賀學(xué)英，王 輝，湯菊莉，管 博，曾亞力，史建峰

(北京市醫(yī)療器械檢驗所，醫(yī)療器械檢驗與安全性評價北京市重點實驗室，北京101111)

SD大鼠血液生化指標(biāo)正常區(qū)間初步建立

賀學(xué)英，王 輝，湯菊莉，管 博，曾亞力，史建峰

(北京市醫(yī)療器械檢驗所，醫(yī)療器械檢驗與安全性評價北京市重點實驗室，北京101111)

實驗動物血液生化檢測是評價長期應(yīng)用于人體的醫(yī)療器械毒性的必不可少的指標(biāo)。本實驗擬建立亞慢毒性試驗中最常用的SD大鼠多項生化指標(biāo)的正常參考區(qū)間，用以指導(dǎo)對試驗結(jié)果的正確分析。通過近3年數(shù)據(jù)的積累，目前已初步建立15項生化指標(biāo)的本實驗室正常參考區(qū)間。在研究過程中也發(fā)現(xiàn)采用人血檢測的試劑時，要慎重確立檢測條件，種系差異會造成生化反應(yīng)條件的變化，建立穩(wěn)定的研究系統(tǒng)的參考區(qū)間可能是解決這一問題的可行方式。

SD大鼠;生化檢測;參考區(qū)間

0 前言

亞慢毒性試驗是評價植入人體或反復(fù)長期應(yīng)用于人體的醫(yī)療器械的安全性的重要手段，根據(jù)GB/ T16886.11－2011《醫(yī)療器械生物學(xué)評價—全身毒性試驗(ISO 10993.11:2006，IDT)》中的要求進行醫(yī)療器械亞慢毒性試驗時，血液生化檢測是反應(yīng)毒性變化的必不可少的指標(biāo)。但目前尚無實驗動物血液學(xué)、血液生化等的權(quán)威參考值，也鮮有專用的檢測試劑(基本使用人血檢測試劑)，再加之動物品系的差異，因此各實驗室之間的數(shù)據(jù)可比性差，建立實驗室自己系統(tǒng)的正常參考區(qū)間對于動物生化檢驗結(jié)果的分析具有重大意義，這關(guān)系到能否對待檢物做出客觀科學(xué)的評價。本研究擬建立我室常用的亞慢實驗動物—SD大鼠血液生化指標(biāo)的正常參考區(qū)間以指導(dǎo)相關(guān)試驗的結(jié)果分析。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

SD大鼠，雌雄各半。

1.2 檢測生化項目

總蛋白(Total protein)、白蛋白(Albumin)、總膽紅素(Total bilirubin)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶/谷氨酸－草酰乙酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)、肌酐(Creatinine)、尿素(U-rea)、肌酸激酶(CK)、葡萄糖(Glucose)、總膽固醇(CHO)、甘油三酯(TG)、鉀離子(K)，鈉離子(Na)和氯離子(CL)。

2 檢測系統(tǒng)

(1)儀器:日立7180生化分析儀。

(2)試劑:除氯離子檢測試劑為九強生物，其它項目均采用中生北控生化試劑。

3 試驗方法

(1)為了更好地應(yīng)用于亞慢試驗中生化檢測項目的分析，參考區(qū)間測定在亞慢試驗過程中進行。由于所檢醫(yī)療器械產(chǎn)品多數(shù)為預(yù)期低毒樣品(很多已在臨床應(yīng)用多年)，因此本著“3R”的動物福利原則，為減少實驗動物使用量，我們同時檢測對照組及試驗組試驗動物的相關(guān)指標(biāo)，對各檢測項目所得結(jié)果進行統(tǒng)計分析，如各組間結(jié)果無統(tǒng)計學(xué)差異，則將相關(guān)實驗數(shù)據(jù)均納入?yún)⒖紖^(qū)間的測定中，在數(shù)據(jù)處理中均刪去離群值(超出均值 ± 3SD)。

(2)由于在亞慢試驗中采用不同給藥途徑，各途徑給藥時間有較大差異，如連續(xù)14d經(jīng)靜脈給藥，連續(xù)28d靜脈給藥，90d經(jīng)口給藥，分別對應(yīng)8～10周齡，10～12周齡，19～21周齡大鼠;為了排除生化指標(biāo)隨年齡變化，本研究分別統(tǒng)計3個年齡組別大鼠各項指標(biāo)的參考區(qū)間，以更好指導(dǎo)實際工作，做出客觀科學(xué)的分析。

4 結(jié)果與討論

4.1 8～10周齡SD大鼠15項生化指標(biāo)檢測的參考區(qū)間

歷時3年，共獲得雌雄各140個有效數(shù)據(jù)，經(jīng)統(tǒng)計分析，剔除離群值，15項生化指標(biāo)參考區(qū)間見表1(雄)，表2(雌)。

4.2 10～12周齡SD大鼠15項生化指標(biāo)檢測的參考區(qū)間

表1 8～10周齡SD大鼠15項生化指標(biāo)檢測的參考區(qū)間(雄，n=140)

表2 8～10周齡SD大鼠15項生化指標(biāo)檢測的參考區(qū)間(雌，n=140)

表3 10～12周齡SD大鼠15項生化指標(biāo)檢測的參考區(qū)間(雄，n=50)

表4 10～12周齡SD大鼠15項生化指標(biāo)檢測的參考區(qū)間(雌，n=50)

表5 19～21周齡SD大鼠15項生化指標(biāo)檢測的參考區(qū)間(雄，n=120)

表6 19～21周齡SD大鼠15項生化指標(biāo)檢測的參考區(qū)間(雌，n=120)

歷時3年，共獲得雌雄各50個有效數(shù)據(jù)，經(jīng)統(tǒng)計分析，剔除離群值，15項生化指標(biāo)參考區(qū)間見表3(雄)，表4(雌)。

4.3 19～21周齡SD大鼠15項生化指標(biāo)檢測的參考區(qū)間

歷時3年，共獲得雌雄各120個有效數(shù)據(jù)，經(jīng)統(tǒng)計分析，剔除離群值，15項生化指標(biāo)參考區(qū)間見表5(雄)，表6(雌)。

檢測數(shù)據(jù)顯示不同周齡，不同性別大鼠在有些生化指標(biāo)上有較大的差異，如ALP隨著動物周齡的增加，該值不斷下降，而且雌雄鼠之間也有較大差異，如圖1所示。另外總蛋白、白蛋白、尿素氮等指標(biāo)性別間差異也較大，而且隨大鼠周齡增加呈逐漸升高趨勢，如不進行分層統(tǒng)計，則有可能誤用參考區(qū)間。

在參考區(qū)間建立期間，還發(fā)現(xiàn)大鼠白蛋白與總蛋白比值基本都小于1，這與人類的參考區(qū)間有較大不同，經(jīng)與蛋白電泳進行比對后，發(fā)現(xiàn)應(yīng)用臨床生化試劑檢測大鼠血清白蛋白數(shù)值較低，校正系數(shù)為1.1(本研究中白蛋白數(shù)值均未進行校正)。這點也提示我們直接應(yīng)用人類臨床試劑進行動物指標(biāo)檢測可能會存在種屬之間的差異從而造成測定結(jié)果偏差，但如果每個檢測機構(gòu)的系統(tǒng)穩(wěn)定，建立特定的參考區(qū)間用以該系統(tǒng)數(shù)據(jù)的分析時則不會造成結(jié)論上的錯誤，但同時也說明需慎重采用不同系統(tǒng)所得的參考區(qū)間。

5 結(jié)論

亞慢試驗中觀測的生化指標(biāo)，有些項目的檢測值與大鼠周齡、性別有很大的關(guān)聯(lián)性，因此建立與標(biāo)準(zhǔn)中要求相應(yīng)的不同周齡、性別大鼠的生化指標(biāo)參考區(qū)間對正確分析試驗結(jié)果有重要意義。

圖1 不同性別不同周齡大鼠ALP變化

［1］苗明.實驗動物和動物實驗技術(shù)［M］.北京:中國醫(yī)藥出版社，1997，336，337，353－354.

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［5］GB/T 16886.11－2011醫(yī)療器械生物學(xué)評價.第11部分:全身毒性試驗(ISO 10993.11:2006，IDT)［S］.

［6］YY/T 0127.15－2009口腔醫(yī)療器械生物學(xué)評價.第2單元:試驗方法亞急性和亞慢性全身毒性試驗:經(jīng)口途徑［S］.

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