陳龍浩，王雪榮，孫春玲，陳行愉，陳奕彬，韓麗萍（廣州軍區(qū)廣州總醫(yī)院藥學(xué)部，廣州 510010）

HPLC法測(cè)定鹽酸丁卡因滴眼液中羥苯乙酯的含量

陳龍浩，王雪榮，孫春玲，陳行愉，陳奕彬，韓麗萍＊（廣州軍區(qū)廣州總醫(yī)院藥學(xué)部，廣州 510010）

目的 采用高效液相色譜法測(cè)定鹽酸丁卡因滴眼液中抑菌劑羥苯乙酯的含量。方法 色譜柱為Agilent HC－C18色譜柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相為0.005mol·L－1醋酸胺溶液（每1 000mL含三乙胺10mL；冰醋酸調(diào)pH5.0）－乙腈（55∶45）；檢測(cè)波長(zhǎng)為256nm；流速1.0mL·min－1。結(jié)果 羥苯乙酯質(zhì)量濃度在14.31～143.12μg·mL－1范圍內(nèi)，與其峰面積呈良好的線性關(guān)系（r＝1），平均回收率為99.0%（RSD＝1.36%）。結(jié)論 該方法專屬性強(qiáng)、測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確、精密度高、線性好，適用于檢測(cè)鹽酸丁卡因滴眼液中羥苯乙酯的含量。

鹽酸丁卡因滴眼液；HPLC；羥苯乙酯；含量測(cè)定

鹽酸丁卡因滴眼液是臨床上常見(jiàn)的局部麻醉劑，對(duì)黏膜有良好的穿透作用，適用于測(cè)量眼壓、角膜異物剔除、眼科手術(shù)前的表面麻醉等［1］。其主要成分為鹽酸丁卡因、羥苯乙酯和氯化鈉等。

滴眼液以水為溶媒，易被微生物污染，因此，液體制劑中一般都應(yīng)添加適宜的抑菌劑，以防止制劑在貯藏和使用過(guò)程被微生物污染。羥苯乙酯為尼泊金類抑菌劑，其在液體、半固體制劑中防止微生物污染與繁殖、保證藥品安全性方面起到了十分重要的作用。但羥苯酯類的過(guò)量使用對(duì)人體有損害，其會(huì)產(chǎn)生變態(tài)反應(yīng)，也會(huì)與“對(duì)氨基族”抗原發(fā)生交叉反應(yīng)，但發(fā)生“羥苯酯類悖論”現(xiàn)象，并有類激素作用［2］。錢曉娟［3］及周蕾［4］等曾用紫外分光光度法測(cè)定鹽酸丁卡因注射液和膠漿的含量，但相比紫外分光光度法，HPLC法更加精確高效。因此，本文采用HPLC法建立了適用于測(cè)定鹽酸丁卡因滴眼液中抑菌劑羥苯乙酯含量的方法，對(duì)滴眼液中抑菌劑進(jìn)行定量控制具有實(shí)際意義。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 高效液相色譜儀（Agilent 1100系列，包括二元泵、自動(dòng)進(jìn)樣裝置、DAD檢測(cè)器、柱溫箱等）；Sartorius BP211D電子分析天平。

1.2 試藥 羥苯乙酯對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)100847－201203）；鹽酸丁卡因滴眼液（廣州軍區(qū)總醫(yī)院自制，批號(hào)130808）；乙腈和異丙醇為色譜純；醋酸銨分析純；水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 采用Agilent HC－C18色譜柱（250 mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相為0.005mol·L－1醋酸胺溶液（每1 000mL含三乙胺10mL；冰醋酸調(diào)pH5.0）－乙腈（55∶45）；流速1.0mL·min－1；檢測(cè)波長(zhǎng)為256nm。取供試品溶液20μL，注入液相色譜儀，照高效液相色譜法（《中國(guó)藥典》2010年版二部附錄ⅤD［5］）測(cè)定。見(jiàn)圖1。

圖1 HPLC圖A.羥苯乙酯對(duì)照品；B.鹽酸丁卡因滴眼液；C.空白樣品；1.羥苯乙酯Fig.1 HPLC chromatogramsA.reference substance of ethylparaben；B.Tetracaine Hydrochloride Eye Drops；C.blank sample；1.ethylparaben

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液 精密稱取羥苯乙酯35.78mg，置于100mL量瓶中，用適量水溶解，再用流動(dòng)相稀釋并定容至刻度，搖勻，得357.8μg·mL－1的羥苯乙酯對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液 精密量取樣品液1mL，置于10mL量瓶中，加流動(dòng)相溶解并定容至刻度，搖勻，制成供試品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 線性關(guān)系考察 分別精密量取對(duì)照品溶液1，2，4，6，8和10mL，置于25mL量瓶中，加流動(dòng)相溶解并定容至刻度，制成含羥苯乙酯14.31，28.62，57.25，85.87，114.5和143.12μg·mL－1的系列質(zhì)量濃度溶液，精密量取20μL注入液相色譜儀，按上述色譜條件分析，記錄色譜圖，以羥苯乙酯質(zhì)量濃度（X）對(duì)峰面積（Y）進(jìn)行線性回歸，結(jié)果羥苯乙酯質(zhì)量濃度在14.31～143.12μg·mL－1范圍內(nèi)，與其峰面積線性關(guān)系良好，回歸方程：Y＝36 670 X＋4.246，r＝1。

2.3.2 精密度實(shí)驗(yàn) 取同一供試品溶液20μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，以峰面積計(jì)算，羥苯乙酯RSD為0.49%，表明儀器精密度良好。

2.3.3 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取同一批號(hào)樣品6份，按供試品溶液制備方法處理后，分別按2.3項(xiàng)下測(cè)定，結(jié)果6份樣品的羥苯乙酯平均質(zhì)量濃度為0.242 2 mg·mL－1，RSD為1.15%，表明本方法重復(fù)性好。2.3.4 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取同一供試品溶液，分別在0，1，2，4，8和12h進(jìn)樣20μL，測(cè)定峰面積，以峰面積計(jì)算供試品溶液中羥苯乙酯RSD為0.496%。結(jié)果表明，供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.5 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 精密量取已知含量的鹽酸丁卡因滴眼液2.0mL 9份，每3份平行，置于25mL量瓶中，其中1～3號(hào)分別精密加入羥苯乙酯對(duì)照品溶液1.0mL，4～6號(hào)分別加入上述對(duì)照品溶液1.3 mL，7～9號(hào)分別加入上述對(duì)照品溶液1.6mL，分別加流動(dòng)相定容至刻度，按2.3項(xiàng)下測(cè)定峰面積，計(jì)算樣品中羥苯乙酯的含量，并計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。羥苯乙酯平均加樣回收率為99.0%，RSD為1.36%。

表1 羥苯乙酯加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果Tab.1 Results of recovery experiment of ethylparaben（n＝9）

2.3.6 樣品含量測(cè)定 取3個(gè)批次的鹽酸丁卡因滴眼液樣品，按上述測(cè)定法作3次平行測(cè)定，測(cè)定羥苯乙酯色譜峰面積，并采用標(biāo)準(zhǔn)法計(jì)算，結(jié)果鹽酸丁卡因滴眼液中羥苯乙酯的質(zhì)量濃度分別為0.239 1，0.245 4和0.241 6mg·mL－1，即羥苯乙酯為0.023 91%，0.024 54%和0.024 16%，RSD為1.31%。

3 討論

電光性眼炎是由于大量且強(qiáng)烈的紫外線照射到眼睛的角膜和結(jié)膜而被吸收引起的急性炎癥，在臨床治療上應(yīng)先用鹽酸丁卡因滴眼液等表面麻醉劑解除眼瞼痙攣并進(jìn)行下一步治療［6］。液體制劑中添加適宜的抑菌劑能對(duì)制劑的貯藏和使用過(guò)程中起到防止微生物污染的作用，因此，對(duì)鹽酸丁卡因滴眼液中的抑菌劑進(jìn)行定量測(cè)定，對(duì)滴眼液中抑菌劑進(jìn)行定量控制具有實(shí)際意義。

流動(dòng)相的考察：以0.005mol·L－1醋酸胺溶液－乙腈［7］進(jìn)行考察，結(jié)果經(jīng)優(yōu)化篩選后采用0.005 mol·L－1醋酸胺溶液－乙腈（55∶45），在該流動(dòng)相比例下羥苯乙酯的出峰時(shí)間快，峰形不拖尾且對(duì)稱性好，無(wú)雜峰干擾下色譜重復(fù)性好。

檢測(cè)波長(zhǎng)選擇256nm［7］是因?yàn)樵谠摬ㄩL(zhǎng)下鹽酸丁卡因滴眼液中羥苯乙酯有較強(qiáng)的紫外吸收，其他輔料雜質(zhì)在該波長(zhǎng)處幾乎無(wú)紫外吸收，故本實(shí)驗(yàn)選擇256nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

［1］ 朱迎軍，王偉嬌，楊漢初.HPLC法測(cè)定鹽酸丁卡因滴眼液中鹽酸丁卡因的含量［J］.中國(guó)藥品標(biāo)準(zhǔn)，2013，14（5）：356－357.

［2］ 李中東，張?jiān)栖?，郭燕萍，?羥苯酯類防腐劑的不良反應(yīng)［J］.中國(guó)藥物警戒，2012，9（5）：303－305.

［3］ 錢曉娟.紫外分光光度法測(cè)定鹽酸丁卡因注射液的含量［J］.西北藥學(xué)雜志，2003，18（1）：6－7.

［4］ 周蕾，李龍健.紫外分光光度法測(cè)定鹽酸丁卡因膠漿含量［J］.西北藥學(xué)雜志，2004，19（4）：155－156.

［5］ 國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典2010年版［S］.二部.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：附錄ⅤD.

［6］ 張曉英，楊玉珍，陳柳珍.紫外線燈消毒引起電光性眼炎的原因分析與防護(hù)［J］.護(hù)理實(shí)踐與研究，2009，6（24）：105－106.

［7］ 羅亞虹，陳瑩，喬艷.高效液相色譜法測(cè)定鹽酸丁卡因滴眼液中兩組分含量［J］.中國(guó)藥業(yè)，2009，18（14）：31－32.

Determination of ethylparaben in Tetracaine Hydrochloride Eye Drops by HPLC

CHEN Longhao，WANG Xuerong，SUN Chunling，CHEN Xingyu，CHEN Yibin，HAN Liping＊（Pharmacy of Guangzhou General Hospital of Guangzhou Military Region，Guangzhou 510010，China）

Objective To determine the contents of ethylparaben in Tetracaine Hydrochloride Eye Drops by HPLC.Method TheHPLC column was Agilent HC－C18（250mm×4.6mm，5μm）.The mobile phase was 0.005mol·L－1ammonium acetate（1 000 mL consisted of 10mL triethanolamine，pH adjusted to 5.0with acetic acid）－acetonitrile（55∶45）with a flow rate of 1.0 mL·min－1.The detection wavelength was 256nm.Results A linearity between ethylparaben concentration and peak area was achieved in the range of 14.31－143.12μg·mL－1（r＝1）.The average recovery was 99.0%with RSD 1.36%.Conclusion The method is reproducible，accurate and precise，which is suitable for the determination of ethylparaben as bacteriostat in Tetracaine Hydrochloride Eye Drops.

Tetracaine Hydrochloride Eye Drops；HPLC；ethylparaben；quantitative analysis

10.3969／j.issn.1004－2407.2015.02.014

R282

A

1004－2407（2015）02－0149－03

2014－09－11）

軍隊(duì)醫(yī)療制劑標(biāo)準(zhǔn)提高科研重大專項(xiàng)課題（編號(hào)：13ZJZ24）

陳龍浩，男，主管藥師

＊通信作者：韓麗萍，女，碩士，主任藥師