顧 湘，楊 雪，葛紅娟，宋 妍，李建林，陳廣通＊（.南通大學藥學院，南通 22600；2.南通大學附屬腫瘤醫(yī)院，南通 22600）

牡荊子的化學成分研究Ⅱ

顧 湘1，2，楊 雪1，葛紅娟1，宋 妍1，李建林1，陳廣通1＊（1.南通大學藥學院，南通 226001；2.南通大學附屬腫瘤醫(yī)院，南通 226001）

目的 研究牡荊子的化學成分。方法 利用硅膠柱色譜法、ODS制備高效液相色譜法及重結(jié)晶等方法分離純化；通過核磁共振譜、質(zhì)譜等光譜數(shù)據(jù)鑒定化合物結(jié)構(gòu)。結(jié)果 從牡荊子乙酸乙酯萃取部分分離得到12個化合物，其結(jié)構(gòu)分別鑒定為：6－羥基－4β－（4－羥基－3－甲氧基苯基）－3α－羥甲基－7－甲氧基－3，4－二氫－2－萘醛 （6－h(huán)ydroxy－4β－（4－h(huán)ydroxy－3－methoxyphenyl）－3αhydroxymethyl－7－methoxy－3，4－dihydro－2－naphthaldehyde，1）；芹菜素（apigenin，2）；紫花牡荊素（casticin，3）；對羥基苯甲酸（p－h(huán)ydroxybenzoic acid，4）；5－羥基－6，7，3′，4′－四甲氧基黃酮（5－h(huán)ydroxy－6，7，3′，4′－tetramethoxyflavone，5）；3－吲哚甲酸（indole－3－carboxylic acid，6）；香豆酸（coumalic acid，7）；2α，3α，24－三羥基烏蘇烷－12－烯－28－酸（2α，3α，24－trihydroxyurs－12－en－28－oic acid，8）；熊果酸（ursolic acid，9）；異落葉松脂素（isolariciresinol，10）；7，4′－二羥基黃酮（7，4′－dihydroxyflavone，11）；刺芒柄花素（formononetin，12）。結(jié)論 化合物2，6，8，11和12為首次從該屬植物中分離得到。

牡荊屬；牡荊子；化學成分

牡荊子為馬鞭草科植物牡荊Vitex negundo L.var.cannabifolia的干燥成熟果實，具有祛痰止咳、平喘理氣和止痛之功效?！吨兴幋筠o典》、《本草綱目》對其功效均有記載。研究表明，牡荊屬植物富含木脂素類、黃酮類、二萜類等成分，這些成分是該屬植物抗氧化、抗炎、抗菌、鎮(zhèn)痛等活性的基礎［1－3］?，F(xiàn)代藥理研究表明，牡荊子具有鎮(zhèn)痛、平喘、抗炎、抗菌、抗氧化等作用［4－6］。牡荊子分布廣泛，資源豐富，具有很好的開發(fā)價值和前景。但由于對其化學成分研究不夠深入，其物質(zhì)基礎不夠明確，限制了牡荊子的進一步開發(fā)與利用。為進一步探討牡荊子藥理作用的物質(zhì)基礎，更好地開發(fā)和利用牡荊子資源，本實驗對牡荊子的乙酸乙酯提取物進行了系統(tǒng)研究，從中分離并鑒定了12個化合物。分別為：6－羥基－4β－（4－羥基－3－甲氧基苯基）－3α－羥甲基－7－甲氧基－3，4－二氫－2－萘醛（6－h(huán)ydroxy－4β－（4－h(huán)ydroxy－3－methoxyphenyl）－3α－h(huán)ydro－xymethyl－7－methoxy－3，4－dihydro－2－naphthaldehyde，1）；芹菜素（apigenin，2）；紫花牡荊素（casticin，3）；對羥基苯甲酸（p－h(huán)ydroxybenzoic acid，4）；5－羥基－6，7，3′，4′－四甲氧基黃酮（5－h(huán)ydroxy－6，7，3′，4′－tetramethoxyflavone，5）；3－吲哚甲酸（indole－3－carboxylic acid，6）；香豆酸（coumalic acid，7）；2α，3α，24－三羥基烏蘇烷－12－烯－28－酸（2α，3α，24－trihydroxyurs－12－en－28－oic acid，8）；熊果酸（ursolic acid，9）；異落葉松脂素（isolariciresinol，10）；7，4′－二羥基黃酮（7，4′－dihydroxyflavone，11）；刺芒柄花素（formononetin，12）。其中化合物2，6，8，11，12為首次從該屬植物中分離得到。

1 儀器與材料

1.1 儀器 XT－5型顯微熔點測定儀（北京科儀電光儀器廠）；Bruker ARX－500核磁共振波譜儀（瑞士Bruker公司）；Agilent 1100Series LC／MSD Trap質(zhì)譜儀；制備型HPLC（日本島津公司）Hedera C18反相色譜柱（250mm×10mm，5μm），ODS柱（YMCPack ODS－A，250mm×10mm，5μm）。

1.2 材料 色譜用硅膠200～300目（青島海洋化工廠）；二氯甲烷、甲醇、石油醚、丙酮均為分析純（國藥化學試劑有限公司）；牡荊子由南通三越中藥飲片有限公司提供，經(jīng)鑒定。

2 提取與分離

將2kg牡荊子粉碎成粗粉后加入10倍量體積分數(shù)80%乙醇，浸泡過夜，煮沸，回流提取2次，每次4h，合并醇提液，減壓濃縮至無醇味。依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分別萃取3次，回收溶劑得到相應的萃取物。

取乙酸乙酯部分6g，上硅膠柱（300g），以二氯甲烷－甲醇（100∶1～5∶1）進行梯度洗脫，薄層色譜檢視，合并相近流份后，反復進行硅膠柱色譜，用不同比例石油醚－丙酮梯度洗脫，后經(jīng)制備高效液相色譜法等方法，得到12個化合物：化合物1（20mg），化合物2（42mg），化合物3（15mg），化合物4（14mg），化合物5（9mg），化合物6（30mg），化合物7（11mg），化合物8（18mg），化合物9（13mg），化合物10（18 mg），化合物11（15mg），化合物12（8mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1 黃色針晶（CHCl3－MeOH），mp 126～127℃，ESI－MS m／z：357［M＋H］＋。1H－NMR（DMSO，500MHz）：δ9.52（1H，s，H－2α），7.55（1H，s，H－1），7.16（1H，s，H－8），6.71（1H，s，H－5），6.64（1H，d，J＝1.5Hz，H－2′），6.59（1H，d，J＝8.0Hz，H－5′），6.21（1H，dd，J＝1.5，8.0Hz，H－6′），4.32（1H，s，H－4），3.87（3H，s，OCH3－3′），3.72（3H，s，OCH3－7），3.36（1H，m，H－3α），3.06（1H，m，H－3），2.95（1H，m，H－3α）。13C－NMR（DMSO，125MHz）：δ192.6（C－2α），149.8（C－6），147.4（C－3′），147.2（C－1），146.8（C－7），144.9（C－4′），136.1（C－1′），134.5（C－2），132.9（C－10），122.8（C－9），119.3（C－6′），117.5（C－8），115.3（C－5′），113.1（C－5），111.6（C－2′），60.7（C－3α），55.8（OCH3－3′），55.6（OCH3－7），48.7（C－3），42.2（C－4）。以上數(shù)據(jù)與文獻［7］報道的6－羥基－4β－（4－羥基－3－甲氧基苯基）－3α－羥甲基－7－甲氧基－3，4－二氫－2－萘醛（6－h(huán)ydroxy－4β－（4－h(huán)ydroxy－3－methoxyphenyl）－3α－h(huán)ydroxymethyl－7－methoxy－3，4－dihydro－2－naphthaldehyde）基本一致，故鑒定化合物1為6－羥基－4β－（4－羥基－3－甲氧基苯基）－3α－羥甲基－7－甲氧基－3，4－二氫－2－萘醛。

化合物2 黃色粉末（甲醇），ESI－MS m／z：269［M－H］－。1H－NMR（DMSO，500MHz）δ：12.95（1H， s，5－OH），10.87（1H，s，7－OH），10.38（1H，s，4′－OH），7.92（2H，d，J＝8.7Hz，H－2′，6′），6.93（2H，d，J＝8.7Hz，H－3′，5′），6.77（1H，s，H－3），6.49（1H，d，J＝1.9Hz，H－8），6.20（1H，d，J＝1.9 Hz，H－6）。13C－NMR（DMSO，125MHz）δ：181.8（C－4），164.4（C－2），163.8（C－7），161.5（C－5），161.2（C－4′），157.4（C－9），128.5（C－2′，6′），121.2（C－1′），116.0（C－3′，5′），103.7（C－10），102.8（C－3），98.9（C－6），94.0（C－8）。將其氫譜和碳譜數(shù)據(jù)與相關文獻報道比較［8］，鑒定化合物2為芹菜素。

化合物3 黃色結(jié)晶（MeOH），mp 189～190℃，鹽酸－鎂粉反應陽性，ESI－MS m／z：375［M＋H］＋。1H－NMR（CDCl3，500MHz）：δ12.58（1H，brs，OH－5），7.74（1H，dd，J＝2.5，8.5Hz，H－6′），7.68（1H，d，J＝2.5Hz，H－2′），6.98（1H，d，J＝8.5Hz，H－5′），6.54（1H，s，H－8），3.98（3H，s，OCH3－3），3.95（3H，s，OCH3－6），3.92（3H，s，OCH3－7），3.82（3H，s，OCH3－4′）。13C－NMR（CDCl3，125MHz）：δ179.0（C－4），158.9（C－7），155.5（C－9），152.7（C－5），152.2（C－2），148.8（C－4′），145.5（C－3′），139.0（C－3），132.2（C－6），123.5（C－1′），121.5（C－6′），114.3（C－5′），110.3（C－2′），106.5（C－10），90.3（C－8），60.9（OCH3－3），59.9（OCH3－6），56.1（OCH3－7），55.8（OCH3－4′）。以上數(shù)據(jù)與文獻［9］報道的紫花牡荊素（casticin）基本一致，故鑒定化合物3為紫花牡荊素。

化合物4 無色針晶（甲醇），mp 214～216℃。ESI－MS（m／z）：137.2［M－H］－。1H－NMR（400 MHz，CD3OD）δ：8.00（1H，d，J＝8.8Hz，H－2），8.00（1H，d，J＝8.8Hz，H－6），6.94（1H，d，J＝8.8Hz，H－3），6.94（1H，d，J＝8.8Hz，H－5）。13CNMR（100MHz，CD3OD）δ：171.4（COOH），163.7（C－4），133.8（C－2，C－6），123.2（C－1），116.8（C－3，C－5）。將其氫譜和碳譜數(shù)據(jù)與相關文獻報道比較［10］，鑒定化合物4為對羥基苯甲酸。

化合物5 黃色粉末（CHCl3），ESI－MS m／z：359［M＋1］＋。1H－NMR（CDCl3，500MHz）：δ 7.42（1H，dd，J＝2.0，9.0Hz，H－6′），7.24（1H，d，J＝2.0Hz，H－2′），6.88（1H，d，J＝9.0Hz，H－5′），6.52（1H，s，H－8），6.47（1H，s，H－3），3.89（3H，s，OCH3－7），3.87（3H，s，OCH3－4′），3.86（3H，s，OCH3－3′），3.84（3H，s，OCH3－6）。13C－NMR（CDCl3，125MHz）：δ183.7（C－4），165.0（C－2），159.8（C－7），154.3（C－5），154.1（C－9），153.3（C－4′），150.4（C－3′），133.7（C－6），124.8（C－1′），121.2（C－6′），112.1（C－5′），109.8（C－2′），107.2（C－10），105.4（C－3），91.7（C－8），61.9（OCH3－6），57.4（OCH3－7），57.2（OCH3－4′），57.1（OCH3－3′）。以上數(shù)據(jù)與文獻［11］報道的5－羥基－6，7，3′，4′－四甲氧基黃酮（5－h(huán)ydroxy－6，7，3′，4′－tetramethoxyflavone）基本一致，因此鑒定化合物5為5－羥基－6，7，3′，4′－四甲氧基黃酮。

化合物6 黃色晶體（甲醇），mp 226～228℃。ESI－MS（m／z）：162［M＋H］＋。1H－NMR（400 MHz，CD3OD）δ：8.04（1H，d，J＝7.1Hz，H－4），7.94（1H，s，H－2），7.42（1H，d，J＝7.1Hz，H－7），7.16（2H，m，H－5，H－6）。13C－NMR（100 MHz，CD3OD）δ：169.3（COOH），138.2（C－8），133.4（C－2），127.6（C－9），123.6（C－5），122.4（C－6），122.0（C－4），112.9（C－7），108.9（C－3）。將其氫譜和碳譜數(shù)據(jù)與相關文獻報道比較［12］，鑒定化合物6為3－吲哚甲酸。

化合物7 白色針晶（甲醇），mp 205～206℃。ESI－MS（m／z）：163.1［M－H］－。1H－NMR（400 MHz，CD3OD）δ：7.58（1H，d，J＝15.9Hz，H－7），7.44（1H，d，J＝8.6Hz，H－2），7.44（1H，d，J＝8.6Hz，H－6），6.80（1H，d，J＝8.6Hz，H－3），6.80（1H，d，J＝8.6Hz，H－5），6.27（1H，d，J＝15.9Hz，H－8）；13C－NMR（100MHz，CD3OD）δ：171.7（C－9），161.1（C－4），146.4（C－7），131.1（C－2，C－6），127.4（C－1），116.8（C－3，C－5），115.9（C－8）。將其氫譜和碳譜數(shù)據(jù)與相關文獻報道比較［13］，鑒定化合物7為香豆酸。

化合物8 白色無定形粉末（甲醇），mp 266～268℃。ESI－MS（m／z）：511［M＋Na］＋。Liebermann－Burhard反應陽性。1H－NMR（400MHz，CD3OD）δ：5.43（1H，br.s，H－12），4.56（1H，d，J＝1.8Hz，H－3β），4.41（1H，m，H－2β），4.08（1H，d，J＝10.8Hz，H－24），3.78（1H，d，J＝10.8，H－24），2.59（1H，d，J＝11.4Hz，H－18），1.65，1.10，1.00，0.97，0.94，0.90（each 3H，s，6×CH3）；13C－NMR（100MHz，CD3OD）δ：180.1（COOH），139.8（C－13），126.7（C－12），74.6（C－3），67.0（C－2），65.9（C－24），54.4（C－18），50.0（C－5），48.6（C－9），48.4（C－17），45.5（C－4），43.4（C－1），42.7（C－14），40.9（C－8），40.4（C－19），40.4（C－20），39.2（C－10），38.1（C－22），34.6（C－7），31.8（C－21），29.2（C－15），25.3（C－16），24.6（C－11），24.2（C－23），23.2（C－27），21.6（C－30），19.4（C－6），17.7（C－29），17.7（C－26），17.5（C－25）。將其氫譜和碳譜數(shù)據(jù)與相關文獻報道［14］比較，鑒定化合物8為2α，3α，24－三羥基烏蘇烷－12－烯－28酸。

化合物9 白色針狀結(jié)晶（氯仿），mp 284～286℃，ESI－MS（m／z）：457［M＋H］＋。Liebermann－Burhard反應陽性。13H－NMR（400MHz，CDCl3）δ：5.31（1H，dd，J＝3.5，3.5Hz，H－12），3.25（1H，dd，J＝8.9，6.9Hz，H－3α），2.32（1H，d，J＝11.3Hz，H－18β），1.12（3H，s，Me－27），1.03（3H，s，Me－26），0.95（3H，d，J＝6.3Hz，Me－30），0.90（3H，s，Me－23），0.89（3H，d，J＝5.4Hz，Me－29），0.85（3H，s，Me－25），0.81（3H，s，Me－24）。13C－NMR數(shù)據(jù)與相關文獻報道［15］基本一致，鑒定化合物9為熊果酸。

化合物10 白色粉末（MeOH），ESI－MS m／z：361［M＋1］＋。1H－NMR（CD3OD，500MHz）：δ 6.54（1H，s，H－2），6.12（1H，s，H－5），6.58（1H，d，J＝1.8Hz，H－2′），6.65（1H，d，J＝7.9Hz，H－5′），6.52（1H，dd，J＝1.8，7.9Hz，H－6′），3.74（1H，m，H－8′），3.65（1H，m，H－9′a），3.36（1H，m，H－9′b），3.58（2H，m，H－9），2.71（2H，d，J＝7.7Hz，H－7），1.92（1H，m，H－8），1.65（1H，m，H－7′），3.71（3H，s，OCH3－3），3.68（3H，s，OCH3－3′）。13C－NMR（CD3OD，125MHz）：δ149.0（C－3），147.2（C－3′），146.1（C－4），145.4（C－4′），138.3（C－1′），134.1（C－6），128.8（C－1），123.2（C－6′），117.4（C－5），116.2（C－5′），113.8（C－2），112.4（C－2′），66.1（C－9），62.3（C－9′），48.8（C－8′），48.0（C－7′），39.9（C－8），33.6（C－7），56.4（OCH3－3），56.3（OCH3－3′）。以上數(shù)據(jù)與文獻［16］報道的異落葉松脂素（isolariciresinol）基本一致，因此鑒定化合物10為異落葉松脂素。

化合物11 白色粉末（MeOH），mp 314～316°C，ESI－MS（m／z）：254［M＋H］＋。1H－NMR（500MHz，DMSO－d6）δ：6.70（1H，s，H－3），6.91（1H，dd，J＝9.0，2.0Hz，H－6），6.93（2H，d，J＝9.0Hz，H－3′，5′），6.96（1H，d，J＝2.0Hz，H－8），7.85（1H，d，J＝9.0Hz，H－5），7.90（2H，d，J＝9.0Hz，H－2′，6′）；13C－NMR（125MHz，DMSO－d6）δ：162.4（C－2），104.4（C－3），176.2（C－4），126.4（C－5），114.9（C－6），162.9（C－7），102.4（C－8），157.4（C－9），115.9（C－10），121.7（C－1′），128.0（C－2′，6′），115.8（C－3′，5′），160.8（C－4′）。以上波譜數(shù)據(jù)與相關文獻報道基本一致［17］，故鑒定化合物11為7，4′－二羥基黃酮。

化合物12 白色針狀結(jié)晶（MeOH），mp 257～258℃，ESI－MS（m／z）：269［M＋H］＋。1H－NMR（500MHz，DMSO－d6）δ：3.78（3H，s，OCH3），6.87（1H，d，J＝2.2Hz，H－8），6.94（1H，dd，J＝8.8，2.2Hz，H－6），6.96（2H，d，J＝8.7Hz，H－3′，5′），7.50（2H，d，J＝8.7Hz，H－2′，6′），7.97（1H，d，J＝8.8Hz，H－5），8.33（1H，s，H－2），10.80（1H，br s，－OH）；13C－NMR（125MHz，DMSO－d6）δ：153.1（C－2），123.1（C－3），174.6（C－4），127.3（C－5），115.1（C－6），162.5（C－7），102.1（C－8），157.4（C－9），116.6（C－10），124.2（C－1′），130.0（C－2′，6′），113.6（C－3′，5′），158.9（C－4′），55.1（4′－OCH3）。以上波譜數(shù)據(jù)與相關文獻報道基本一致［18］，故鑒定化合物12為刺芒柄花素。

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Studies on the chemical constituents of Vitex negundo L.var.cannabifoliafruitsⅡ

GU Xiang1，2，YANG Xue1，GE Hongjuan1，SONG Yan1，LI Jianlin1，CHEN Guangtong1＊（1.School of Pharmacy，Nantong University，Nantong 226001，China；2.Affiliated Cancer Hospital to Nantong University，Nantong 226001，China）

Objective To study the chemical constituents of Vitex negundo L.var.cannabifoliafruits.Methods The constituents were isolated by silica gel chromatography，ODS preparative liquid chromatography，and their structures were elucidated by chemical properties and spectroscopic analysis.Results Twelve compounds were obtained from the ethyl acetate extracts，their structures were elucidated as：6－h(huán)ydroxy－4β－（4－h(huán)ydroxy－3－methoxyphenyl）－3α－h(huán)ydroxymethyl－7－methoxy－3，4－dihydro－2－naphthaldehyde（1），apigenin（2），casticin（3），p－h(huán)ydroxybenzoic acid（4），5－h(huán)ydroxy－6，7，3′，4′－tetramethoxyflavone（5），indole－3－carboxylic acid（6），coumalic acid（7），2α，3α，24－trihydroxyurs－12－en－28－oic acid（8），ursolic acid（9），isolariciresinol（10），7，4′－dihydroxyflavone（11），and formononetin（12）.Conclusion Compounds 2，6，8，11，12were obtained from this species for the first time.

Vitexspecies；Vitex negundo L.var.cannabifoliafruits；chemical constituents

10.3969／j.issn.1004－2407.2015.02.002

R284

A

1004－2407（2015）02－0114－04

2014－10－21）

南通市科技項目（編號：AS2011019）

顧湘，男，在讀碩士研究生

＊通信作者：陳廣通，男，博士，副教授，碩士生導師