董 芳，劉 敬，王彥厚*

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測(cè)定卡巴匹林鈣含量的兩種方法比較

董 芳1，劉 敬2，王彥厚1*

目的 建立高效液相色譜法(HPLC)測(cè)定卡巴匹林鈣的含量，并和容量滴定法進(jìn)行對(duì)比研究。方法 色譜柱為美國(guó)熱電C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流動(dòng)相為磷酸-乙腈-水(2∶300∶600)溶液，進(jìn)樣量20 μL，檢測(cè)波長(zhǎng)為228 nm；對(duì)兩種測(cè)定方法分別進(jìn)行了方法學(xué)驗(yàn)證研究。結(jié)果 兩種含量測(cè)定方法在考察濃度范圍內(nèi)均具有良好線性關(guān)系。結(jié)論 采用高效液相色譜法測(cè)定卡巴匹林鈣的含量，該法操作簡(jiǎn)便，專屬性強(qiáng)，結(jié)果準(zhǔn)確。

卡巴匹林鈣；高效液相色譜法；含量測(cè)定；方法比較

0 引言

卡巴匹林鈣(Crbasalate calcium)為乙酰水楊酸鈣與尿素的絡(luò)合物，在水中水解為乙酰水楊酸而發(fā)揮解熱、鎮(zhèn)痛、抗炎和抗風(fēng)濕作用［1］。該藥品最先是由荷蘭DSM公司研制開(kāi)發(fā)(商品名：ASCAL)，于1974年由荷蘭衛(wèi)生當(dāng)局批準(zhǔn)生產(chǎn)，我國(guó)于1990年批準(zhǔn)進(jìn)口卡巴匹林鈣原料，目前有卡巴匹林鈣散和卡巴匹林鈣顆粒兩種劑型［2］?？ò推チ肘}是新一代較理想的解熱鎮(zhèn)痛藥。臨床主要用于感冒發(fā)熱、頭痛、牙痛、神經(jīng)痛、腰痛、肌肉痛、月經(jīng)痛及風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等；另外，小劑量給藥還可預(yù)防心腦血管疾病的發(fā)作。

卡巴匹林鈣的含量測(cè)定采用的是國(guó)家藥典委員會(huì)頒布的國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn) WS1-(X-403)-2004Z 卡巴匹林鈣中收載的容量滴定法［3］。本文參考文獻(xiàn)［4-7］研究了采用HPLC法測(cè)定卡巴匹林鈣的含量，并對(duì)兩種測(cè)定方法進(jìn)行了方法學(xué)驗(yàn)證試驗(yàn)和對(duì)比研究。

1 儀器與試藥

島津高效液相色譜儀(LC-10ATVP液相色譜泵，SPD-10ATVP紫外檢測(cè)器，SIL-20A進(jìn)樣器，美國(guó)熱電色譜柱C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑)；UV757CRT型紫外分光光度計(jì)(上海精密科學(xué)分析儀器有限公司；卡巴匹林鈣(實(shí)驗(yàn)室自制，批號(hào)：130601、130602、130603)；阿司匹林對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：100113-201104，含量：按C9H8O4計(jì)100.0%)；乙腈為色譜純，其余試劑為分析純；水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 容量滴定法測(cè)定含量

2.1.1 線性范圍 精密稱取本品2.4、3.2、4.0、4.8、5.6 g，分別置于250 mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，作為儲(chǔ)備液。為線性測(cè)定濃度的60%、80%、100%、120%、140%，每個(gè)儲(chǔ)備液精密量取25 mL，置250 mL碘瓶中，精密加氫氧化鈉滴定液(0.1 mol/L)25 mL，密塞，放置2 h，加酚酞指示劑3滴，用鹽酸滴定液(0.1 mol/L)滴定，并將滴定結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1 mL氫氧化鈉滴定液(0.1 mol/L)相當(dāng)于18.02 mg的阿司匹林(C9H8O4)。每個(gè)儲(chǔ)備液分別取樣3次，求得消耗滴定液的mL數(shù)的平均值。以樣品每25 mL所含的重量為橫坐標(biāo)(X)，以樣品消耗滴定液的mL數(shù)為縱坐標(biāo)(Y)，線性回歸，得線性回歸方程Y = 42.238 X+0.272 2，r= 0.999 9(n=5)。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 容量滴定法測(cè)定含量線性范圍測(cè)定結(jié)果

濃度比例(%)取樣量(g/25mL)消耗滴定液(mL)123平均值(mL)600.2401514.3014.3014.3614.32800.3209611.0411.0611.0711.061000.401027.667.697.697.681200.480074.394.344.344.361400.560460.780.780.780.78

結(jié)果表明，本法測(cè)定卡巴匹林鈣含量，樣品取樣量在0.240 15 g～0.560 46 g范圍內(nèi)，與消耗的氫氧化鈉滴定液mL數(shù)線性關(guān)系良好。

2.1.2 重復(fù)性試驗(yàn) 精密量取“2.1.1”項(xiàng)下濃度比例為100 %的儲(chǔ)備液25 mL，置250 mL碘瓶中，精密加氫氧化鈉滴定液(0.1 mol/L)25 mL，密塞，放置2 h，加酚酞指示劑3滴，用鹽酸滴定液(0.1 mol/L)滴定，并將滴定結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。重復(fù)取樣6次，RSD= 0.2 %。結(jié)果表明，本法測(cè)定卡巴匹林鈣含量重復(fù)性良好。

2.1.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密量取“2.1.1”項(xiàng)下濃度比例為100 %的儲(chǔ)備液25 mL，置250 mL碘瓶中，室溫放置，分別于0、1、2、4、8 h測(cè)定含量，含量測(cè)定結(jié)果分別為78.08%、78.08%、77.99%、77.99%、78.08%；RSD= 0.1%(n=5)。表明樣品溶液在考察時(shí)間范圍內(nèi)有很好的穩(wěn)定性。

2.1.4 容量滴定法 按照國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn) WS1-(X-403)-2004Z 卡巴匹林鈣中收載的含量測(cè)定方法(容量滴定法)，對(duì)三批卡巴匹林鈣樣品(批號(hào)：130601、130602、130603)進(jìn)行測(cè)定。取本品約 0.4 g，精密稱定，置250 mL碘瓶中，加水25 mL使溶解，精密加氫氧化鈉滴定液(0.1 mol/L)25 mL，密塞，放置2 h，加酚酞指示劑3滴，用鹽酸滴定液(0.1 mol/L)滴定，并將滴定結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1 mL氫氧化鈉滴定液(0.1 mol/L)相當(dāng)于18.02 mg的阿司匹林(C9H8O4)。結(jié)果見(jiàn)表2。

2.2 HPLC法

2.2.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的確定 取“2.2.8”項(xiàng)下對(duì)照品溶液，以流動(dòng)相為參比溶液，照紫外分光光度法在200～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，結(jié)果表明本品在228 nm與277 nm處有最大吸收，選擇228 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

表2 兩種含量測(cè)定方法結(jié)果比較

樣品批號(hào)容量滴定法(%)HPLC法(%)13060178.879.213060279.179.813060378.779.0

2.2.2 色譜條件 島津LC-10ATVP液相色譜泵；日本島津SPD-10ATVP紫外檢測(cè)器；美國(guó)熱電色譜柱C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以磷酸-乙腈-水(2∶300∶600)為流動(dòng)相；進(jìn)樣量20 μL，檢測(cè)波長(zhǎng)為228 nm；理論板數(shù)按阿司匹林峰計(jì)算應(yīng)不低于3 000。

2.2.3 線性范圍 取阿司匹林對(duì)照品適量，精密稱定，用流動(dòng)相制成1.0 mg/mL的溶液，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液1.5、2.0、2.5、3.5、4.0 mL至25 mL量瓶，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，分別取20 μL注入液相色譜儀，記錄阿司匹林的峰面積。以樣品濃度(C)為橫坐標(biāo)，峰面積(A)為縱坐標(biāo)，線性回歸，得線性回歸方程為A=117 566 C+38 403，r=0.999 8(n=5)。結(jié)果表明，阿司匹林對(duì)照品在濃度0.06～0.16 mg/mL范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

2.2.4 精密度試驗(yàn) 取線性范圍項(xiàng)下濃度為0.1 mg/mL的溶液，精密量取20 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積。連續(xù)進(jìn)樣5次，計(jì)算峰面積的RSD為0.28%(n=5)。結(jié)果表明，精密度良好。

2.2.5 重復(fù)性試驗(yàn) 取樣品(批號(hào)：130603)采用HPLC法分別測(cè)定含量6次，平均含量為78.9%，RSD為0.19%(n=6)，表明本法重現(xiàn)性良好。

2.2.6 回收率試驗(yàn) 取卡巴匹林鈣樣品(批號(hào)：130603)約13 mg(共9份)，精密稱定，分別置200 mL量瓶中，加流動(dòng)相溶解，搖勻，分別精密加入阿司匹林對(duì)照品8、10、12 mg，加流動(dòng)相稀釋至刻度，得濃度約為樣品濃度80%、100%、120%的供試品溶液，各濃度樣品平行制備3份樣品，搖勻，過(guò)濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。另取阿司匹林對(duì)照品10 mg，精密稱定，置100 mL容量瓶中，流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。取上述兩種溶液，按“2.2.2”項(xiàng)下的色譜條件，精密量取20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。測(cè)得平均回收率為100.1%，RSD為0.87%(n=9)。表明本測(cè)定方法的準(zhǔn)確度良好。見(jiàn)表3。

表3 卡巴匹林鈣含量測(cè)定(HPLC法)回收率試驗(yàn)結(jié)果

樣品編號(hào)加入阿司匹林對(duì)照品量(mg)測(cè)得值(mg)回收率(%)平均回收率(%)RSD(%)18.88.82100.128.68.73101.538.88.7899.8410.410.52101.1510.510.4899.8100.10.87610.410.3399.3712.412.2899.0812.112.0399.4912.812.92101.0

2.2.7 溶液穩(wěn)定性試驗(yàn) 取線性范圍項(xiàng)下濃度為0.1 mg/mL的溶液，于室溫放置，分別于0、1、2、4、8 h取樣，精密量取20 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積。RSD為1.58 %(n=5)，表明樣品溶液室溫放置8 h穩(wěn)定。

2.2.8 含量測(cè)定(HPLC法) 取自制樣品約13 mg，精密稱定，置100 mL容量瓶中，流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液，取20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取阿司匹林對(duì)照品10 mg，精密稱定，置100 mL容量瓶中，流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液；按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算。結(jié)果見(jiàn)表2。

3 結(jié)論與討論

本文對(duì)容量滴定法和HPLC法測(cè)定卡巴匹林鈣的含量進(jìn)行了比較研究，二者方法學(xué)試驗(yàn)結(jié)果表明：兩種測(cè)定方法均具有較好的專屬性，其線性范圍、穩(wěn)定性、重復(fù)性等符合要求，對(duì)三批樣品的含量測(cè)定結(jié)果基本一致，說(shuō)明兩種含量測(cè)定方法均能滿足樣品質(zhì)量控制要求。

考慮到容量法操作繁雜，測(cè)定時(shí)可能會(huì)在判斷滴定終點(diǎn)時(shí)產(chǎn)生人為誤差，使測(cè)定結(jié)果有差異；目前實(shí)驗(yàn)室均配備了大型儀器設(shè)備，自動(dòng)化程度越來(lái)越高，采用HPLC法測(cè)定含量，將樣品直接用流動(dòng)相溶解，操作簡(jiǎn)便、快捷，專屬性強(qiáng)，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

在采用HPLC法測(cè)定含量確定檢測(cè)波長(zhǎng)時(shí)，將阿司匹林對(duì)照品用流動(dòng)相溶解后進(jìn)行紫外掃描，本品在228 nm與277 nm處有最大吸收，在228 nm波長(zhǎng)的吸光度比277 nm強(qiáng)，為避免噪音等不穩(wěn)定因素的影響，選擇228 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

［1］ 蔣琪英,張玉芝,雷登武,等.乙酰水楊酸配合物的合成與應(yīng)用研究現(xiàn)狀［J］.化工中間體,2007,22(8),26-30.

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［3］ 國(guó)家藥典委員會(huì).WS1-(X-403)-2004Z卡巴匹林鈣［S］.國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn).60:83-85.

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Comparison of two methods for determination of carbasalate calcium

DONG Fang1,LIU Jing2,WANG Yan-hou1*

(1.Zibo Food and Drug Inspection & Testing Center,Zibo 255086,China; 2.Shandong Jincheng Bio-pharmaceutical Co.,Ltd.,Zibo 255130，China)

Objective To establish an HPLC method for determination of carbasalate calcium and compare with the volumetric precipitation method.Methods The Thermo C18column(250 mm×4.6 mm，5 μm)was adopted,the mobile phase was the mixture of phosphoric acid-acetonitrile-water (2∶300∶600),the injection volume was 20 μL,and the detection wavelength was 228 nm.The two methods were validated respectively.Results Two content determination methods had good linear relationship in the concentration range.Conclusion The HPLC method is simple,and with accurate and reliable results,which can be used for the determination of carbasalate calcium.

Carbasalate calcium；HPLC；Determination method；Method comparation

2015-04-22

1.淄博市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，山東 淄博

255086；2.山東金城生物藥業(yè)有限公司，山東 淄博 255130

10.14053/j.cnki.ppcr.201509021

*通信作者