歐小群， 王 瑾* ， 李 鵬， 黃勤挽， 楊秀梅， 譚茂蘭

(1. 成都中醫(yī)藥大學(xué)，四川 成都611137;2. 中國人民解放軍第452 醫(yī)院，四川 成都610021)

陳皮為蕓香科植物橘Citrus reticulata Blanco 及其栽培變種的干燥成熟果皮?，F(xiàn)陳皮商品規(guī)格有“廣陳皮”和“陳皮”之分，廣陳皮來源于茶枝柑，主要分布在廣州新會;陳皮來源于大紅袍、朱橘、溫州蜜柑等多種栽培變種，主要分布在四川、浙江、福建、江西、湖南等地。由于橘的栽培變種品種繁多，造成自古以來陳皮商品來源復(fù)雜混亂。調(diào)研發(fā)現(xiàn)市場上陳皮商品特別是切制成絲狀飲片后大多有混雜，人為添加多種不能入藥品種的柑皮，如何有效地區(qū)分鑒別是亟待解決的問題。

陳有根等［1］采用GC-MS 方法分析了廣陳皮、大紅袍、溫州蜜柑、福橘4 種陳皮揮發(fā)油成分差異。周欣等［2］采用傅里葉變換紅外光譜法比較廣東新會、汕頭、廣西、上海、江西、四川、湖南7個產(chǎn)地陳皮的差異，發(fā)現(xiàn)僅有產(chǎn)自廣東、廣西的陳皮揮發(fā)油具有2-甲氨基-苯甲酸甲酯成分的一組相關(guān)峰;并用GC-MS 方法比較新會茶枝柑、梧州、溫州、南豐、福州、重慶和貴州興義的陳皮揮發(fā)油差異，發(fā)現(xiàn)新會茶枝柑存在特有的2-甲氨基-苯甲酸甲酯成分［3］。游元元等［4］從顯微特征、揮發(fā)油含有量和薄層鑒別比較了川陳皮及其近緣共13 個品種的差異。

課題組認(rèn)為，對于陳皮及其近緣品種研究，應(yīng)該首先明確鑒定其品種來源，不能僅有產(chǎn)地信息。各種橘皮干皮較難區(qū)分，從鮮果皮入手，能夠獲得明晰的品種信息，再開展內(nèi)在化學(xué)成分的比較研究。藥用植物的有效成分在體內(nèi)的積累程度受生長環(huán)境的影響［5］，廣陳皮有著可替代的藥用價值［6-8］，與生長環(huán)境等有著必然聯(lián)系。本實驗采集來自不同栽培產(chǎn)區(qū)的新會茶枝柑、四川紅橘等近緣品種鮮果皮11 種，包含柑橘屬的橘Citrus reticulata Blanco 及其變種、橙Citrus sinensis 及其變種，以及金橘屬金橘Fortunella margarita。采用GC-MS 方法分析揮發(fā)油成分，比較不同品種的差異，為規(guī)范陳皮的正品、地方習(xí)用品和混淆品提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與試藥

揮發(fā)油提取器 (成都長征化玻有限公司)，BS200S 型精密電子天平(d=0.001 g)，GC 5975C/MS 7890A 型氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(美國Agilent公司)。

正己烷，色譜純，F(xiàn)isher 公司;其余試劑試藥均為分析純，成都市科龍化工試劑廠。收集茶枝柑等11 種鮮果皮見表1，樣品經(jīng)過成都中醫(yī)藥大學(xué)中藥標(biāo)本中心盧先明教授鑒定。

表1 樣品信息Tab.1 Sample information

2 方法與結(jié)果

2.1 供試液制備 將鮮果皮切成5 mm 寬的小塊，稱取80 g，加8 倍量水，用水蒸氣蒸餾法提取6 h，讀數(shù)后收油備用。取各樣品20 μL 揮發(fā)油加1 mL正己烷溶解，微孔濾膜過濾后即為供試液。

2.2 色譜條件 HP-5MS 石英毛細(xì)管色譜柱 (0.25 mm×30 m，0.25 μm);升溫程序為:初始溫度60 ℃，第1 階段以1 ℃/min 的速率上升到80℃并保持10 min，第2 階段以10 ℃/min 上升到250 ℃;載氣為高純度He，載氣體積流量為1 mL/min，進(jìn)樣量為1 μL，分流比10 ∶1，進(jìn)樣口溫度270 ℃。

2.3 質(zhì)譜條件 離子源為EI，電離電壓，進(jìn)樣口溫度270 ℃，檢測器溫度270 ℃，質(zhì)量掃描范圍，m/z 30 ～550 amu，溶劑延遲4 min，質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫NIST08s. L 和NIST08. LIB。

2.4 揮發(fā)油GC-MS 分析結(jié)果 11 種鮮果皮揮發(fā)油總離子流圖見圖1;經(jīng)過計算機核對和質(zhì)譜解析共鑒定出63 種化合物，結(jié)果見表2;成分的面積歸一值結(jié)果見表3。

表2 揮發(fā)油中成分統(tǒng)計Tab.2 Statistical table of volatile oil compositions

表3 揮發(fā)油主成分的面積歸一值結(jié)果Tab.3 Main components’area normalization results

圖1 11 種鮮果皮揮發(fā)油總離子流圖及特征峰的質(zhì)譜圖Fig.1 TIC of eleven tangerine peels and mass spectrogram of peaks 13，16，22，23，24，45

表2 結(jié)果顯示，本實驗共鑒定出揮發(fā)油中50種化合物，壽柑、椪柑和紅橘化合物數(shù)與茶枝柑相當(dāng);表3 結(jié)果顯示，所有品種鮮皮的揮發(fā)油均含有檸檬烯、萜品烯、異松油烯和芳樟醇萜烯烴類化合物。結(jié)合圖1 總離子流圖所示，第1 段中檸檬烯的含有量明顯高于其他化合物，在茶枝柑中含有量最少，13 號峰萜品烯在茶枝柑中含有量最多，16 號峰芳樟醇在金橘中含有量最少;第二段中茶枝柑有明顯的22 號峰香茅醛、23 號峰4-萜品醇、24 號峰α-松油醇，其他品種不全有;第三段中顯示出茶枝柑特有的45 號峰2-甲氨基-苯甲酸甲酯。

2.5 系統(tǒng)聚類分析 以11 種不同鮮皮揮發(fā)油成分為變量進(jìn)行聚類分析。本研究利用SPSS 19.0 軟件，采用組間聯(lián)接法，以Euclidean 距離為測度、峰面積百分率為基準(zhǔn)，聚類分析結(jié)果見圖2。聚類結(jié)果顯示，11 種樣品共分為6 個集合。茶枝柑、金橘、壽柑、紅橘各為一個集合;紐荷爾臍橙、冰糖橙、奉節(jié)臍橙和朋娜臍橙來源于柑橘屬的橙Citrus sinensis 及其變種，聚為一個集合;貢柑、椪柑、砂糖桔來源于柑橘屬的橘Citrus reticulata Blanco 及其變種，聚為一個集合，說明不同種之間的差異性和品種間親緣相似的一致性，不同品種來源的果皮在揮發(fā)油成分上有明顯差別，可作為判別歸屬地的根據(jù)。

圖2 11 種鮮果皮揮發(fā)油成分的聚類分析Fig.2 Cluster analysis of eleven tangerine peels’volatile oil

3 討論

3.1 經(jīng)過成分比較研究發(fā)現(xiàn)，蕓香科柑橘屬和金橘屬的共有成份有檸檬烯、萜品烯、異松油烯和芳樟醇，其中檸檬烯的相對百分含有量在揮發(fā)油中最高，達(dá)到69.86% ～94.62%;廣陳皮 (茶枝柑)中檸檬烯相對百分含有量69.86%是所有果皮中最低的，而β-蒎烯、萜品烯和α-松油烯相對百分含有量較高，并且具有特有成分2-甲氨基-苯甲酸甲酯。結(jié)合前期研究發(fā)現(xiàn)［9］，2-甲氨基-苯甲酸甲酯不僅存在于鮮果皮中，還存在于陳化后的陳皮藥材中，可能正是廣陳皮特有香氣的物質(zhì)基礎(chǔ)所在。以上化學(xué)信息可作為廣陳皮質(zhì)量評價標(biāo)準(zhǔn)之一。

3.2 結(jié)合成分分析和聚類分析，橙類和橘類的區(qū)別在于:橘類特有的化合物有β-蒎烯、樟腦、紫蘇醇、百里香酚、α-萜品烯和欖香烯;橙類特有的化合物是環(huán)辛烷、丁酸辛酯和α-石竹烯，特征成分將不同種果皮區(qū)別，但樣本量過少，僅供參考。茶枝柑因含有特征性成分2-甲氨基-苯甲酸甲酯獨聚一個集合，紅橘的化合物種類最少，且無明顯的特征性成分，單獨聚類;壽柑是雜柑［10］的一種，文獻(xiàn)記載可能是橘橙雜交，與聚類結(jié)果相同;金橘果皮的揮發(fā)油成分與茶枝柑匹配后相似度達(dá)80%以上，因此被聚在茶枝柑以內(nèi)，但金橘外形小，果皮薄，不應(yīng)混入陳皮使用;奉節(jié)臍橙、朋娜臍橙、貢柑、紐荷爾臍橙、冰糖橙與傳統(tǒng)廣陳皮(茶枝柑)和陳皮(紅橘)的相似度小，也不應(yīng)混入陳皮藥用。

3.3 雖然廣陳皮(茶枝柑)與四川陳皮(川陳皮)在揮發(fā)油組成上具有一定的差異，但是兩者在藥效、臨床應(yīng)用上是否具有差異，還需要下一步實驗進(jìn)行驗證。陳皮系多基源且品種來源混亂的中藥之一，本實驗樣本還未采集其傳統(tǒng)地方習(xí)用品如朱橘皮、福橘皮等進(jìn)行對比，今后還需要補充實驗樣本。

致謝:弘真新會陳皮文化有限公司張長征老師、尚書坊陳皮博物館何根旺老師在課題組產(chǎn)地調(diào)研時提供的大力支持和幫助。

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