特性[J].中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2008，24（5）：299-303.

[6] 鄒鳳蓮，汪志平，盧 鋼.番紅花鏈格孢菌的分離及其生物學(xué)特性研究[J].浙江大學(xué)學(xué)報(bào)（農(nóng)業(yè)與生命科學(xué)版），2006，32（2）：162-167.

（責(zé)任編輯 陳 焰）