段曉穎， 范蘇玉， 平佳宜， 牛夢(mèng)霞

(1. 河南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院國(guó)家中醫(yī)藥管理局中藥制劑三級(jí)實(shí)驗(yàn)室，河南鄭州450000;2. 河南中醫(yī)學(xué)院，河南 鄭州450008;3. 開(kāi)封市中醫(yī)院，河南 開(kāi)封475000)

腸潰寧 (苦參，吳茱萸，烏梅，椿皮)微片［1］是基于生物黏附技術(shù)制成的直徑為2 ～3 mm的結(jié)腸定位小藥片，它由生物黏附材料制成含藥片芯，然后選擇一定pH 的腸溶衣材料進(jìn)行包衣。該劑型是一種新型的多單元口服結(jié)腸定位［2］的緩控釋制劑，一個(gè)劑量的藥物分散在多個(gè)相互獨(dú)立的微小單元中，口服后可增大藥物與與結(jié)腸黏膜的接觸面積，由于它們的生物黏附特性，可使其在結(jié)腸壁長(zhǎng)時(shí)間黏附、緩慢釋藥，并維持局部較高的藥物濃度，減少用藥次數(shù)。同時(shí)，個(gè)別小單元在制備工藝上的缺陷不會(huì)對(duì)整體制劑的釋藥行為產(chǎn)生嚴(yán)重影響，也是該劑型的重要特性。本實(shí)驗(yàn)主要考察了腸潰寧結(jié)腸定位微片片芯處方及其包衣的最佳成型工藝。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 ZP-7A 旋轉(zhuǎn)式壓片機(jī)(上海亞力機(jī)械公司);Waters e2695 HPLC 色譜儀(美國(guó)Waters公司);Sartorius CP225D 電子天平(德國(guó)賽多利斯公司);AEL-200 電子天平(日本島津公司);ZRS-8C 智能溶出試驗(yàn)儀(天津大學(xué)無(wú)線電廠);RE-520 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 (上海亞榮生化儀器廠);HK250 科導(dǎo)臺(tái)式超聲波清洗器(上海漢克科學(xué)儀器有限公司);SHB-B95 型循環(huán)水式多用真空泵(鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司);BYG-A 型溫控小型包衣機(jī) (上海銘翔藥檢儀器有限公司);GZX-9070 MBE 數(shù)顯鼓風(fēng)干燥箱(上海博迅實(shí)業(yè)有限公司)。

1.2 試藥 苦參堿(批號(hào)110805-200508)、氧化苦參堿(批號(hào)110780-201007)對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所);尤特奇S100 (德國(guó)Rhom 公司);β-CD (曲阜市天利藥用輔料有限公司);鄰苯二甲酸二乙酯(DEP)、卡波姆934P (CP934P)、羥丙甲基纖維素 (HPMC)、羥丙基纖維素(HPC)、殼聚糖(美國(guó)陶氏公司);胰酶(中國(guó)醫(yī)藥上?；瘜W(xué)試劑采購(gòu)供應(yīng)站);胃蛋白酶(上海華碩精細(xì)化學(xué)品有限公司)。甲醇、乙腈、磷酸、無(wú)水乙醇均為色譜純(德國(guó)Merck 公司);其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 片芯成型處方篩選

2.1.1 正交試驗(yàn)［3］本實(shí)驗(yàn)選擇CP934P和HPC 兩種黏附劑的比例、含藥量和填充劑乳糖的用量這三個(gè)主要因素，采用L9(34)表進(jìn)行正交試驗(yàn)，以黏附時(shí)間和苦參堿與氧化苦參堿的釋放度為指標(biāo)，用計(jì)分法進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。以黏附片在第2 個(gè)小時(shí)累積釋放百分率的最大值為100 分，每降低1%，則減去1 分;將黏附時(shí)間的最大值定為100 分，每減少1 min，則減去1 分，將兩者的綜合得分作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，正交設(shè)計(jì)見(jiàn)表1，結(jié)果見(jiàn)表2 和表3。

表1 因素水平Tab.1 Factors and levels

表2 正交試驗(yàn)結(jié)果Tab.2 Result of orthogonal experiment

表3 方差分析結(jié)果Tab.3 Analysis result of variance

2.1.2 黏附時(shí)間的測(cè)定方法 將離體大鼠的結(jié)腸黏膜用雙面膠固定于粘有銅片的掛衣鉤上，取黏附片，用2 μL 人工結(jié)腸液潤(rùn)濕1 min 后，貼于黏膜上，然后置于含150 mL 人工結(jié)腸液的燒杯中，(37 ±1)℃恒溫水浴鍋內(nèi)保溫，觀察黏附片的形態(tài)變化，并記錄其從黏膜上脫落的時(shí)間［4］。

2.1.3 釋放度的測(cè)定方法 色譜條件為氨基鍵合硅膠柱(4.6 mm ×250 mm，5 μm);乙腈-無(wú)水乙醇-3%磷酸水溶液(80 ∶10 ∶10)為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)220 nm;體積流量1 mL/min;柱溫25 ℃。

苦參堿標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備［5］精密吸取同一質(zhì)量濃度的苦參堿對(duì)照品溶液(0.628 mg/mL)3、5、7、9、10 μL，分別注入HPLC 色譜儀中，在上述色譜條件下測(cè)定峰面積，得到回歸方程Y =459 035X+1 328.8，r=0.999 9。結(jié)果表明，苦參堿進(jìn)樣量在0.012 6 ～0.062 8 μg 范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

氧化苦參堿標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密吸取同一質(zhì)量濃度的氧化苦參堿對(duì)照品溶液(0.67mg/mL)2、4、6、8、10 μL，分別注入HPLC 色譜儀中，在上述色譜條件下測(cè)定峰面積，得到回歸方程Y =48 945 072.39X -21 773.1，r =0.999 9。結(jié)果表明，氧化苦參堿進(jìn)樣量在1.34 ～6.70 μg 范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

供試品溶液的制備 采用小杯法［6］，轉(zhuǎn)速定為100 r/min，取250 mL 新配制并已脫氣的人工結(jié)腸液為釋放介質(zhì)，溫度控制在(37 ±1)℃，然后分別取黏附片3 g，投到溶出杯中，于第2 小時(shí)后取出其中10 mL，加入0.5 mL 氨水，三氯甲烷萃取5 次，每次15 mL，將三氯甲烷液蒸干，用乙腈-無(wú)水乙醇(4 ∶1)分次溶解，置于5 mL 量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，即得。

陰性對(duì)照樣品溶液的制備 按處方比例稱(chēng)取缺苦參的其余飲片，根據(jù)工藝方法制備陰性對(duì)照樣品，并按照供試品溶液的制備方法制得陰性對(duì)照樣品溶液。

陰性干擾試驗(yàn) 分別精密吸取上述對(duì)照品溶液、供試品溶液及陰性對(duì)照樣品溶液各10 μL，注入高效液相色譜儀中，按上述色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果，在與苦參堿及氧化苦參堿對(duì)照品色譜峰相同的保留時(shí)間內(nèi)無(wú)吸收峰，表明陰性對(duì)照樣品對(duì)這兩種成分的測(cè)定無(wú)干擾，見(jiàn)圖1。

圖1 陰性干擾試驗(yàn)色譜圖Fig.1 Chromatograms for negative interference test

供試品溶液測(cè)定 按上述色譜條件，用外標(biāo)法分別測(cè)定各試驗(yàn)所得樣品中苦參堿及氧化苦參堿的含有量，以測(cè)得的含有量除以微片中苦參堿及氧化苦參堿的含有量，即得兩者的釋放度。

2.1.4 正交試驗(yàn)結(jié)果 見(jiàn)表2。由方差分析(表3)可知，B 因素對(duì)黏附片質(zhì)量有顯著影響(P ＜0.05)，結(jié)合直觀分析，B2＞B3＞B1。因此選擇B2，即藥粉比例為35%。而因素A 和C 影響不顯著，故選擇A3C1，即CP ∶HPC 為1 ∶3，不加乳糖。

2.2 片芯壓片工藝 按上述配方制備原輔料混合物，用95% 乙醇制軟材，過(guò)20 目篩，制顆粒，60 ℃下干燥，加入0.5%硬脂酸鎂，壓片。

2.3 包衣處方的篩選 包衣膜處方主要由成膜材料和增塑劑組成，其中前者是影響制劑釋放性能的主要因素，而后者對(duì)藥物釋放度的影響也較為顯著，因此擬對(duì)包衣處方中這兩者的用量進(jìn)行篩選，以確定包衣的最佳處方。目前，用于pH 依賴(lài)型結(jié)腸包衣的材料主要為丙烯酸樹(shù)脂類(lèi)［7］，國(guó)外為Eudragit S100，而國(guó)內(nèi)為Eudragit Ⅲ，常用的增塑劑有檸檬酸三乙酯(TEC)、聚乙二醇6000、DEP、鄰苯二甲酸二丁酯(DBP)等。文獻(xiàn)［8］ 報(bào)道，DEP 的增塑效果較好，故對(duì)Eudragit S100 與DEP的比例及包衣增重進(jìn)行考察，以優(yōu)選最佳包衣處方。

2.3.1 溶出介質(zhì)的配制［9］人工胃液配制方法為取稀鹽酸16.4 mL，加水800 mL 與胃蛋白酶10 g，搖勻后加水稀釋至1 000 mL，即得;人工腸液配制方法為取0.2 moL/L 磷酸二氫鉀溶液250 mL，加0.2 moL/L NaOH 溶液，調(diào)pH 至6.8，加胰酶10 g，用適量水溶解，混合后加水稀釋至1 000 mL，即得。人工結(jié)腸液配制方法為取磷酸二氫鉀0.41 g和磷酸氫二鉀5.59 g，加水稀釋至1 000 mL，即得。

2.3.2 Eudragit S100 與DEP 比例的篩選 按表4所列處方，分別取Eudragit S100 18、17、16 g，加入適量乙醇放置過(guò)夜，使其溶解，再加入DEP 2、3、4 g，使兩者質(zhì)量比分別為90 ∶10、85 ∶15、80 ∶20，加乙醇稀釋至400 mL，使包衣液的體積分?jǐn)?shù)為5%。然后，取片芯50 g，置于包衣鍋中，轉(zhuǎn)速為35 r/min，以2 mL/min 的體積流量噴灑包衣液，鼓風(fēng)溫度為45 ℃，使包衣增重為10%，即得包衣片，置60 ℃烘箱干燥6 h 后備用。

另外，還考察了包衣片中苦參堿與氧化苦參堿分別在人工胃液250 mL (2 h)、人工腸液250 mL(4 h)、人工結(jié)腸液250 mL (1 h 和2 h)中的釋放情況［10］，體外釋放度的測(cè)定采用“2.1.3”項(xiàng)下方法，結(jié)果見(jiàn)表4。由表可知，各比例包衣膜在人工胃液中均未釋放;在人工腸液中，2 號(hào)處方釋放量最少;在人工結(jié)腸液中，2 h 累積釋放百分率達(dá)72.75%，故選擇Eudragit S100 與DEP 的比例為85 ∶15。

表4 各包衣片中苦參堿及氧化苦參堿累積釋放百分率Tab.4 Overall release rates of matrine and oxymatrine in differently coated tablets

2.3.3 包衣增重的考察［11］按照上述包衣膜處方配制包衣液，并進(jìn)行包衣，分別使其增重5%、8%、13%，并按上述方法測(cè)定各包衣片的釋放度，結(jié)果見(jiàn)表5。有表可知，當(dāng)包衣增重為5%時(shí)，藥物在人工腸液中的釋放量較多;增重為8%和13%時(shí)，藥物均能達(dá)到在人工胃液及腸液中不釋放的要求，但當(dāng)增重為13%時(shí)，藥物在人工結(jié)腸液中釋放較慢，不能達(dá)到在3 h 內(nèi)幾乎完全釋放的目的。因此，綜合各因素考慮，最終選擇包衣增重為8%。

表5 不同包衣增重微片中苦參堿及氧化苦參堿總的釋放百分率Tab.5 Total release rates of matrine and oxymatrine in minitablets with different coating weights

2.3.4 驗(yàn)證試驗(yàn) 按照上述包衣處方和工藝，制備3 批pH 依賴(lài)型腸潰寧生物黏附微片，再按上述方法測(cè)定各包衣片的釋放度，結(jié)果見(jiàn)表6。由表可知，3 批樣品的釋放度均能達(dá)到結(jié)腸定位釋藥的要求，且釋放性能基本穩(wěn)定。

表6 腸潰寧結(jié)腸定位生物黏附微片的累積釋放百分率Tab.6 Overall release rates of bioadhesive colon Changkuining Minitablet

3 討論

3.1 包衣液體積分?jǐn)?shù)的選擇 將包衣液質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別配制成5%、8%、10%，按上述方法及處方進(jìn)行包衣。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，當(dāng)包衣液體積分?jǐn)?shù)較高時(shí)，在包衣過(guò)程中很容易發(fā)生黏片和堵塞噴槍現(xiàn)象，無(wú)法順利進(jìn)行;當(dāng)體積分?jǐn)?shù)為5%時(shí)，能使包衣順利進(jìn)行;但當(dāng)體積分?jǐn)?shù)過(guò)低時(shí)，又會(huì)增加耗時(shí)，而且包衣材料損失較多。綜合各因素考慮，最終選擇包衣液體積分?jǐn)?shù)為5%。

另外，包衣液中常需要加入一定比例的抗黏劑(如滑石粉等)以防止微片粘連，但在包衣過(guò)程中易產(chǎn)生較多細(xì)粉，而滑石粉由于在包衣液中不溶，故將導(dǎo)致混懸不均勻、堵塞噴口，使包衣無(wú)法順利進(jìn)行，而且不加滑石粉的包衣液也能使包衣順利進(jìn)行。因此，選擇不加滑石粉進(jìn)行包衣。

3.2 包衣鍋轉(zhuǎn)速［12］與傾角的考察 通過(guò)調(diào)整轉(zhuǎn)速與傾角，使藥片在包衣鍋內(nèi)充分翻滾，讓每片藥物都有相同的機(jī)會(huì)接觸到包衣液，以保證其包衣膜厚薄均勻，同時(shí)又不會(huì)因藥片劇烈翻滾而導(dǎo)致破裂。通過(guò)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，包衣鍋的轉(zhuǎn)速為35 r/min，包衣傾角為60°。

3.3 進(jìn)風(fēng)溫度的考察［13］進(jìn)風(fēng)溫度是包衣過(guò)程中的重要參數(shù)，溫度過(guò)高，包衣液蒸發(fā)較快，包衣膜不能得到很好的鋪展，從而會(huì)影響其完整性;溫度過(guò)低，又會(huì)導(dǎo)致粘片現(xiàn)象發(fā)生，使得包衣無(wú)法順利進(jìn)行。經(jīng)考察，本實(shí)驗(yàn)進(jìn)風(fēng)溫度控制在40 ～50 ℃，以保證包衣液溶劑及時(shí)揮發(fā)，便于成膜。

3.4 霧化壓力的考察［14］霧化壓力影響包衣液霧滴的大小，壓力過(guò)大，霧化液滴較小，與藥片接觸后包衣材料能均勻分散，包衣膜厚薄均勻，而且連續(xù)性好，制備的包衣片釋放性能穩(wěn)定。試驗(yàn)表明，當(dāng)霧化壓力為0.01 MPa 時(shí)，包衣膜的連續(xù)性及均勻性較好。

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