樊 千李 明周玉春薛建國

（1.南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，江蘇南京210029；2.南京中醫(yī)藥大學(xué)，江蘇南京210023）

“瘀熱”型慢性前列腺炎大鼠模型的兩種造模方法比較研究

樊 千1李 明2周玉春2薛建國2

（1.南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，江蘇南京210029；2.南京中醫(yī)藥大學(xué)，江蘇南京210023）

目的：探索和評(píng)價(jià)更符合中醫(yī)“瘀熱”病機(jī)和癥候特點(diǎn)的慢性前列腺炎大鼠模型的造模方法。方法：30只雄性SD大鼠按體重隨機(jī)分為角干組、內(nèi)干組和模擬組，每組10只。角干組于大鼠前列腺背葉注射角叉菜膠，背部皮下注射干酵母混懸液；內(nèi)干組于大鼠前列腺背葉注射內(nèi)毒素，背部皮下注射干酵母混懸液；模擬組于同樣部位注射等量生理鹽水。造模后分別觀察各組大鼠體溫、血液流變學(xué)指標(biāo)變化，第7日取材觀察大鼠前列腺組織病理學(xué)變化。結(jié)果：與模擬組比較，角干組和內(nèi)干組在造模后均出現(xiàn)體溫和血液流變學(xué)指標(biāo)的明顯升高（P＜0.05）。角干組與內(nèi)干組之間體溫差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），但角干組全血黏度明顯高于內(nèi)干組升高（P＜0.05）。角干組大鼠前列腺組織表現(xiàn)為大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)伴慢性肉芽腫性炎癥；內(nèi)干組見少量炎細(xì)胞浸潤(rùn)，間質(zhì)中散在成纖維細(xì)胞；模擬組大鼠前列腺組織中腺腔形態(tài)尚規(guī)則，未見炎細(xì)胞浸潤(rùn)。結(jié)論：角叉菜膠聯(lián)合干酵母混懸液注射所制作的慢性前列腺炎大鼠模型更符合中醫(yī)“瘀熱”病機(jī)和臨床癥候特點(diǎn)，同時(shí)簡(jiǎn)單、便于操作，可用于慢性前列腺炎基礎(chǔ)研究、瘀熱病機(jī)理論及臨床藥理學(xué)研究等。

慢性前列腺炎 瘀熱 動(dòng)物疾病模型 SD大鼠 血液流變學(xué) 前列腺 病理學(xué)

慢性前列腺炎屬中醫(yī)學(xué)“精濁”范疇，其發(fā)病機(jī)制尚不清楚。國醫(yī)大師周仲瑛教授根據(jù)其多年臨證經(jīng)驗(yàn)提出“瘀熱”理論，認(rèn)為瘀熱互結(jié)證不僅見于外感熱病，亦存在于多種疾病的發(fā)展過程中[1]。瘀熱病機(jī)在精濁的發(fā)病過程中亦起到了關(guān)鍵的作用，或外感邪熱入里，或內(nèi)傷久病，致火熱毒邪夾痰、夾濕壅滯血分，搏血為瘀，導(dǎo)致下焦精室蓄血，局部經(jīng)絡(luò)不暢，血脈瘀滯，瘀熱相搏，膠結(jié)難化，使病情纏綿難愈，病機(jī)演變亦變化多端[2]。因此，研究建立符合中醫(yī)“瘀熱”病機(jī)特點(diǎn)的慢性前列腺炎大鼠模型，對(duì)慢性前列腺炎的基礎(chǔ)研究、中醫(yī)瘀熱理論研究和臨床中藥篩選、遣方用藥均具有重要意義。本研究旨在通過對(duì)中醫(yī)瘀熱表征、血液流變學(xué)指標(biāo)以及組織病理學(xué)方面的評(píng)價(jià)，對(duì)兩種造模方法進(jìn)行比較，以探索更符合中醫(yī)“瘀熱”病機(jī)和臨床癥候特點(diǎn)的慢性前列腺炎大鼠模型的制作方法。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 動(dòng)物 雄性健康SD大鼠30只，體重180～220g，購于南京中醫(yī)藥大學(xué) SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室[SCXK（浙）2008-0033]，直腸溫度37.0～38.5℃。

1.2 試劑與儀器 角叉菜膠:規(guī)格100g，上海藍(lán)技科技有限公司，批號(hào):680525。大腸桿菌內(nèi)毒素:規(guī)格10mg（分裝），sigma，批號(hào):L-2880。干酵母:安琪酵母股份有限公司。福爾馬林液:規(guī)格200mL，無錫市江原實(shí)業(yè)技貿(mào)總公司，批號(hào):20130618。生理鹽水:規(guī)格500mL/4.5g，南京小營藥業(yè)集團(tuán)有限公司，批號(hào):2011090902。碘伏消毒液:規(guī)格500mL，上海利康消毒高科技有限公司，批號(hào):310502a。電子天平:型號(hào)MP1002，上海精密儀器儀表有限公司。麥克大夫電子體溫計(jì):北京天天聯(lián)眾科技有限公司（型號(hào)MT1671）。4-0可吸收縫線:美國強(qiáng)生公司（型號(hào)WW9918）。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 分組與處理 雄性SD大鼠30只，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后按體重隨機(jī)分為角干組、內(nèi)干組和模擬組，每組10只。各組大鼠腹腔注射10%水合氯醛（0.3mL/100g）進(jìn)行麻醉，待麻醉完全后，橡皮筋固定四肢，松緊適中，腹部備皮，碘伏消毒，沿大鼠腹中線（恥骨上方1cm處）逐層縱向切開約1.5cm，游離肌肉、腹膜，進(jìn)入腹腔后，分離前列腺及周圍組織器官，充分暴露前列腺組織，1mL注射器于前列腺背葉進(jìn)針。角干組注射角叉菜膠，劑量為5mg/100g；內(nèi)干組注射大腸桿菌內(nèi)毒素，劑量為5μg/100g；模擬組注射等體積生理鹽水。送復(fù)前列腺后逐層縫合腹腔，角干組、內(nèi)干組大鼠背部皮下注射20%干酵母混懸液，劑量為1mL/100g，模擬組同樣部位注射等量生理鹽水。

2.2 瘀熱表征及實(shí)驗(yàn)室檢測(cè) 造模成功后觀察各組大鼠飲水、攝食及活動(dòng)情況，造模后1、3、7日上午9時(shí)使用電子體溫計(jì)測(cè)量大鼠肛溫；第7日大鼠腹尾靜脈采血3mL置于肝素抗凝管中，送南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科檢測(cè)血液流變學(xué)各項(xiàng)指標(biāo)（高切、中切、低切全血黏度值和紅細(xì)胞壓積、紅細(xì)胞聚集指數(shù)）。

2.3 組織病理學(xué)檢測(cè) 第7日取血后大鼠麻醉處死，取前列腺組織觀察大體情況，經(jīng)10%甲醛固定，HE染色，100倍光鏡下觀察前列腺組織形態(tài)學(xué)變化，比較各組大鼠前列腺病變范圍、腺腔形態(tài)、淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)程度、間質(zhì)增生情況。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有數(shù)據(jù)采用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以（±s）表示，組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用Student-Newman-Keuls檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 各組大鼠瘀熱表征比較 造模后角干組大鼠出現(xiàn)明顯的瘀熱表征，表現(xiàn)為舌色紅紫，尾部出現(xiàn)瘀斑，同時(shí)肛溫逐漸升高；內(nèi)干組大鼠出現(xiàn)肛溫升高，但是瘀熱表征不明顯（僅有部分大鼠出現(xiàn)舌色紅紫，未見尾部明顯瘀斑）。模擬組大鼠觀測(cè)其舌色正常，尾部未見瘀斑出現(xiàn)，體溫未見明顯升高。與模擬組比較，角干組、內(nèi)干組大鼠肛溫明顯升高（P＜0.05），但角干組與內(nèi)干組組間比較肛溫差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表1。

3.2 各組大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)變化情況 見表2。角干組、內(nèi)干組大鼠全血黏度 （低切、中切、高切）、紅細(xì)胞壓積、紅細(xì)胞聚集指數(shù)均較模擬組顯著升高（P＜0.05）。角干組與內(nèi)干組比較，全血黏度指標(biāo)差異顯著（P＜0.05），紅細(xì)胞壓積和紅細(xì)胞聚集指數(shù)差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

3.3 各組大鼠前列腺組織病理學(xué)比較 造模后第7日角干組大鼠前列腺組織內(nèi)可見上皮及腺腔形態(tài)不規(guī)則，大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)，伴有慢性肉芽腫性炎癥出現(xiàn)。內(nèi)干組大鼠前列腺組織內(nèi)可見上皮細(xì)胞及腺腔形態(tài)較規(guī)則，間質(zhì)亦可見少量成纖維細(xì)胞，有少量炎細(xì)胞浸潤(rùn)。模擬組大鼠前列腺組織內(nèi)見上皮細(xì)胞為立方或柱狀，雖然腺腔形態(tài)不一，但尚有規(guī)則，間質(zhì)中可見少量成纖維細(xì)胞，未見炎細(xì)胞浸潤(rùn)。見圖1。

4 討論

表1 各組大鼠造模后第1、3、7日肛溫比較

表2 各組大鼠造模后第7日血液流變學(xué)指標(biāo)比較

圖1 各組大鼠前列腺組織病理圖片（HE，×100）

中醫(yī)認(rèn)為精濁以腎虛為本，濕熱為標(biāo)，瘀血為變。但臨床中精濁癥狀往往繁雜，病程遷延難愈，究其原因常為多種病理因素互相膠結(jié)導(dǎo)致，而瘀熱病機(jī)更符合精濁臨床致病過程和病機(jī)特點(diǎn)[2]。

目前構(gòu)建中醫(yī)瘀熱癥候的動(dòng)物模型方法較少，也缺乏公認(rèn)的瘀熱癥候動(dòng)物模型的判定標(biāo)準(zhǔn)，現(xiàn)有文獻(xiàn)中判定標(biāo)準(zhǔn)以動(dòng)物模型表征及微循環(huán)實(shí)驗(yàn)室檢查（血液流變學(xué)、凝血功能等）為主[3]。為了更好地模擬瘀熱病機(jī)在慢性前列腺炎致病過程中的特點(diǎn)并且探索符合中醫(yī)瘀熱臨床癥候的大鼠模型，本研究對(duì)角叉菜膠注射液聯(lián)合活性干酵母混懸液和大腸桿菌內(nèi)毒素聯(lián)合活性干酵母混懸液這兩種造模方法進(jìn)行了對(duì)比研究。目前制作中醫(yī)熱毒血瘀證模型采用較多的方法仍為細(xì)菌內(nèi)毒素[4-5]，而角叉菜膠是為海藻中所提取的硫酸多糖類物質(zhì)，用于組織炎癥和發(fā)熱模型的制備，單用角叉菜膠致“瘀”的作用相對(duì)較強(qiáng)，其制作的大鼠模型可以表現(xiàn)為舌質(zhì)紫紅、尾部瘀斑[6]?；钚越湍妇鞈乙菏侵谱餮装Y反應(yīng)介導(dǎo)的發(fā)熱模型的常用材料，其致“熱”作用明顯[7]。因此，從造模角度來看將角叉菜膠聯(lián)合活性干酵母混懸液作為致病因素更為符合中醫(yī)瘀熱病機(jī)理論特點(diǎn)和臨床癥候表現(xiàn)。

本研究從大鼠模型瘀熱表征、實(shí)驗(yàn)室（血液流變學(xué)）指標(biāo)和前列腺組織病理學(xué)三方面對(duì)兩種造模方法進(jìn)行了探索比較。從瘀熱表征比較，內(nèi)干組大鼠模型僅表現(xiàn)為體溫異常，部分出現(xiàn)舌質(zhì)紅紫，未見明顯尾部瘀斑；角干組大鼠模型表現(xiàn)為舌質(zhì)紅紫、尾部瘀斑，同時(shí)伴隨體溫升高等異常表現(xiàn)。從實(shí)驗(yàn)室（血液流變學(xué)）指標(biāo)比較，兩組大鼠模型均表現(xiàn)為血液黏稠度增高，但角干組升高更加明顯。從大鼠模型前列腺組織病理學(xué)比較，內(nèi)干組大鼠模型前列腺僅有少量慢性炎細(xì)胞浸潤(rùn)，而角干組前列腺腺體內(nèi)出現(xiàn)大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)伴隨慢性肉芽組織增生的異常反應(yīng)。

綜上，角叉菜膠聯(lián)合干酵母混懸液和大腸桿菌內(nèi)毒素聯(lián)合干酵母混懸液兩種方法均可制作瘀熱型慢性前列腺炎大鼠模型，但相比而言角叉菜膠聯(lián)合干酵母混懸液所制作的大鼠模型更符合中醫(yī)“瘀熱”病機(jī)理論特點(diǎn)，瘀熱臨床癥候明顯，實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)及組織病理學(xué)證據(jù)充足，同時(shí)該模型制作簡(jiǎn)單、便于操作，可更好地用于慢性前列腺炎的基礎(chǔ)研究、中醫(yī)瘀熱理論和臨床有效中藥篩選等多方面的研究。但國內(nèi)外對(duì)于瘀熱型慢性前列腺炎大鼠模型的相關(guān)研究仍較少，是否有更優(yōu)化的造模方法還有待進(jìn)一步的探索研究。在今后研究中我們將嘗試從炎癥信號(hào)通路及表觀遺傳學(xué)機(jī)制等方面著手，以本研究的大鼠模型為基礎(chǔ)，從分子生物學(xué)方向進(jìn)一步探尋慢性前列腺炎的發(fā)病機(jī)制，嘗試從微觀分子機(jī)制闡述宏觀中醫(yī)瘀熱本質(zhì)。

[1] 周仲瑛.論瘀熱.南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2006，22（5）：273

[2] 薛建國，樊千.從“瘀熱”論慢性盆腔疼痛綜合征的發(fā)病機(jī)制.江蘇中醫(yī)藥，2012，44（12）：6

[3] 杜正彩，鄧家剛，郝二偉.瘀熱互結(jié)證模型大鼠中醫(yī)表征指標(biāo)量化研究.中華中醫(yī)藥雜志，2012，27（2）：345

[4] 楊進(jìn)，陸平成.家兔“熱毒血瘀證”系列動(dòng)物模型的試制.南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，1995，11（2）：70

[5] 許立，蔣寶平，過偉峰，等.實(shí)驗(yàn)性淤熱證大鼠模型的初步研究.時(shí)珍國醫(yī)國藥，2008，19（12）：2896

[6] 魏陵博，彭敏，戎冬梅，等.通心絡(luò)膠囊對(duì)角叉菜膠所致大鼠血栓形成的影響.中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2006，4（9）：785

[7] 陳秋紅，周小梅，多杰，等.青鵬膠囊解熱鎮(zhèn)痛及抗炎作用實(shí)驗(yàn)研究.山東中醫(yī)雜志，2006，25（6）：407

R697.33

A

1672-397X（2015）03-0077-03

樊千（1985-），男，醫(yī)學(xué)碩士，住院中醫(yī)師，從事中醫(yī)外科學(xué)及男科學(xué)方向的科研、臨床及教學(xué)工作。superjust@126.com

2015-01-04

編輯：吳 寧

江蘇省中醫(yī)藥局科技項(xiàng)目立項(xiàng)計(jì)劃資助課題（LZ13017）